Vybavenie a spôsob prevádzky bakteriologického laboratória. bakteriologické laboratórium. Moderné všeobecné laboratórne vybavenie potrebné pre prevádzku mikrobiologického laboratória

Práca s patogénmi infekčných chorôb si vyžaduje, aby laboratórne priestory boli umiestnené v samostatnej budove alebo boli izolované od nemocničných oddelení, potravinových blokov. Diagnostické laboratóriá by mali mať dva vchody: jeden pre zamestnancov, druhý pre dodávanie materiálu na výskum. Je povolené prijímať materiál cez transferové okno. Priestory laboratória sú rozdelené na "infekčnú" a "čistú" zónu a nachádzajú sa v priebehu analýzy.

„Čistý“ priestor laboratória zahŕňa:

1. Priestor na vrchné oblečenie.
2. Miestnosť na prípravné práce (prípravovňa, umyváreň na prípravu a plnenie živných médií atď.)
3. Sterilizácia.
4. Miestnosť s chladničkou na skladovanie kultivačných médií a diagnostických prípravkov.
5. Miestnosť na odpočinok a jedenie.
6. Dokumentačná miestnosť.
7. Úžitkové miestnosti.
8. Toaleta, WC.

V "infekčnej" zóne sú umiestnené:

1. Miestnosť na príjem a registráciu materiálu prijatého na výskum.

3. Miestnosti na bakteriologický výskum.

4. Miestnosti pre sérologické štúdie.

5. Priestor pre luminiscenčnú mikroskopiu.

6. Miestnosť pre zooentomologickú prácu.

7. Termostatická miestnosť a autokláv.

Priestory, kde sa vykonáva práca so živými organizmami, sú vybavené baktericídnymi lampami.

Úloha lekárskeho mikrobiologického laboratória - diagnostika infekčných chorôb. K tomu sa izoluje patogén a určuje sa imunitná odpoveď tela na zavedenie mikroorganizmov (sérologická diagnostika). Okrem toho vykonajte identifikáciu nosičov patogénnych (patogénnych) mikroorganizmov. Existujú laboratóriá, v ktorých sa vykonávajú virologické štúdie. V špeciálnych sanitárnych a bakteriologických laboratóriách sa vykonávajú štúdie s cieľom identifikovať stupeň mikrobiálnej kontaminácie vonkajšieho prostredia a rôznych predmetov.

laboratórna miestnosť určené na vykonávanie mikrobiologický výskum. Mal by byť priestranný a svetlý. Steny sú natreté svetlou olejovou farbou, podlaha je pokrytá linoleom, laboratórne stoly sú pokryté plastom alebo sklom, čo je vhodné na mokré čistenie a dezinfekciu. Laboratórna miestnosť je vybavená pracovnými stolmi pre lekára a laboranta, miestom na farbiace prípravky, termostatom, chladničkou, odstredivkou, mikroskopom, skrinkami, drezom s teplou a studená voda, plynové horáky (pri nedostatku plynu pracujú s liehovými horákmi).

Počet laboratórnych miestností je určený objemom práce laboratória. Vo veľkých laboratóriách sú oddelené miestnosti na prácu s rôznymi typmi patogénov.

Pracovná plocha je inštalovaná pri okne tak, aby svetlo dopadalo zboku alebo priamo. Na stole je položený horák, bakteriologické slučky, tégliky s dezinfekčným roztokom a vata.

Pred začatím práce sa na stôl položí všetko potrebné na štúdium. Horák je inštalovaný vo vzdialenosti rovnajúcej sa predlaktiu pracovníka, to znamená v polohe, ktorá vylučuje zbytočné pohyby počas práce. Veľkosť plameňa v horáku a správna žiara sa upravia pred začatím práce.

V termostate počas bežného výskumu by mala byť teplota 37°C. Vo veľkých laboratóriách môže byť vybavená špeciálna tepelná miestnosť. Teplota sa zaznamenáva denne.

Ryža. 1 Suchá rúra

V chladničke sa uchovávajú niektoré živné pôdy, diagnostické prípravky, krv, žlč atď.

Na oddelenie pevných častíc od kvapaliny (napríklad erytrocytov zo séra) sa používa centrifúga.

Stojany, riad, suché živné médiá, činidlá atď. sú uložené v skrinkách.

V blízkosti umývadla by mala byť nádoba s dezinfekčným roztokom na čistenie rúk a lekárnička so súpravou predmetov prvej pomoci.

Box je prísne izolovaná miestnosť pre mikrobiologickú prácu v podmienkach vyžadujúcich špeciálnu sterilitu. Defertilizácia vzduchu sa vykonáva pomocou baktericídnych lámp. Prívod dezinfikovaného vzduchu určitej teploty a vlhkosti do boxu cez prívodné a odsávacie vetranie je najlepšia cesta zaistiť nevyhnutné podmienky pre prácu. V boxe zvyčajne pracujú dvaja ľudia. Cez predsieň vojdú do boxu, v ktorom sa prezlečú (župan, papuče, čiapka, maska) a druhými dverami prejdú do boxu.

V boxe nehovoria a vyhýbajú sa zbytočným pohybom.

Miestnosť na prípravu kultivačných médií by mala byť v blízkosti umývacej a sterilizačnej miestnosti. Táto miestnosť by mala mať umývadlo s teplou a studenou vodou, destilátor, sporák (plynový alebo elektrický), skrinky alebo stojany na skladovanie suchých živných médií, chemikálií a sterilného riadu.

umývanie- miestnosť na umývanie a spracovanie riadu, ktorá musí mať drez (so studenou a horúca voda) a tanier. Umývacia miestnosť je vybavená stolmi, stojanmi a riadom na umývanie riadu: čistiace prostriedky, handry, handry.

V sterilizačnej miestnosti sú zariadenia na sterilizáciu čistého riadu, živných médií a dekontaminácie odpadových materiálov: autoklávy, sušiareň atď.

Ak je k dispozícii samostatná prípravovňa, slúži na prípravu, balenie riadu a iné pomocné práce.

V registratúre alebo časti miestnosti, ktorá ju nahrádza, prijímajú a evidujú prijatý materiál na výskum a vydávajú závery mikrobiologického výskumu.

Vivárium- miestnosť na chov pokusných zvierat, dostupná len vo veľkých laboratóriách.

Všetky mikrobiologické, biochemické a molekulárne biologické štúdie mikroorganizmov sa uskutočňujú v špeciálnych laboratóriách, ktorých štruktúra a vybavenie závisí od predmetu štúdia (baktérie, vírusy, huby, prvoky), ako aj od ich cieľovej orientácie (vedecký výskum, diagnostika chorôb). Štúdium imunitnej odpovede a sérodiagnostika chorôb ľudí a zvierat sa uskutočňuje v imunologických a sérologických (sérum - krvné sérum) laboratóriách.

Bakteriologické, virologické, mykologické a sérologické (imunologické) laboratóriá sú súčasťou sanitárnych a epidemiologických staníc (SES), diagnostických centier a veľkých nemocníc. Laboratóriá SES vykonávajú bakteriologické, virologické a sérologické analýzy materiálov získaných od pacientov a osôb s nimi v kontakte, vyšetrujú nosiče baktérií a vykonávajú sanitárne a mikrobiologické štúdie vody, vzduchu, pôdy, produkty na jedenie atď.

V bakteriologických a sérologických laboratóriách nemocníc a diagnostických centier sa vykonáva výskum na diagnostiku črevných, hnisavých, respiračných a iných infekčných ochorení, vykonáva sa mikrobiologická kontrola sterilizácie a dezinfekcie.

Najmä diagnostika nebezpečné infekcie(mor, tularémia, antrax atď.) sa vykonávajú v laboratóriách so špeciálnym režimom, ktorých organizácia a prevádzka sú prísne regulované.

Virologické laboratóriá diagnostikujú ochorenia spôsobené vírusmi (chrípka, hepatitída, poliomyelitída atď.), niektorými baktériami - chlamýdie(ornitóza a pod.) a rickettsie(týfus, Q horúčka atď.). Pri organizácii a vybavení virologických laboratórií zohľadňujú špecifiká práce s vírusmi, bunkovými kultúrami a kuracími embryami, ktoré si vyžadujú najprísnejšiu aseptiku.

