Reakcia väzby komplementu. Popis, aplikácia. Mikrobiológia technikou mikrobiologického výskumu - reakcia fixácie komplementu

(RSK) - serol. reakcia použitá na kvantifikácia komplement fixujúce Ab a Ag. Princíp CSC spočíva v tom, že špecifický imunitný komplex úplne alebo čiastočne adsorbuje C pridaný do systému. C sa berie ako kvantitatívny indikátor väzby C hemolytický systém, hemolýza roj indikuje absenciu imunitného komplexu v diagnostickom systéme (záporné RSK), oneskorenie hemolýzy - na prítomnosť imunitného komplexu (pozitívne RSK). V RSC sa používa: 1) zahrievanie na 57 °C počas 30 min. s-ku, mala by byť čerstvá, bez suspendovaných častíc, cytotoxínov, C. V experimente zvyčajne odoberú niekoľkonásobky 2 riedení s-ki v závislosti od diagnostického titra RSK pri podozrení na ochorenie; 2) diagnostikum na predaj alebo špeciálne pripravené pre RSK; 3) C v pracovnej dávke, ktorá sa pri titrácii s Ag rovná titru C a pri titrácii bez Ag je o 20–25 % vyššia ako titra C; 4) ovčie erytrocyty sa niekoľkokrát premyjú fyziologickým roztokom a pripraví sa 3 % suspenzia; 5) hemolytická kyselina sa zriedi 3-krát menej, ako je titer uvedený na štítku. Všetkých 5 zložiek sa odoberie v rovnakom objeme (0,5 ml alebo 0,25 ml). Výskum sa zavádza do experimentálneho (diagnostického) systému. s-ku, diagnosticum, S. Pripravia sa kontroly: s-ki - s-ku, C a fyziologický roztok (namiesto Ag); diagnosticum - diagnosticum, C a fyziologický roztok (namiesto s-ki); C-C a dvojnásobný objem fyziologického roztoku; evidentne pozitívne - štandardná imunitná s-ka, Ag, C; zjavne negatívne - normálne s-ka, Ar, C. Skúmavky pretrepte a vložte do termostatu na 37°C na 45 minút. Súčasne sa pripraví hemolytický systém zmiešaním rovnakých objemov 3% suspenzie ovčích erytrocytov a hemolytických s-ki a inkubuje sa súčasne v termostate. Po senzibilizácii sa do všetkých experimentálnych a kontrolných skúmaviek pridá dvojnásobný objem hemolytického systému (1 ml alebo 0,5 ml). Všetky skúmavky sa udržiavajú v termostate pri teplote 37 °C, kým nedôjde k úplnej hemolýze v kontrolných skúmavkách (asi 30 - 40 minút). Pri kvantitatívnom spôsobe nastavenia reakcie sa zistí riedenie, u Krom je oneskorenie hemolýzy minimálne 2+ (At titer výskumu. S-ki) a porovnajte ho s diagnostickým titrom rozpoznanej choroby. Semikvantitatívna metóda s jedným riedením s-ki (zvyčajne 1:5) umožňuje určiť stupeň oneskorenia hemolýzy o 4+, 3+, 2+ a na základe toho vyhodnotiť intenzitu reakcie. . Presnejšie výsledky sú zistenie titra s-ki nie o 100%, ale o 50% hemolýzu (viď. definícia doplnku). Navrhuje sa variant kvantitatívneho nastavenia RSK, pri ktorom sa odoberie jedno riedenie s-ki, ale niekoľko dávok C (1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4). Všetky ostatné komponenty sa používajú v rovnakých množstvách. Pri hodnotení majte na pamäti skutočnosť, že čím viac dávok C viaže štúdiu. s-ka, tým viac At v ňom.