Mykologické laboratóriá vykonávajú diagnostiku chorôb spôsobených patogénnymi hubami, pôvodcami mykóz.

Laboratóriá sa zvyčajne nachádzajú v niekoľkých miestnostiach, ktorých plocha je určená rozsahom práce a účelom.

Každé laboratórium má:

a) boxy na prácu s jednotlivými skupinami patogénov;

b) priestory na sérologický výskum;

c) miestnosti na umývanie a sterilizáciu riadu, varenie
živné médiá leniya;

d) vivárium s boxmi pre zdravé a pokusné zvieratá
nyh;

e) registratúra na prijímanie a vydávanie testov.

Spolu s týmito miestnosťami majú virologické laboratóriá boxy na špeciálne spracovanie testovaného materiálu a prácu s bunkovými kultúrami.

Zariadenia pre mikrobiologické laboratóriá

Laboratóriá sú vybavené množstvom povinných prístrojov a prístrojov.

1. Mikroskopické prístroje: biologický imerzný mikroskop s prídavnými zariadeniami (iluminátor, fázový kontrastný prístroj, tmavý kondenzor a pod.), luminiscenčný mikroskop.

2. Termostaty a chladničky.

3. Zariadenia na prípravu živných pôd, roztokov a pod.: prístroje na získavanie destilovanej vody (destilátor), technické a analytické váhy, pH metre, filtračné zariadenia, vodné kúpele, odstredivky.

4. Sada nástrojov na manipuláciu s mikróbmi: bakteriologické slučky, špachtle, ihly, pinzety atď.

5. Laboratórne sklo: skúmavky, banky, Petriho misky, matrace, liekovky, ampulky, Pasteurove a odmerné pipety atď., prístroje na výrobu trubíc z bavlnenej gázy.

Veľké diagnostické komplexy majú automatické analyzátory a počítačový systém na vyhodnocovanie prijatých informácií.

Laboratórium má priestor na farbenie mikroskopických preparátov, kde sú roztoky špeciálnych farbív, liehu, kyselín, filtračný papier a pod. Každé pracovisko je vybavené plynovým horákom alebo liehovinou a nádobou s dezinfekčným roztokom. Pre každodennú prácu musí mať laboratórium potrebné živné pôdy, chemické činidlá, diagnostické prípravky a iné materiály.

Veľké laboratóriá majú termostatické miestnosti na hromadnú kultiváciu mikroorganizmov, nastavenie sérologických reakcií. Na kultiváciu, skladovanie kultúr, sterilizáciu laboratórneho skla a iné účely sa používajú nasledujúce zariadenia.

1. Termostat. Zariadenie, v ktorom sa udržiava konštantná teplota. Optimálna teplota pre rozmnožovanie väčšiny patogénnych mikroorganizmov je 37 "C. Termostaty sú vzduch a voda.

2. Mikroanaerostat. Zariadenie na pestovanie mikroorganizmov v anaeróbnych podmienkach.

3. C0 2 - inkubátor. Zariadenie na vytváranie konštantnej teploty a atmosféry určitého zloženia plynu. Určené na pestovanie mikroorganizmov náročných na plynové zloženie atmosféry.

4. Chladničky. Používa sa v mikrobiologických laboratóriách na skladovanie kultúr mikroorganizmov, živných pôd, krvi, vakcín, sér a iných biologicky aktívnych prípravkov pri teplote okolo 4 °C. Na skladovanie liekov pri teplotách pod 0 ° C sa používajú nízkoteplotné chladničky, v ktorých sa teplota udržiava na -20 ° C alebo -75 ° C.

5. Centrifúgy. Používa sa na sedimentáciu mikroorganizmov, erytrocytov a iných buniek, na separáciu nehomogénnych kvapalín (emulzie, suspenzie). V laboratóriách sa používajú centrifúgy s rôznymi prevádzkovými režimami.

6. Sušiaca a sterilizačná skriňa(Pasterova rúra). Určené na sterilizáciu skleneného laboratórneho skla a iných tepelne odolných materiálov suchým vzduchom.

7. Parný sterilizátor (autokláv). Určené na sterilizáciu prehriatou parou (pod tlakom). V mikrobiologických laboratóriách sa používajú autoklávy rôznych modelov (vertikálne, horizontálne, stacionárne, prenosné).

BAKTERIOLOGICKÉ, VIROLOGICKÉ, MYKOLOGICKÉ, IMUNOLOGICKÉ LABORATÓRIÁ A ICH VYBAVENIE. ZARIADENIE MODERNÝCH MIKROSKOPOV. MIKROSKOPICKÉ METÓDY. METÓDY ŠTÚDIA MORFOLOGIE MIKROORGANIZMOV

Program

1. Pravidlá práce a organizácia mikrobiologických (bakteriologických, virologických, mykologických) laboratórií.

2. Základné prístroje a vybavenie mikrobiologického laboratória.

3. Mikroskopy a mikroskopické zariadenia. Pravidlá práce s ponorným mikroskopom (ciele).

Demonštrácia

1. Usporiadanie a použitie hlavných nástrojov a zariadení používaných v mikrobiologických laboratóriách: termostat, odstredivky, autokláv, sušiareň, nástroje a náčinie.

2. Zariadenie biologického mikroskopu. Rôzne metódy mikroskopie: tmavé pole, fázový kontrast, luminiscencia, elektrón.

3. Prípravky mikróbov (kvasinky a baktérie) rôznymi mikroskopickými metódami.

Zadanie študentom

1. Mikroskopicky a náčrt preparátov kvasinkovitých húb rodu Candida použitím rôzne druhy mikroskopia.

Smernice

Pravidlá pre prácu v mikrobiologických laboratóriách.

Práca v mikrobiologickom laboratóriu liečebný ústav vykonávané s patogénmi infekčných chorôb - patogénnymi mikroorganizmami.

Preto na ochranu pred infekciou musí personál prísne dodržiavať interné predpisy:

1. Všetci zamestnanci musia pracovať v lekárskych plášťoch, čiapkach a odnímateľnej obuvi. Vstup do laboratória bez županu je prísne zakázaný. V nevyhnutných prípadoch si pracovníci na tvár nasadzujú gázovú masku. Práca s obzvlášť nebezpečnými mikróbmi je regulovaná špeciálnymi pokynmi a vykonáva sa v zabezpečených laboratóriách.

2. V laboratóriu je zakázané fajčiť a jesť jedlo.

3. Pracovisko musia byť udržiavané v dobrom poriadku. Osobné veci zamestnancov by mali byť uložené na špeciálne určenom mieste.

4. V prípade náhodného kontaktu s infikovaným materiálom na stole, podlahe a iných povrchoch je potrebné toto miesto starostlivo ošetriť dezinfekčným roztokom.

5. Skladovanie, monitorovanie mikrobiálnych kultúr a ich ničenie sa musí vykonávať v súlade s osobitnými pokynmi. Kultúry patogénnych mikróbov sú registrované v špeciálnom časopise.

6. Na konci práce si ruky dôkladne umyte a v prípade potreby ošetrite dezinfekčným roztokom.

Mikroskopy a mikroskopické metódy

Ryža. 1.1. Mikroskopy.

ale - všeobecná forma mikroskop "Biolam"; b — mikroskop MBR-1: 1 — základňa mikroskopu; 2 - predmetová tabuľka; 3 - skrutky na posúvanie stola predmetov; 4 - terminály lisujúce liek; 5 - kondenzátor; 6 - držiak kondenzátora; 7 - skrutka, zosilňujúca kondenzátor v objímke; 8 - rukoväť na pohyb kondenzátora; 9 - rukoväť irisovej membrány kondenzátora; 10 - zrkadlo; 11 - držiak rúrky; 12 - makrometrická skrutková rukoväť; 13 - rukoväť mikrometrickej skrutky; 14 - revolver cieľov; 15 - šošovky; 16 - naklonená rúrka; 17 - skrutka na upevnenie rúrky; 18 - okulár.