(Zdroj: Slovník pojmov z mikrobiológie)

Pozrite sa, čo je „Reakcia fixácie komplementu“ v iných slovníkoch:

reakcia fixácie komplementu- RSK laboratórna metóda. [Anglicko-ruský slovník základných pojmov z vakcinológie a imunizácie. Svetová organizácia zdravotníctvo, 2009] Témy vakcinológia, imunizácia Synonymá RSK EN komplement fixačný testCFTCF test ... Technická príručka prekladateľa

REAKCIA LEPENIA DOPLNKU- reakcia fixácie komplementu, RSK, Bordet-Ganguova reakcia [meno Belg. bakteriológovia J. Bordet a O. Zhangu (O. Gengou), 1901], vysoko špecifická a veľmi citlivá sérologická reakcia založená na vlastnosti komplexu ... ... Veterinárne encyklopedický slovník

I Test fixácie komplementu sérologický test používaný na stanovenie antigénu alebo protilátky, založený na hodnotení spotreby (naviazania) komplementu komplexmi antigén-protilátka, pozri Imunologické metódy výskumu. II…… Lekárska encyklopédia

reakcia fixácie komplementu

reakcia fixácie komplementu- (RSK), vysoko citlivý a špecifický sérologický test používaný na diagnostiku mnohých infekčných a parazitárnych chorôb zvierat. Pozostáva z dvoch po sebe nasledujúcich fáz. V prvej fáze sa antigén zmieša s testovacím sérom a ... ... Poľnohospodárstvo. Veľký encyklopedický slovník

- (RSK; synonymum: Borde Zhanguova reakcia, reakcia odmietnutia komplementu zastarané, alexínová fixačná reakcia zastarané.) sérologická testovacia metóda založená na schopnosti výsledného komplexu antigén-protilátka viazať komplement, ktorý je detekovaný ... ... Veľký lekársky slovník

REAKCIA VIAZANIE DOPLNKOV (CFR)- vysoko citlivý a špecifický. sérologické reakcia použitá na diagnostiku. infekčné a invazívnych chorôb. Pozostáva z dvoch po sebe nasledujúcich fázy. V prvej fáze sa antigén zmieša s testovaným sérom a komplementom (komplex bielkovín ... ... Poľnohospodársky encyklopedický slovník

- (zastarané) pozri Reakcia fixácie komplementu ... Veľký lekársky slovník

reakcia odmietnutia komplementu- rus reakcia (g) fixácie komplementu, reakcia (g) Borde Zhanga; reakcia (g) odchýlka komplementu; alexín fixačná reakcia (g) test fixácie komplementu fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) kúpele… … Bezpečnosť a ochrana zdravia pri práci. Preklad do angličtiny, francúzštiny, nemčiny, španielčiny

Pozri Reakcia fixácie komplementu. (

Test fixácie komplementu je jedným z tradičných sérologických testov používaných na diagnostiku mnohých vírusové ochorenia a tiež tvorí základ niektorých ďalších metód na detekciu antivírusových protilátok. Hoci reakcia neutralizácie, inhibícia hemaglutinácie, nepriama hemaglutinácia, enzýmová imunoanalýza je lepšia ako reakcia fixácie komplementu v citlivosti, jednoduchosť techniky, včasná detekcia protilátok a detekcia vírusových antigénov, ktoré nemajú hemaglutinačné vlastnosti vysvetli to. široké uplatnenie vo virologickom výskume.

To si nevyžaduje vysoký stupeň koncentrácia a čistota antigénnych prípravkov, ktoré sú nevyhnutné pre celý rad ďalších imunologických reakcií. Okrem toho skupinová špecifickosť komplement fixujúcich antigénov mnohých vírusov umožňuje použiť komplement fixačnú reakciu v hromadnej diagnostike: táto reakcia neodhalí rozdiely medzi kmeňmi a má mimoriadny význam pri štúdiu antigénnych vzťahov medzi vírusmi.

Samotný názov do značnej miery odráža podstatu metódy, ktorá pozostáva z dvoch samostatných reakcií. V prvej fáze sa reakcie zúčastňujú antigény a protilátky (jedna z týchto zložiek je vopred známa), ako aj komplement v titrovanom množstve. Ak sa antigén a protilátky zhodujú, ich komplex viaže komplement, ktorý sa v druhom štádiu deteguje pomocou indikátorového systému (zmes ovčích erytrocytov a antiséra k nim). Ak sa komplement naviaže počas interakcie antigénu a protilátok, potom nedochádza k lýze ovčích erytrocytov (pozitívna reakcia fixácie komplementu). Pri negatívnej reakcii fixácie komplementu prispieva neviazaný komplement k hemolýze, ktorá sa používa na posúdenie výsledkov reakcie.