Na mikrobiologické štúdie sa používa niekoľko typov mikroskopov (biologické, luminiscenčné, elektronické) a špeciálne mikroskopické metódy (fázový kontrast, tmavé pole).

V mikrobiologickej praxi sa používajú mikroskopy domácich značiek: MBR-1, MBI-2, MBI-3, MBI-6, "Bio-lam" R-1 atď (obr. 1.1). Sú určené na štúdium tvaru, štruktúry, veľkosti a ďalších vlastností rôznych mikróbov, ktorých veľkosť nie je menšia ako 0,2-0,3 mikrónov.

Ponorná mikroskopia

Používa sa na zvýšenie rozlíšenia metódy svetelná mikroskopia. Rozlišovacia schopnosť systému svetelnej optickej mikroskopie je určená vlnovou dĺžkou viditeľného svetla a numerickou apertúrou systému. Číselná apertúra udáva veľkosť uhla maximálneho kužeľa svetla vstupujúceho do šošovky a závisí od optických vlastností (refrakčnej sily) média medzi objektom a šošovkou objektívu. Ponorenie šošovky do média (minerálny olej, voda), ktoré má vysoký index lomu blízky indexu lomu skla, zabraňuje rozptylu svetla od objektu.

Ryža. 1.2. Priebeh lúčov v imerznom systéme, n je index lomu.

Ryža. 1.3. Dráha lúčov v kondenzoroch tmavého poľa a je paraboloidný kondenzor; b — kardioidný kondenzátor; 1 - šošovka; 2 - imerzný olej; 3 - príprava; 4 - zrkadlový povrch; 5 - membrána.

Dosiahne sa tak zvýšenie numerickej apertúry, a teda aj rozlíšenia. Pre imerznú mikroskopiu sa používajú špeciálne imerzné šošovky, vybavené štítkom (MI - olejová imerzia, VI - vodná imerzia). Hraničné rozlíšenie ponorného mikroskopu nepresahuje 0,2 µm. Priebeh lúčov v imerznom systéme je znázornený na obr. 1.2.

Celkové zväčšenie mikroskopu je určené súčinom zväčšenia objektívu a zväčšenia okuláru. Napríklad zväčšenie mikroskopu s imerzným objektívom 90 a okulárom 10 je: 90 x 10 = 900.

Mikroskopia v prechádzajúcom svetle (mikroskopia v jasnom poli) používa sa na štúdium zafarbených predmetov vo fixných preparátoch.

Mikroskopia v tmavom poli. Používa sa na intravitálne štúdium mikróbov v natívnych nefarbených prípravkoch. Mikroskopia v tmavom poli je založená na fenoméne difrakcie svetla pri bočnom osvetlení častíc suspendovaných v kvapaline ( Tyndallov efekt). Účinok sa dosahuje pomocou paraboloidného alebo kardioidného kondenzátora, ktorý nahrádza klasický kondenzátor v biologickom mikroskope (obr. 1.3). Pri tomto spôsobe osvetlenia vstupujú do šošovky iba lúče odrazené od povrchu objektu. Výsledkom je, že na tmavom pozadí (neosvetlené zorné pole) sú viditeľné jasne svietiace častice. Prípravok má v tomto prípade formu znázornenú na obr. 1.4, b (na vložke).

Fázová kontrastná mikroskopia. Určené na štúdium natívnych drog. Zariadenie s fázovým kontrastom umožňuje vidieť priehľadné predmety v mikroskope. Svetlo prechádza rôznymi biologickými štruktúrami rôznymi rýchlosťami, ktoré závisia od optickej hustoty objektu. V dôsledku toho dochádza k zmene fázy svetelnej vlny, ktorú oko nevníma. Fázové zariadenie, ktoré obsahuje špeciálny kondenzor a šošovku, premieňa zmeny fázy svetelnej vlny na viditeľné zmeny amplitúdy. Tým sa dosiahne zvýšenie rozdielu v optickej hustote objektov. Získavajú vysoký kontrast, ktorý môže byť pozitívny alebo negatívny. Pozitívny fázový kontrast sa nazýva tmavý obraz predmetu vo svetlom zornom poli, negatív - svetlý obraz predmetu na tmavom pozadí (pozri obr. 1.4; na vložke).

Na mikroskopiu s fázovým kontrastom sa používa bežný mikroskop a prídavné zariadenie s fázovým kontrastom KF-1 alebo KF-4 (obr. 1.5), ako aj špeciálne iluminátory.

Luminiscenčná (alebo fluorescenčná) mikroskopia. Na základe fenoménu fotoluminiscencie.

Luminiscencia- žiara látok, ku ktorej dochádza pod vplyvom vonkajšieho žiarenia: svetlo, ultrafialové, ionizujúce atď Fotoluminiscencia - luminiscencia objektu pod vplyvom svetla. Ak osvetlíte luminiscenčný objekt modrým svetlom, potom vyžaruje lúče červenej, oranžovej, žltej alebo zelenej. Výsledkom je farebný obraz objektu.

Ryža. 1.5. Zariadenie s fázovým kontrastom, a - fázové objektívy; b - pomocný mikroskop; c - fázový kondenzátor.

Vlnová dĺžka emitovaného svetla (farba luminiscencie) závisí od fyzikálno-chemickej štruktúry luminiscenčnej látky.

Primárny luminiscencia biologických objektov (vlastný, alebo bioluminiscencia) sa pozoruje bez predbežného zafarbenia v dôsledku prítomnosti vlastných luminiscenčných látok, sekundárne (indukované) - vzniká v dôsledku farbiacich prípravkov so špeciálnymi luminiscenčnými farbivami - fluorochrómy(akridínový pomaranč, auromín, korifosfín atď.). Luminiscenčná mikroskopia má oproti konvenčným metódam množstvo výhod: schopnosť skúmať živé mikróby a detegovať ich v testovanom materiáli v nízkych koncentráciách vďaka vysoký stupeň kontrast.

V laboratórnej praxi sa fluorescenčná mikroskopia široko používa na identifikáciu a štúdium mnohých mikróbov.

Elektrónová mikroskopia. Umožňuje pozorovať objekty, ktorých rozmery presahujú rozlíšenie svetelného mikroskopu (0,2 mikrónu). Na štúdium vírusov sa používa elektrónový mikroskop, jemná štruktúra rôzne mikroorganizmy, makromolekulárne štruktúry a iné submikroskopické objekty. Svetelné lúče sú v takýchto mikroskopoch nahradené prúdom elektrónov, ktorý má pri určitých zrýchleniach vlnovú dĺžku asi 0,005 nm, t.j. takmer 100 000-krát menšia ako vlnová dĺžka viditeľného svetla. Vysoké rozlíšenie elektrónového mikroskopu, dosahujúce 0,1-0,2 nm, umožňuje získať celkové užitočné zvýšenie až o 1 000 000.

Spolu so zariadeniami "priesvitného" typu používajú rastrovacie elektrónové mikroskopy, poskytujúci reliéfny obraz povrchu predmetu. Rozlišovacia schopnosť týchto zariadení je oveľa nižšia ako u elektrónových mikroskopov typu "prenos".

Pravidlá pre prácu s mikroskopom

Práca s akýmkoľvek svetelným mikroskopom zahŕňa nastavenie správneho osvetlenia zorného poľa a preparátu a jeho mikroskopovanie s rôznymi objektívmi. Osvetlenie môže byť prirodzené (denné svetlo) alebo umelé, na čo sa používajú špeciálne svetelné zdroje - iluminátory rôznych značiek.