Hlavnými zložkami reakcie fixácie komplementu sú antigény (známe alebo detegovateľné), protilátky (známe antiséra alebo testovacie séra), komplement, hemolytické sérum a baranie erytrocyty; izotonický fyziologický roztok sa používa ako riedidlo chlorid sodný(pH 7,2-7,4) alebo rôzne tlmivé roztoky. Antigény a séra môžu mať antikomplementaritu, t.j. schopnosť adsorbovať komplement, čo oneskoruje hemolýzu a skresľuje výsledok reakcie.

Antigény pre CSC sa pripravujú z orgánov infikovaných zvierat, alantoickej alebo plodovej vody infikovaných kuracích embryí, ako aj z kultivačnej tekutiny po kultivácii vírusov v tkanivových bunkových kultúrach. Antigénne prípravky vždy obsahujú množstvo balastných látok zo živočíšnych buniek alebo tkanivových kultúr, ktoré môžu tiež skresliť výsledky reakcie.

Výsledné vírusové antigény sa inaktivujú, stanoví sa pracovná dávka, ako aj antikomplementárne a hemolytické vlastnosti. Antigén sa potom titruje v prítomnosti komplementu.

Druhou hlavnou zložkou pri formulácii reakcie je komplement. Tento termín označuje komplexný systém bielkovín a faktorov prítomných v krvi zvierat a ľudí. Typicky sa pri reakcii fixácie komplementu používa sérum z morčiat. Aktivita (titer) komplementu je jeho najmenšie množstvo, v prítomnosti ktorého hemolyzín spôsobí úplnú hemolýzu použitého hemolytického systému.

Na detekciu protilátok proti vírusom viažucim komplement sa vykonáva povinná inaktivácia séra, aby sa eliminoval komplement pri 56 °C počas 30 minút. Ako referenčné séra sa zvyčajne používajú séra z imunizovaných zvierat. Okrem toho sa na imunizáciu používajú vírusové antigény dôkladne vyčistené od tkanivových nečistôt, pretože inak dochádza k výraznej nešpecifickej reakcii.

Povinnou zložkou reakcie fixácie komplementu je hemolytický systém, ktorý zahŕňa baranie erytrocyty a hemolytické sérum získané hyperimunizáciou králikov baraními erytrocytmi.

Pre nastavenie reakcie fixácie komplementu sa používajú tieto modifikácie: mikrometóda reakcie fixácie komplementu v mikrotitri systému Takachi, reakcia dlhodobej fixácie komplementu, nepriama reakcia fixácie komplementu, reakcia fixácie komplementu v géli. , reakcia fixácie komplementu mikrokvapôčkovou metódou, reakcia fixácie komplementu na pevnom základe.

Aj keď je citlivosť reakcie fixácie komplementu nízka, má vysokú špecificitu. V tomto ohľade sa široko používa na diagnostiku vírusovej pneumoenteritídy u mladého dobytka.

Komplement fixačný test (CFT) je sérologický test, ktorý je porovnateľný v citlivosti na precipitačné, aglutinačné a neutralizačné metódy. RSK je metóda, pri ktorej sa používajú dva systémy antigén-protilátka:

prvý je špecifický;

druhý je indikátor (hemolytický).

Pre RSC je potrebných 5 komponentov: diagnostický antigén, diagnostické protilátky, indikátorový antigén (ovčie erytrocyty), indikátorové protilátky (králičie hemolyzíny), komplement.

Špecifická interakcia antigénu a protilátky je sprevádzaná fixáciou komplementu. Výsledný komplex sa vizuálne neprejavuje. Ako indikátor sa používa hemolytický systém. Hemolytické sérum senzibilizuje erytrocyty na pôsobenie komplementu, v prítomnosti ktorého dochádza k lýze erytrocytov (hemolóza). Ak nedôjde k hemolýze, komplement je viazaný prvým systémom, a preto antigén v ňom zodpovedá protilátke - kladná odpoveď. Ak sa protilátka nezhoduje s antigénom, komplex sa nevytvorí a komplement, ktorý zostane voľný, sa spojí s druhým systémom, čo spôsobí hemolýzu - reakcia je negatívna.

Na nastavenie RSC sa všetky reakčné zložky pripravia a titrujú pred hlavným experimentom.

Sérum (pacientské alebo diagnostické) sa v predvečer reakcie zahrieva vo vodnom kúpeli pri teplote 56ºС počas 30 minút, aby sa inaktivoval vlastný komplement. Niektoré séra, najmä z imunizovaných zvierat, majú antikomplementové vlastnosti, t.j. schopnosť viazať komplement v neprítomnosti homológneho antigénu. Antikomplementarita sa eliminuje ich ošetrením oxidom uhličitým, zahriatím na teplotu 57-58ºС, jednorazovým zmrazením pri teplote -20ºС alebo -70ºС a odstránením sedimentu odstredením, pridaním komplementového séra v objeme séra 1:10 a jeho zahriatím. po inkubácii v chlade 18 – 20 hodín, aby sa predišlo antikomplementarite sér, uchovávajú sa v lyofilizovanej forme alebo sa zmrazujú pri nízkych teplotách.

Ako antigén pre CSC môžu slúžiť kultúry rôznych usmrtených mikroorganizmov, ich lyzáty, zložky baktérií, patologicky zmenené a normálne orgány, tkanivové lipidy, vírusy a materiály obsahujúce vírusy. Mnohé mikrobiálne antigény sa vyrábajú priemyselne. Antikomplementarita antigénov je eliminovaná metódami ako je termolýza (viacnásobné zmrazovanie a rozmrazovanie), pôsobenie tukových rozpúšťadiel (éter, chloroform, acetón), alkoholov (metanol, etanol) atď.

Ako doplnok sa používa sérum z morčiat odobraté bezprostredne pred experimentom; možno použiť aj suchý doplnok. Na získanie zásaditého roztoku na následnú titráciu sa doplnok zriedi v pomere 1:10 izotonickým roztokom chloridu sodného.

Ovčie erytrocyty sa používajú vo forme 3 suspenzií v izotonickom roztoku chloridu sodného. Odoberá sa krv (100-150 ml). krčná žila, vložené do sterilnej nádoby so sklenenými guľôčkami, defibrinované trepaním počas 10-15 minút a prefiltrované cez 3-4 vrstvy sterilnej gázy, aby sa odstránil fibrín. Erytrocyty sa premyjú 3-krát izotonickým roztokom chloridu sodného, ​​ktorý sa pridá k sedimentu erytrocytov na počiatočný objem krvi. Erytrocyty možno skladovať 5-6 dní pri 4-6ºС. Skladovateľnosť erytrocytov sa zvyšuje, keď sú konzervované formalínom.

Hemolytické sérum na CSC sa získa nasledovne Králiky sa imunizujú injekciou do ušnej žily 50 % suspenziou premytých baraních erytrocytov (1 ml 4-6 krát každý druhý deň). Vzorka séra sa odoberie 7 dní po poslednej injekcii. Ak titer v sére nie je nižší ako 1:1200, vykoná sa odber krvi. Sérum sa zahrieva 30 minút pri teplote 56ºС. Na zabránenie rastu baktérií sa do hemolytického séra pridáva konzervačná látka (mertiolát 1:10 000 alebo 1 kyselina boritá).

Hemolytický systém pozostáva z hemolytického séra zmiešaného v rovnakých objemoch (odobraté v trojitom titri) a 3 suspenzií baraních erytrocytov. Na senzibilizáciu erytrocytov hemolyzínmi sa zmes udržiava v termostate pri teplote 37ºС počas 30 minút.