Pri mikroskopovaní prípravkov pomocou ponornej šošovky by sa malo prísne dodržiavať určité poradie:

1) kvapnite kvapku imerzného oleja na pripravený a zafarbený náter na podložnom sklíčku a položte ho na podložný stôl, pričom ho upevnite svorkami;

2) otočte revolverom k značke imerzného objektívu 90x alebo 100x;

3) opatrne spustite tubus mikroskopu, kým sa šošovka neponorí do kvapky oleja;

4) nastavte približné zaostrenie pomocou makrometrickej skrutky;

5) vykonajte konečné zaostrenie prípravku pomocou mikrometrovej skrutky, pričom ju otáčajte vo vnútri iba jedno otočenie. Nedovoľte, aby sa šošovka dostala do kontaktu s
paratómiu, pretože to môže viesť k rozbitiu krycieho skla alebo prednej šošovky objektívu (voľná vzdialenosť imerzného objektívu je 0,1–1 mm).

Na konci mikroskopu, odstráňte olej z imerznej šošovky a presuňte revolver na malú 8x šošovku.

Pre mikroskopiu v tmavom poli a mikroskopiu s fázovým kontrastom sa používajú natívne prípravky ("rozdrvená" kvapka atď., pozri tému 2.1); mikroskopovaný objektívom 40x alebo špeciálnym imerzným objektívom s irisovou clonou, ktorý umožňuje nastaviť numerickú apertúru od 1,25 do 0,85. Hrúbka sklíčok by nemala presiahnuť 1-1,5 mm, krycie sklíčka - 0,15-0,2 mm.

Regulácia pracovných podmienok s patogénmi infekčných chorôb sa vykonáva v súlade so stupňom nebezpečenstva mikroorganizmov pre ľudí. Na tomto základe boli identifikované štyri skupiny patogénnych biologických činiteľov (PBA):

Skupina I: patogény obzvlášť nebezpečných infekcií (mor, kiahne atď.)

Skupina II: patogény vysoko nákazlivých bakteriálnych, plesňových a vírusové infekcie(antrax, cholera, besnota atď.)

Skupina III: pôvodcovia bakteriálnych, plesňových, vírusových a protozoálnych infekcií identifikovaní ako nezávislé nozologické formy (čierny kašeľ, tetanus, tuberkulóza atď.)

Skupina IV: pôvodcovia bakteriálnej, plesňovej, vírusovej septikémie, meningitídy, pneumónie, enteritídy, toxických infekcií, akútnej otravy(Pseudomonas aeruginosa atď.).

Väčšina mikrobiologických laboratórií pracuje s PBA skupiny III a IV a iba špecializované laboratóriá sa zaoberajú štúdiom patogénov obzvlášť nebezpečných infekcií (skupina I a II).

Základné laboratóriá pracujúce s PBA skupiny III a IV musia spĺňať množstvo požiadaviek (samostatná budova alebo samostatný vchod, dostupnosť systémov zásobovania vodou a elektrinou, vykurovanie, vetranie atď.) a disponovať potrebným vybavením priestorov v súlade s výrobnou kapacitou. a rozsah vykonaných štúdií. Každé laboratórium by malo mať „čistú“ a „špinavú“ oblasť.

Zóna „špinavá“ zahŕňa miestnosti na príjem a evidenciu materiálu, boxy a miestnosti na mikrobiologický výskum, termostat, autokláv na dezinfekciu materiálu. Okná a dvere vo všetkých miestnostiach musia byť hermeticky uzavreté. Miestnosti na prácu so živými mikroorganizmami by mali byť vybavené baktericídnymi lampami, prípadne by mali mať biologické bezpečnostné skrinky. Prívodné a odsávacie vetranie "špinavej" zóny musí byť vybavené jemnými filtrami pre odpadový vzduch. Povinné označovanie stolov, autoklávov, nádob s dezinfekčnými roztokmi, stojanov na čistý a infikovaný materiál. Laboratórium by malo byť vybavené špeciálnym nábytkom, mať hladké povrchy podlahy a stien, ktoré sú odolné voči čistiacim a dezinfekčným prostriedkom.

„Čistá“ zóna zahŕňa priestory pre prípravné práce (umývareň, prípravovňa, miestnosť na prípravu a plnenie živných médií a pod.), miestnosť na prácu s dokumentáciou, miestnosti s chladničkami na skladovanie živných médií a diagnostických prípravkov, šatník na vrchné oblečenie, miestnosť na oddych . V „čistej“ zóne je možné pracovať s neživým PBA (sérologické, molekulárne genetické, biochemické štúdie).

Zabezpečenie bezpečnosti práce s patogénnymi mikroorganizmami zahŕňa dva hlavné faktory: technický a ľudský. Technickým faktorom je dostupnosť „čistých“ a „špinavých“ zón, zariadení, ochranných systémov atď. potrebných pre prácu. Ľudským faktorom je správnosť ľudského konania na zaistenie bezpečnosti, úroveň odbornosti v odbornom vybavení, znalosť možných zdrojov a mechanizmov nákazy, vhodný výcvik a výcvik.

S prácou vo vzdelávacom bakteriologickom laboratóriu sú spojené aj dva nebezpečné faktory – mikroorganizmy spôsobujúce infekčné ochorenia a otvorený oheň, čo si vyžaduje dodržiavanie protiepidemických a protipožiarnych opatrení. Žiaci sú povinní oboznámiť sa s bezpečnostnými pravidlami a dôsledne ich dodržiavať:

Potrebné:

Pracujte v lekárskych plášťoch s dlhými rukávmi, lekárskymi čiapkami a návlekami na topánky;

Osobné veci uchovávajte na špeciálne určenom mieste, vrchné oblečenie nechajte v šatni;

Každý typ činnosti sa vykonáva v určitej oblasti: práca s mikroorganizmami - na špeciálne vybavenom laboratórnom stole, vypĺňanie protokolov - na pracovnej ploche;

V prípade kontaktu s infikovaným materiálom na stole, podlahe a iných predmetoch ihneď informovať učiteľa a dezinfikovať;

· Infikované materiály by mali byť umiestnené v pevných vodotesných nádobách alebo nádobách s dezinfekčným roztokom, ktoré sú pred odstránením z laboratória uzavreté.

Dvere laboratória musia byť počas práce zatvorené.

Na konci práce si dôkladne umyte ruky a v prípade potreby ošetrite dezinfekčným roztokom.

jesť v laboratóriu

nasajte kvapalinu do pipety ústami

zapáľte jednu duchovnú lampu od druhej

nosiť horiacu alkoholovú lampu

Po ukončení zamýšľaného používania nechajte liehovú lampu horieť

Na pracovisku ponechajte nezafixované prípravky, Petriho misky s kultúrami a iné pomôcky s infekčným materiálom

dotknite sa rukou testovaného materiálu v Petriho miskách s nasadenými očkami

Bakteriologické laboratórium a pravidlá práce v ňom. Klasifikácia mikroorganizmov. Morfológia baktérií. Metódy na určenie typu mikróbov. bakterioskopická metóda. Mikroskopická technika s imerzným systémom

Zhrnutie lekcie

Medicína a veterinárstvo

1. LEKCIA TÉMA HODINY: Bakteriologické laboratórium a pravidlá práce v ňom. Klasifikácia mikroorganizmov. Morfológia baktérií. Metódy na určenie typu mikróbov. bakterioskopická metóda. Mikroskopická technika s imerzným systémom. CIEĽ UČENIA JE...

AKTIVITA 1

TÉMA LEKCIE : Bakteriologické laboratórium a pravidlá práce v ňom. Klasifikácia mikroorganizmov. Morfológia baktérií. Metódy na určenie typu mikróbov. bakterioskopická metóda. Mikroskopická technika s imerzným systémom.

CIEĽ UČENIA: Oboznámte sa s prístrojom bakteriologického laboratória a pravidlami práce v ňom. Oboznámte sa s princípmi klasifikácie mikroorganizmov. Študovať morfologické znaky baktérií a metódy určovania typu mikróbov. Zvládnuť bakterioskopickú metódu výskumu a techniku ​​mikroskopovania ponorným systémom.

CIELE HODINY:

1. Oboznámte sa so štruktúrou bakteriologického laboratória a pravidlami práce v ňom.

2. Oboznámiť sa so zásadami klasifikácie mikroorganizmov.

3. Študovať morfologické znaky baktérií a metódy určovania typu mikróbov.