Titrácia hemolytického séra. Sérum sa titruje zmiešaním 0,5 ml (v riedeniach 1:600, 1:1200, 1:1600, 1:3200 atď.) s 0,5 ml 3 suspenzií erytrocytov a 0,5 ml čerstvého komplementu v riedení 1:10 . Objem reakčnej zmesi v kontrolných skúmavkách bol upravený na 1,5 ml pridaním izotonického roztoku chloridu sodného. Výsledky reakcie sa berú do úvahy po 1 hodine inkubácie pri teplote 37ºС. Titer hemolytického séra je jeho najvyšším zriedením, ktoré spôsobuje úplnú hemolýzu. Sérum sa uchováva v lyofilizovanej forme.

Titračná schéma pre hemolytické sérum

Doplnková titrácia. Pred experimentom sa základný roztok komplementu (1:10) naleje do série skúmaviek od 0,05 do 0,5 ml a pridá sa do každého izotonického roztoku chloridu sodného, ​​čím sa objem kvapaliny upraví na 1,5 ml. Skúmavky sa umiestnia do termostatu pri teplote 37 °C na 45 minút, potom sa do nich pridá hemolytický systém a udržiava sa v termostate 30 minút, po ktorých sa stanoví titer komplementu.

Na experiment sa odoberie pracovná dávka komplementu (obsiahnutá v objeme 0,5 ml), ktorá je o 20 – 30 % vyššia ako titer.

Schéma komplementovej titrácie

Termostat na 37ºС počas 45 minút

Termostat na 37ºС počas 30 minút

Titrácia antigénu. Antigény používané pre CSC môžu adsorbovať určité množstvo komplementu, t.j. majú antikomplementárne vlastnosti. Preto sa pred experimentom antigény titrujú v prítomnosti pracovnej dávky komplementu. V menšom rozsahu sú antikomplementárne vlastnosti vyjadrené v špecifických antigénoch produkovaných produkciou. Ich titer sa určuje nie pred každým experimentom, ale raz za mesiac, berúc do úvahy možnosť jeho poklesu počas skladovania.

Na stanovenie titra antigénu sa naleje do niekoľkých skúmaviek v klesajúcom množstve od 0,5 do 0,05 ml, pričom objem v nich sa zvýši na 1 ml pridaním roztoku chloridu sodného. Potom sa do každej skúmavky pridá 0,5 ml pracovnej dávky komplementu a umiestni sa do termostatu na 1 hodinu pri teplote 37ºС. Potom sa do všetkých skúmaviek pridá 1 ml hemolytického systému, opäť sa inkubujú 1 hodinu v termostate a zohľadnia sa výsledky reakcie.

Titer antigénu sa považuje za najmenšie množstvo, pri ktorom dôjde k úplnej hemolýze. Pre CSC sa používa pracovná dávka antigénu, ktorá je približne 1/2-1/3 titra. Antigény, v ktorých prítomnosti klesá titer komplementu o viac ako 30 %, sú pre reakciu nevhodné.

Schéma titrácie antigénu

Termostat na 37ºС počas 1 hodiny

Termostat na 37ºС počas 1 hodiny

Vykonávanie hlavných skúseností RSC. Celkový objem reakčných zložiek je 2,5 ml, objem pracovnej dávky každej z nich je 0,5 ml. Sérum vo vhodnom riedení, antigén a komplement sa zavedú do prvej skúmavky, sérum vo vhodnom riedení, komplement a izotonický roztok chloridu sodného (kontrola séra) do druhej skúmavky, antigén, komplement a izotonický roztok chloridu sodného (kontrola antigénu) do tretia trubica. Súčasne sa pripraví hemolytický systém zmiešaním 2 ml hemolytického séra v trojitom titri (v pomere k uvedenému v návode) a 3 % suspenzie ovčích erytrocytov (vzhľadom na počiatočný objem krvi). Skúmavky sa udržiavajú v termostate pri teplote 37ºС počas 1 hodiny, potom sa do prvých 3 skúmaviek (prvý systém) pridá 1 ml hemolytického systému (druhý systém). Po dôkladnom premiešaní zložiek sa skúmavky opäť umiestnia do termostatu na 1 hodinu pri teplote 37ºС.

Schéma vykonávania hlavného experimentu RSC

Termostat na 37ºС počas 1 hodiny

Termostat na 37ºС počas 1 hodiny

Výsledky reakcie sa berú do úvahy predbežne - po vybratí skúmaviek z termostatu a nakoniec - po ich uchovávaní 15-18 hodín v chladničke alebo pri izbovej teplote.

V konečnom počte je intenzita reakcie vyjadrená v plusoch: (++++) - prudko pozitívna reakcia, charakterizovaná úplným oneskorením hemolýzy (kvapalina v skúmavke je bezfarebná, všetky erytrocyty sa usadia na dne ); (+++, ++) - pozitívna reakcia, ktorá sa prejavuje zvýšením farby kvapaliny v dôsledku hemolýzy a znížením počtu erytrocytov v sedimente; (+) - slabo pozitívna reakcia (kvapalina je intenzívne sfarbená, na dne skúmavky je malé množstvo erytrocytov). o spätná reakcia(–) je pozorovaná úplná hemolýza, kvapalina v skúmavke má intenzívnu ružovú farbu (laková krv).

Bolo navrhnutých množstvo modifikácií RSC, ktoré sa vyznačujú zvýšenou citlivosťou a menším množstvom použitých prísad. Takže napríklad vo virologických štúdiách je objem zložiek pre CSC v chlade 1 ml. Na kvapkanie RSC užite 1 kvapku séra + 1 kvapku antigénu + 1 kvapku komplementu + 2 kvapky hemolytického systému.

Reakcia viazania komplimentu našla najširšie rozšírenie v mikrobiologickej a sérologickej diagnostike.

Pomocou RSK sa zisťujú protilátky fixujúce komplement v krvnom sére pacientov so syfilisom, sopľavkou, chronickou kvapavkou, rickettsiózou, vírusovými ochoreniami atď.

RSC je obzvlášť zaujímavý pre klinickú imunológiu. Reakcia sa využíva na izoláciu rôznych subpopulácií lymfocytov, na detekciu HLA antigénov na krvných doštičkách, transplantovaných lymfoblastoch, fibroblastoch, nádorových bunkách a antigénoch špecifických pre krvné doštičky, ako aj zodpovedajúcich protilátok.