4. Osvojiť si techniku ​​mikroskopie s imerzným systémom.

Bakteriologické laboratórne zariadenie

Bakteriologické laboratórium je určené na štúdium materiálov obsahujúcich patogény bakteriálne infekcie, na stanovenie sanitárnych a mikrobiologických ukazovateľov, kontrolu stavu a napätia špecifickej imunity a ďalšie mikrobiologické štúdie. Bakteriologické laboratórium by malo byť umiestnené v miestnostiach izolovaných od ostatných laboratórií s potrebné vybavenie a nábytok. Laboratórium by malo mať samostatný vchod, šatník a sprchu. Bakteriologické laboratórium by malo zahŕňať tieto priestory:

Miestnosť na príjem a registráciu materiálov;

Boxové miestnosti na mikrobiologický výskum;

Autokláv;

umývanie;

Vivárium.

Miestnosti pre mikrobiologický výskum sú vybavené termostatmi, chladničkami, odstredivkami, váhami, vodnými kúpeľmi a elektromagnetickými miešadlami. Potrebné vybavenie je umiestnené na stoloch. Práca s infikovaným materiálom sa vykonáva v krabica s predboxom . Pri vchode do boxu by mala byť podložka napustená dezinfekčným prostriedkom. V škatuli sa prijaté vzorky rozoberú, pripravia sa a fixujú odtlačky rozmazania, uskutočňujú sa očkovania mikroorganizmami na živné pôdy. Preto sú v boxe umiestnené stoly, na ktorých sú umiestnené nástroje potrebné na prácu: nádoby s dezinfekčnými prostriedkami na použitý riad, stojany na skúmavky, skúmavky a Petriho misky so živnými pôdami, sterilné pipety, mažiare atď., uzávery, masky a tiež v šatni by mala byť vymeniteľná obuv. Do predsiene sa zmestia termostaty, chladničky, odstredivky a ďalšie zariadenia. V boxoch a predboxoch sa mokré čistenie, dezinfekcia a ožarovanie baktericídnymi lampami vykonáva denne 30-40 minút pred a po práci.

V autokláve je potrebné mať dva autoklávy: jeden autokláv na čisté materiály (na sterilizáciu skla, živných médií, nástrojov); ďalší autokláv na infikované materiály (na likvidáciu infikovaných nástrojov a materiálov).

umývanie určený na umývanie riadu. Riad, pipety a nástroje kontaminované infikovaným materiálom by sa mali umývať až po sterilizácii. Má sušiace skrine.

vivárium sa vzťahuje na priestory používané na chov laboratórnych zvierat. Vo viváriu je potrebné mať karanténne oddelenie, miestnosti pre pokusné a zdravé zvieratá, miestnosti na umývanie a dezinfekciu klietok, inventár a kombinézy, kuchyňu na prípravu stravy, špajzu, krmivo, spaľovňu. Všetky miestnosti terária by mali byť od seba izolované.

Pravidlá pre prácu v bakteriologickom laboratóriu

Pracovníci laboratória musia dodržiavať tieto pravidlá:

1. Je dovolené pracovať v špeciálnom oblečení - župan a klobúk. V boxe pracujú v sterilnom plášti, maske, šiltovke, v prípade potreby si nasadia gumené rukavice a okuliare. Určite si vymeňte topánky.

2. Je zakázané opúšťať laboratórium v ​​talároch alebo nosiť vrchný odev cez talár.

3. V laboratóriu je zakázané fajčiť a jesť jedlo.

4. Všetok materiál vstupujúci do laboratória na analýzu by sa mal považovať za infikovaný. Preto treba byť pri vybaľovaní materiálu opatrný. Nádoby by sa mali z vonkajšej strany utrieť dezinfekčným roztokom a umiestniť na podnosy alebo do kyviet.

5. V prípade kontaktu s infikovaným materiálom na župane, rukách, stole, obuvi je potrebné vykonať dezinfekciu a informovať o tom vedúceho laboratória.

6. Infikovaný materiál sa musí zničiť autoklávovaním. Nástroje, ako aj povrch pracovnej plochy po práci sú dezinfikované.

7. Je zakázané vynášať zariadenia, inventár, materiály z laboratória bez ich predbežnej dezinfekcie.

8. Pipety, podložné sklíčka a krycie sklíčka a iné používané pomôcky sa dezinfikujú ponorením do dezinfekčného roztoku.

9. Po ukončení práce sa pracovisko dá do poriadku a dôkladne vydezinfikuje. Kultúry mikroorganizmov potrebné pre ďalšiu prácu sú uložené v chladničke.

Bakteriologické laboratórium vedie nasledujúcu dokumentáciu:

1. Kniha inventára muzeálnych kmeňov kultúr.

2. Denník pohybu materiálu v laboratóriu.

3. Denník sterilizácie a zničenia infikovaného materiálu.

4. Register infikovaných pokusných zvierat.

5. Journal of research (expertise).

Klasifikácia mikroorganizmov

Klasifikácia je rozdelenie organizmov na základe účtovania ich spoločné znaky do skupín resp taxóny . Klasifikácia je založená na vonkajšie znaky organizmov (fenotyp) agenetické vlastnostiorganizmov (genotyp).

momentálne mMikroorganizmy sa delia na tieto formy:

1. Nebunkové formy:

Prióny;

viroidy;

Vírusy.

2. Bunkové formy:

2.1. Prokaryoty:

Bakteriálna doména:

Baktérie s tenkou bunkovou stenou (gram-negatívne);

Hrubostenné baktérie (grampozitívne);

Baktérie bez bunkovej steny (mykoplazma).

Doména Archaea:

Archaebaktérie.

2.2. Eukaryoty:

prvoky;

Huby.

Klasifikácia živého sveta je založená na type bunkovej štruktúry - eukaryotická alebo prokaryotická. Hlavné rozdiely medzi prokaryotickou (bakteriálnou) bunkou a eukaryotickou bunkou sú: absencia nasledujúcich štruktúr: formalizované jadro (čiže jadrová membrána), intracelulárne membrány, jadrá, Golgiho komplex, lyzozómy, mitochondrie.

Klasifikácia mikróbov používa nasledovnétaxonomické kategórie: kráľovstvo, oddelenie, trieda, rád, čeľaď, rod, druh. OHlavnou taxonomickou jednotkou je druh.Názov mikroorganizmov sa prideľuje v súlade s pravidlami Medzinárodného kódexu nomenklatúry baktérií. používané na označenie bakteriálnych druhov.dvojitá (binárna) nomenklatúra, navrhnutý v XVIII storočia od Carla Linného. Podľa nomenklatúry sa najprv píše latinkou rodové meno (generický názov) a potom - názov druhu (názov druhu). Ak je mikroorganizmus identifikovaný iba podľa rodu, potom sa namiesto názvu druhu napíše slovo sp. (druh - vyhliadka). Generická príslušnosť mikróbu označuje nejaký morfologický znak alebo meno vedca, ktorý mikrób objavil, a príslušnosť druhu označuje buď typ kolónií alebo biotop mikroorganizmu. Napríklad, Escherichia coli naznačuje, že mikrób objavil T. Escherich a mikrób žije v čreve.Tvorbu a používanie vedeckých názvov mikroorganizmov upravuje Medzinárodný kód nomenklatúry baktérií, Medzinárodný kód botanickej nomenklatúry (huby), Medzinárodný kód zoologickej nomenklatúry (protozoá) a rozhodnutia Medzinárodného výboru pre taxonómiu z r. Vírusy.

Baktérie sú veľmi variabilné. Na vnútrodruhovú diferenciáciu baktérií, ktoré sa líšia určitým znakom, sa používa pojem „variant“ (skrátene „var“). Prideľte varianty, ktoré sa líšia v antigénnych charakteristikách ( sérovary ), varianty odolné voči bakteriofágom ( fagovary ), ako aj varianty, ktoré sa líšia biochemickými ( chemovary ), biologické alebo kultúrne vlastnosti ( biovary).

V mikrobiológii sa používajú odborné pojmy: čistá kultúra, zmiešaná kultúra, kmeň, klon.

kultúra - súbor mikroorganizmov pestovaných na hustej alebo tekutej živnej pôde v laboratóriu. Kultúra mikroorganizmov pozostávajúca z jedincov rovnakého druhu sa nazývačistá kultúra. zmiešaná kultúranazývaná zmes mikroorganizmov odlišné typy pestované v živnej pôde pri výseve skúmaného materiálu alebo keď sa do živnej pôdy naočkovanej jedným druhom mikróbov dostanú iné druhy mikroorganizmov z vonkajšieho prostredia.

Kmeň (nemecké stammen - vyskytujú sa) - ide o čistú kultúru určitého typu mikroorganizmu, izolovanú zo študovaného materiálu, odobratú v určitom okamihu z konkrétneho objektu.

Klon (grécky klon - vrstvenie) - ide o potomstvo (kultúru) jednej materskej bunky (vírusovej častice) určitého druhu mikroorganizmov.

Princípy klasifikácie mikroorganizmov

Minimálny zoznam údajov potrebných na popis baktérií zahŕňa nasledujúce funkcie.

1. Morfologické a farbiace vlastnosti -veľkosť, tvar, bunky, prítomnosť tobolky, spóry, bičíky, schopnosť farbiť sa farbivami.

2. Typ dýchania – potreba o plynný kyslík.

3. Biochemické vlastnosti -schopnosť fermentovať sacharidy, štiepiť bielkoviny.

4. Antigénna štruktúra - prítomnosť antigénov.

5. Citlivosť na bakteriofágy.

6. Chemické zloženie - obsah a zloženie sacharidov, lipidov, bielkovín.

7. Genetický vzťah s inými baktériami.

V mikrobiológii boli vytvorené determinanty na identifikáciu mikroorganizmov: „Kľúč k baktériám a aktinomycetom“ od N.A. Krasilnikova (1949), „Determinant mikróbov“ od R.A. Ziona (1948) a „Kľúč k baktériám“ od D.Kh. Burgi. Najbežnejšia je klasifikácia amerického bakteriológa D.Kh. Burgi.Bergeyho determinant systematizuje všetky známe baktérie do 4 sekcií:

Oddelenie I. Gracilicutes (lat. gracilis - pôvabný, tenký, cutis - koža) - druh s tenkou bunkovou stenou, farbenie gramnegatívne.

Oddiel II. Firmicutes (lat. firmus – silný, cutis - koža) - baktérie s hrubou bunkovou stenou, farbenie gram-pozit.

Oddiel III. Tenericutes (lat. tener - jemný, cutis - koža) - baktérie, ktoré nemajú bunkovú stenu - mykoplazma.

Oddiel IV. Mendosicutes (lat. mendosus - nesprávne, cutis - koža) - archebaktérie. Toto oddelenie zahŕňametánotvorné, síru oxidujúce, mykoplazmám podobné, termoacidofilné a iné baktérie najstaršieho pôvodu.

Morfológia baktérií

Baktérie nie sú viditeľné voľným okom. Študujú sa pomocou svetelného a elektrónového mikroskopu. Bakteriálne bunky sa merajú v mikrometroch (1 µm sa rovná 10-3 mm) a prvky jemnej štruktúry baktérií sa merajú v nanometroch (1 nm sa rovná 10-3 um). Priemerná veľkosť baktérií je 0,5-3 mikrónov.

Baktérie sú rozdelené do 3 hlavných skupín podľa tvaru buniek:

Sférické formy alebo koky;

tyčovité formy;

Spletité tvary.

koky majú guľovitý tvar vo forme pravidelnej gule, elipsy, fazule. V závislosti od relatívnej polohy buniek po delení existujú nasledujúce typy koky:

mikrokoky rozdelené v rôznych rovinách a usporiadané jednotlivo, v pároch alebo náhodne;

Stafylokoky rozdelené v rôznych rovinách a usporiadané do zhlukov;

diplokoky rozdelené v jednej rovine, usporiadané do párov;

streptokoky rozdelené v jednej rovine, usporiadané vo forme reťaze;

tetrakoky rozdelené do dvoch vzájomne kolmých rovín usporiadaných do štyroch;

Sarcins delia sa v troch na seba kolmých rovinách a vytvárajú pravidelné balíčky po 8-16 bunkách.

tyčinkovité baktériemajú cylindrický tvar so zaoblenými, špicatými alebo tupými koncami. Baktérie v tvare tyčinky sú rozdelené do 2 skupín:

baktérie - tyčinky, ktoré netvoria spóry;

bacily - tyčinky tvoriace výtrusy. Tyčinky, v ktorých priemer spór presahuje šírku vegetatívnej bunky, sa nazývajú klostrídie.

Podľa veľkosti tyčinkovité baktérie sa delia do skupín:

Malé - do 1,5 mikrónu;

Stredná veľkosť (1,5 - 3 mikróny);

Veľké (viac ako 3 mikróny).

Podľa tvaru koncov rozlišujú:

Zaoblené (E. coli);

Odrezaný (pôvodca antraxu);

Špicatý (kaulobacter);

Zahustený (pôvodca záškrtu);

Rozštiepené (bifidobaktérie).

Podľa vzájomnej polohy buniek:

Náhodne lokalizované (salmonella);

Usporiadané v pároch (diplobaktérie);

Reťazce (streptobaktérie);

Vo forme kefového dreva (mycobacterium tuberculosis);

Vo forme balíčkov cigariet (kauzálny činiteľ lepry);

Pod uhlom (pôvodca záškrtu).

Spletité baktérie kombinovať:

Vibrios - majú cylindrický zakrivený tvar, tvoriaci 1/2-1/4 zvlnenia špirály, pripomínajúci tvarom čiarku;

Spirilla majú formu špirálovo skrútených palíc so 4-6 otáčkami;

Spirochety špirálovito stočené formy, v ktorých sú 2 typy cievok: primárne cievky, tvorené ohybmi protoplazmatického valca a sekundárne cievky, predstavujúce krivky celého tela.

Metódy na určenie typu mikróbov

Stanovenie typu mikroorganizmov sa vykonáva pomocou nasledujúcich výskumných metód:

- bakterioskopická metóda– štúdium mikroorganizmov mikroskopicky v živom alebo zafarbenom stave;

- bakteriologická metóda– štúdium charakteru mikrobiálneho rastu na hustých a tekutých živných pôdach, stanovenie enzymatickej aktivity mikróbov, identifikácia mikróbov (identifikácia druhov);

- sérologická metóda– štúdium antigénnej štruktúry mikróbov;

- biologická metóda (experimentálna)– štúdium patogénnych vlastností baktérií pomocou laboratórnych zvierat;

- molekulárno-biologická metóda- náuka o genetických vlastnostiach mikróbov.

Pomocou týchto metód sa študujú nasledujúce vlastnosti mikróbov:

- morfologickévlastnosti - tvar a veľkosť baktérií;

Tinctorial vlastnosti - pomer baktérií a farbív;

Kultúrne vlastnosti - povaha rastu na živných médiách;

Biochemické aktivita - fermentácia uhľohydrátov, bielkovín a iných zlúčenín;

Antigénny štruktúra baktérií;

patogénnosť;

genetické vlastnosti mikróbov.

Bakterioskopická metóda výskumu

Bunky mikroorganizmov je možné študovať v živom stave (metóda rozdrvených kvapiek a metóda visiacich kvapiek), ako aj vo fixovanom a zafarbenom stave.

metóda drvených kvapiek. Kvapka testovaného materiálu alebo suspenzia baktérií sa nanesie na povrch odtučneného podložného sklíčka a prikryje sa krycím sklíčkom. Kvapka by nemala presahovať okraje krycieho sklíčka. Vzorka je mikroskopovaná objektívom x40. Metóda drvených kvapiek je vhodná na štúdium mobility bakteriálnych buniek, ako aj na štúdium veľkých mikroorganizmov - plesní, kvasiniek.

metóda zavesenia kvapky. Prípravok sa pripravuje na krycom skle, do stredu ktorého sa nanesie kvapka bakteriálnej suspenzie. Potom sa špeciálne podložné sklíčko s otvorom, ktorého okraje sú vopred namazané vazelínou, pritlačí na krycie sklo tak, aby kvapka bola v strede otvoru. Prípravok sa prevráti krycím sklíčkom. V správne pripravenom prípravku by mala kvapka voľne visieť nad jamkou bez toho, aby sa dotýkala jej dna alebo okrajov. Na mikroskopiu sa najskôr použije suchá šošovka x8, pod zväčšením ktorej sa nájdu okraje kvapky, a potom sa nainštaluje šošovka x40 a skúma sa prípravok.

Príprava fixných prípravkov. Na prípravu liečiva sa na odtučnené podložné sklíčko nanesie kvapka vody alebo izotonický roztok chloridu sodného, ​​do ktorého sa pomocou bakteriologickej slučky zavedie testovaný materiál a krúživým pohybom slučky sa rozdelí tak, aby sa tenký a rovnomerný náter s priemerom 1-1,5 cm Ak sa skúma tekutý materiál, nanesie sa priamo na podložné sklíčko pomocou slučky a pripraví sa náter. Nátery sa sušia na vzduchu.

Na fixáciu pomocou fyzikálnych a chemických metód. Na opravu rozmazania fyzikálna metóda podložné sklíčko pomaly prechádzame 3-krát plameňom horáka. Krvné nátery, nátery-odtlačky orgánov a tkanív sa fixujú chemickou metódou ponorením na 5-20 minút do metylalkoholu alebo etylalkoholu, Nikiforovovej zmesi a iných fixačných tekutín.

Na farbenie mikróby používajú jednoduché a zložité metódy. o jednoduchá metóda fixný náter je zafarbený ktorýmkoľvek farbivom, napr. vodný roztok fuchsín (1-2 minúty) alebo metylénová modrá (3-5 minút), premytý vodou, vysušený a mikroskopovaný. Sofistikované techniky farbenia zahŕňajú postupné použitie viacerých farbív. To vám umožní identifikovať určité bunkové štruktúry a odlíšiť niektoré typy mikroorganizmov od iných.

Mikroskopická technika s imerzným systémom

Na bakterioskopické vyšetrenie mikroorganizmov sa najčastejšie používajú ponorné objektívy. Na rozdiel od suchých šošoviek, s ktorými sa medzi preparáciou a šošovkou objektívu nachádza vzduch, sa pri použití imerzných objektívov medzi šošovku objektívu a preparáciu vkladá kvapalina, ktorá má index lomu blízky indexu lomu skla. Úlohu takejto kvapaliny plní imerzný olej, najčastejšie cédrový olej. Lúče svetla prechádzajúce cez homogénne optické médium (sklo a olej) nemenia svoj smer. To vám umožní výrazne zlepšiť jasnosť obrazu. Imerzné šošovky sa líšia od suchých šošoviek svojim dizajnom (pohyblivá predná šošovka) a v vzhľad: Ich rám má čierny kruhový výbrus a vyryté označenie MI (olejová imerzia).

Mikroskopia s ponorným objektívom vyžaduje dobré osvetlenie objektu. Na tento účel sa používa dodatočný systém šošoviek umiestnený pod stolíkom objektu - kondenzor. Pri príprave mikroskopu na prácu sa kondenzor pomocou špeciálnej skrutky posunie až na doraz. Na zafarbený náter sa nanesie kvapka imerzného oleja a sklo sa položí na stolík s predmetmi. Pod vizuálnou kontrolou zo strany sa šošovka spustí, kým sa nedostane do kontaktu s kvapkou. Po ponorení šošovky do kvapky oleja sa otáčaním makrometrickej skrutky určia obrysy objektu a pomocou mikrometrickej skrutky sa vytvorí jasný obraz objektu.

Po dokončení mikroskopovania sa imerzný objektív zdvihne, prípravok sa odstráni a predná šošovka objektívu sa utrie mäkkou handričkou od zvyškov oleja. Potom sa šošovka presunie na malé zväčšenie alebo do neutrálnej polohy a kondenzor sa zníži.

Kontrolné otázky na tému lekcie:

1. Prístroj bakteriologického laboratória.

2. Pravidlá pre prácu v bakteriologickom laboratóriu.

3. Princípy klasifikácie mikroorganizmov.

4. Formy bakteriálnych buniek.

5. Metódy určovania druhu mikróbov.

6. Mikroskopická technika s imerzným systémom.

Literatúra na prípravu na lekciu:

Hlavná literatúra:

1. Lekárska mikrobiológia, virológia a imunológia. Ed. A.A. Vorobjov. M., 2004.

Doplnková literatúra:

1. L.B. Borisov. Lekárska mikrobiológia, virológia, imunológia. M., 2002.

2. O.K. Pozdeev. Lekárska mikrobiológia. M., GEOTAR-MEDIA, 2005.

3. Lekárska mikrobiológia. Adresár. Ed. IN AND. Pokrovsky a O.K. Pozdeeva. M., GEOTAR-MED, 1998.

Všeobecné informácie

Bakteriologické laboratóriá ako samostatné štruktúrne jednotky organizované na sanitárnych a epidemiologických staniciach (SES), v infekčných nemocniciach, nemocniciach všeobecný typ, niektorých špecializovaných nemocniciach (napríklad v tuberkulóze, reumatológii, dermatovenerológii) a v poliklinikách.

Bakteriologické laboratóriá v SES skúmajú všeobecnú bakteriálnu kontamináciu, ako aj infekciu podmienene patogénnou a patogénnou mikroflórou, objekty životného prostredia: vzduch, voda, pôda, potraviny; vykonávať prieskumy organizovaných tímov a jednotlivcov o prenášaní patogénnych baktérií črevnej skupiny, korynebaktérie záškrtu, čierneho kašľa, parapertussis, meningokoka. Práca mikrobiologického laboratória v súčinnosti s ostatnými oddeleniami SES má špecifickú úlohu – zlepšovať životné prostredie a znižovať výskyt obyvateľstva.

Bakteriologické laboratóriá v zdravotníckych zariadeniach vykonávajú testy potrebné na stanovenie a objasnenie diagnózy infekčná choroba, prispievanie správna voľbašpecifická liečba a určenie načasovania prepustenia pacienta z infekčnej nemocnice. Predmetom výskumu v bakteriologických laboratóriách sú:

• výlučky z ľudského tela: moč, výkaly, spútum, hnis, ako aj krv, cerebrospinálny mok a mŕtvoly;
• objekty životného prostredia: voda, vzduch, pôda, potraviny, výplachy z inventáru, ruky atď.

Vybavenie miestnosti a pracoviska bakteriologického laboratória

Špecifickosť mikrobiologickej práce vyžaduje, aby miestnosť pridelená laboratóriu bola izolovaná od nemocničných oddelení, obytných miestností a potravinových blokov. Bakteriologické laboratórium zahŕňa: laboratórne miestnosti pre bakteriologický výskum a technické miestnosti; autokláv alebo sterilizácia na dezinfekciu odpadového materiálu a kontaminovaného náradia; umývanie, vybavené na umývanie riadu; sredovovarochnaya na prípravu, plnenie do fliaš, sterilizáciu a skladovanie kultivačných médií; vivárium na chov pokusných zvierat; materiál na skladovanie náhradných činidiel, náčinia, vybavenia a vybavenia domácnosti.

Uvedené technické miestnosti ako samostatné konštrukčné celky sú súčasťou veľkých bakteriologických laboratórií. V malých laboratóriách sú varné a sterilizačné miestnosti spojené v jednej miestnosti; neexistuje žiadny špeciálny priestor na chov pokusných zvierat.

Pod laboratórnymi miestnosťami, v ktorých sa vykonáva všetok bakteriologický výskum, sú pridelené najľahšie a priestrannejšie miestnosti. Steny v týchto miestnostiach vo výške 170 cm od podlahy sú vymaľované vo svetlých farbách olejovou farbou. Podlaha je pokrytá relínom alebo linoleom. Tento druh povrchovej úpravy vám umožňuje používať dezinfekčné roztoky pri čistení miestnosti.

Každá izba by mala mať umývadlo s vodovodným potrubím a policu na fľašu s dezinfekčným roztokom.

V jednej z miestností je zasklený box s predboxom vybavený na vykonávanie prác v aseptických podmienkach. V boxe umiestnili stôl na plodiny, stoličku, nad pracovisko sú namontované baktericídne lampy. V predboxe je umiestnená skriňa na uskladnenie sterilného materiálu. Laboratórna miestnosť je vybavená stolmi laboratórneho typu, skriňami a policami na uloženie vybavenia, náradia, farieb a činidiel potrebných pre prácu.

Veľmi veľký význam pre prácu má správnu organizáciu pracoviska lekára – bakteriológa a laboranta. V blízkosti okien sú inštalované laboratórne stoly. Pri ich umiestňovaní sa musíte snažiť, aby svetlo dopadalo spredu alebo zboku pracovníka, najlepšie na ľavú stranu, ale v žiadnom prípade nie zozadu. Je žiaduce, aby miestnosti na analýzu, najmä na mikroskopiu, mali okná orientované na sever alebo severozápad, pretože na prácu je potrebné rovnomerné rozptýlené svetlo. Osvetlenie povrchu stolov pre prácu by malo byť 500 luxov. Pre pohodlie dezinfekcie je povrch laboratórnych stolov pokrytý plastom a každé pracovisko na ňom je pokryté zrkadlovým sklom.

Každý zamestnanec laboratória má pridelené samostatné pracovisko s rozmermi 150 × 60 cm.Všetky pracoviská sú vybavené vecami potrebnými pre každodennú prácu.

Pravidlá práce a správania sa v laboratóriu

Znakom bakteriologickej práce je neustály kontakt laboratórneho personálu s infekčným materiálom, kultúrami patogénnych mikróbov, infikovanými zvieratami, krvou a sekrétmi pacienta. Preto sú všetci zamestnanci bakteriologického laboratória povinní dodržiavať nasledujúce pracovné pravidlá, ktoré zabezpečia sterilitu pri práci a zabránia možnosti intralaboratórnych infekcií:

1. Do priestorov bakteriologického laboratória nie je možné vstúpiť bez špeciálneho oblečenia – županu a bielej čiapky alebo šálu.
2. Do laboratória nevnášajte cudzie predmety.
3. Je zakázané opúšťať laboratórium v ​​plášťoch alebo dávať si na plášť plášť.
4. V priestoroch bakteriologického laboratória je prísne zakázané fajčiť, jesť, skladovať potraviny.
5. Všetok materiál vstupujúci do laboratória by sa mal považovať za infikovaný.
6. Pri vybaľovaní zaslaného infekčného materiálu treba byť opatrný: tégliky s materiálom na výskum sa zvonku vyutierajú dezinfekčným roztokom a neložia sa priamo na stôl, ale na tácky alebo do kyviet.
7. Transfúzia tekutín obsahujúcich patogénne mikróby sa vykonáva cez nádobu naplnenú dezinfekčným roztokom.
8. Prípady nehôd so sklom s infekčným materiálom alebo rozliatie tekutého infekčného materiálu je potrebné bezodkladne hlásiť vedúcemu laboratória alebo jeho zástupcovi. Opatrenia na dezinfekciu častí tela kontaminovaných patogénnym materiálom šiat, predmetov na pracovisku a povrchov sa vykonávajú okamžite.
9. Pri štúdiu infekčného materiálu a práci s patogénnymi kultúrami mikróbov je potrebné prísne dodržiavať technické metódy všeobecne uznávané v bakteriologickej praxi, ktoré vylučujú možnosť kontaktu rúk s infekčným materiálom.
10. Infikovaný materiál a nepotrebné kultúry sa musia zničiť, pokiaľ možno v ten istý deň. Nástroje používané pri práci s infekčným materiálom sa dezinfikujú ihneď po ich použití, ako aj povrch pracoviska.
11. Pri vykonávaní bakteriologických prác je potrebné prísne sledovať čistotu rúk: na konci práce s infekčným materiálom sa dezinfikujú. Pracovisko sa na konci dňa dá do poriadku a dôkladne vydezinfikuje a infekčný materiál a kultúry mikróbov potrebné pre ďalšiu prácu sa uložia do uzamykateľnej chladničky alebo trezoru.
12. Zamestnanci bakteriologického laboratória sú povinne očkovaní proti tým infekčným ochoreniam, ktorých pôvodcovia sa nachádzajú v skúmaných objektoch.

Upratovanie laboratórnej miestnosti

Mikrobiologické laboratórium sa musí udržiavať v čistote. Laboratórne zariadenia by sa mali pravidelne čistiť. Zabezpečiť úplnú sterilitu laboratória je veľmi náročné a nie vždy potrebné, ale je možné výrazne znížiť počet mikroorganizmov vo vzduchu a na rôznych povrchoch v laboratórnych miestnostiach. To sa dosahuje praktickou aplikáciou metód dezinfekcie, to znamená ničením patogénov infekčných chorôb v objektoch životného prostredia.

Podlaha, steny a nábytok v mikrobiologickom laboratóriu sa vysávajú a utierajú rôznymi dezinfekčnými roztokmi. Vysávanie zabezpečuje, že predmety sú zbavené prachu a je z nich odstránené značné množstvo mikroorganizmov. Zistilo sa, že 4-násobným zametaním kefy vysávača po povrchu predmetu sa z neho odstráni približne 47 % mikroorganizmov a pri 12-násobnom až 97 %. Ako dezinfekčné roztoky sa najčastejšie používa 2-3% roztok sódy (hydrogenuhličitan sodný) alebo lyzolu (fenolový prípravok s prídavkom zeleného mydla), 0,5-3% vodný roztok chloramínu a niektoré ďalšie dezinfekčné prostriedky.

Vzduch v laboratóriu je najjednoduchšie dezinfikovať vetraním. Dlhodobé vetranie miestnosti cez okno (najmenej 30-60 minút) vedie k prudký pokles množstvo mikroorganizmov vo vzduchu, najmä ak je medzi vonkajším vzduchom a vnútorným vzduchom výrazný rozdiel teplôt. Účinnejším a najčastejšie používaným spôsobom dezinfekcie vzduchu je ožarovanie UV lúčmi s vlnovou dĺžkou 200 až 400 nm. Tieto lúče sú vysoko antimikrobiálna aktivita a môže spôsobiť smrť nielen vegetatívnych buniek, ale aj spór mikroorganizmov.

Literatúra

Nadácia Wikimedia. 2010.

Pozrite sa, čo je "Bacteriological Laboratory" v iných slovníkoch:

1) vzdelávacia, vedecká, praktická, priemyselná inštitúcia alebo časť takejto inštitúcie, podniku, ktorá vykonáva experimentálny, kontrolný alebo analytický výskum; 2) miestnosť, v ktorej sa uvedené štúdie vykonávajú. V…… Mikrobiologický slovník

L. ako súčasť sanitárno-epidemiologickej stanice alebo klinickej diagnostickej L., určenej na mikrobiologické (bakteriologické, imunologické a pod.) štúdie za účelom identifikácie patogénov, objasnenia diagnózy a ... Veľký lekársky slovník

Tento článok alebo sekcia si vyžaduje revíziu. Vylepšite prosím článok v súlade s pravidlami pre písanie článkov. Laboratórium výskumného laboratória pre experimenty a vedecký výskum vedci a... Lekárska encyklopédia Wikipedia

Na túto tému sa vyjadril prof. Leffler (Loeffler) opísal v roku 1892 epizootiku, ktorú pozoroval v Greifswalde medzi bielymi myšami určenými na rôzne experimenty. Pôvodcom tohto epizootika sa v štúdii ukázal byť špecifický mikroorganizmus, ktorý Leffler a ... ... encyklopedický slovník F. Brockhaus a I.A. Efron

Zdravotné ústavy resp štruktúrne jednotky terapeutické a profylaktické alebo sanitárne preventívne inštitúcie určené pre rôzne medicínske výskumy. Táto skupina nezahŕňa vedecké ... ... Lekárska encyklopédia