reakcia fixácie komplementu , RSK, Bordet-Ganguova reakcia [s názvom Belg. bakteriológovia J. Bordet a O. Zhangu (O. Gengou), 1901], vysoko špecifická a veľmi citlivá sérologická reakcia založená na vlastnosti komplexu antigén-protilátka fixovať voľný komplement (), používaná pri diagnostike mnohých bakteriálnych a vírusové a niektoré protozoálne a helmintické ochorenia, ako aj na štúdium procesov sprevádzaných zmenou množstva antigénu alebo protilátok. CSC prebieha v 2 fázach: 1) interakcia protilátok, antigénu a komplementu, v dôsledku čoho je voľný komplement viazaný vytvoreným komplexom antigén-protilátka (špecifická fáza); 2) indikácia reakcie senzibilizovanej erytrocytmi (nešpecifická fáza). V RSK sa používajú 2 systémy: špecifický bakteriologický systém, pozostávajúci z protilátky (testovacie sérum), antigénu a komplementu, ako aj nešpecifický „indikátorový“ systém obsahujúci hemolyzín (hemolytické sérum) a suspenziu baraních erytrocytov. Antigén sa viaže na protilátku iba v prítomnosti komplementu. Ak testovacie sérum obsahuje protilátky homológne s odoberaným antigénom, komplement prítomný v reakčnej zmesi je adsorbovaný výsledným komplexom antigén-protilátka a stráca schopnosť lyzovať senzibilizované erytrocyty, teda bez komplementu hemolyzín (hemolytická protilátka) áno. nezničiť erytrocyty (pozitívna reakcia). V prípadoch, keď neexistuje špecifický vzťah medzi antigénom a protilátkami testovacieho séra, komplex sa nevytvorí a komplement zostáva vo voľnom stave. Pri pridaní hemolytického systému v tomto prípade neviazaný komplement spôsobí hemolýzu senzibilizovaných červených krviniek (negatívna reakcia). Existujú rôzne možnosti stagingu RSK: klasický spôsob stagingu vo forme makro- a mikrovariantov, dlhodobá komplementová fixačná reakcia (RDSK) v chlade, metóda kvantitatívneho RSK podľa 50% hemolýzy senzibilizovaných erytrocytov, metóda fixácie komplementu (RDSK) v chlade, metóda kvantitatívnej RSK podľa 50% hemolýzy senzibilizovaných erytrocytov. Vo veterinárnej diagnostickej praxi sa častejšie používa klasická metóda RSK vo forme makrovariantu, v ktorom sa každá zložka odoberá po 0,5 alebo 0,25 ml v určitom pracovnom titri. Komplement sa titruje v bakteriologickom systéme na sérach rovnakého živočíšneho druhu, ktorého krv sa má vyšetrovať. Testovacie séra sa zvyčajne vyšetrujú v riedeniach 1:5 a 1:10 s antigénom a 1:5 bez antigénu (kontrola). Čas viazania komplementu v špecifickej fáze 20 min, reakčný čas hemolýzy v nešpecifickej fáze 20 min at t 37-38ºC. Na diagnostiku množstva ochorení sa používa citlivejšia metóda – RDSC. V tomto prípade sa prvá fáza reakcie uskutočňuje pri t 4-6ºC počas 16-18 hodín, čo vedie k zvýšenej adsorpcii komplementu malým množstvom antigénu a protilátok. Potom sa pridá hemolytický systém a reakcia prebieha pri t 37-38ºC počas 20 minút. Výsledky RSK a RDSK sa berú do úvahy stupňom oneskorenia hemolýzy, ktorý je označený krížikmi alebo mínusmi, čo zodpovedá nasledujúcim percentám hemolýzy erytrocytov: ++++ od 0 do 10 %; +++ od 10 do 40 %; ++ od 40 do 70 %; + 70 až 90 %; – od 90 do 100 %. Veterinárna legislatíva ustanovuje osobitné pokyny na formuláciu, evidenciu a hodnotenie RSK a RDSK pre každé ochorenie samostatne.

Literatúra:
Laboratórne výskumy vo veterinárnej medicíne, M., 1971;
Guide to Immunology, ed. O. E. Vyazova a Sh. Kh. Chodzhaeva. Moskva, 1973.

Veterinárny encyklopedický slovník. - M.: "Sovietska encyklopédia". Hlavný redaktor V.P. Šiškov. 1981 .

Pozrite si, čo je „“ v iných slovníkoch:

Reakcia fixácie komplementu- (RSK) serol. reakcia používaná na kvantifikáciu komplement-fixujúcich Ab a Ag. Princíp RSK spočíva v tom, že špecifický imunitný komplex úplne alebo čiastočne adsorbuje do systému pridaný C. Ako ... ... Mikrobiologický slovník

reakcia fixácie komplementu- Laboratórna metóda RSK. [Anglicko-ruský slovník základných pojmov z vakcinológie a imunizácie. Svetová zdravotnícka organizácia, 2009] Témy vakcinológia, imunizácia Synonymá RSK EN komplement fixačný testCFTCF test ... Technická príručka prekladateľa

Reakcia fixácie komplementu- I Test fixácie komplementu sérologický test používaný na stanovenie antigénu alebo protilátky, založený na hodnotení spotreby (naviazania) komplementu komplexmi antigén-protilátka, pozri Imunologické metódy výskumu. II…… Lekárska encyklopédia

reakcia fixácie komplementu- rus reakcia (g) fixácie komplementu, reakcia (g) Borde Zhanga; reakcia (g) odchýlka komplementu; alexín fixačná reakcia (g) test fixácie komplementu fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) kúpele… …

reakcia fixácie komplementu- (RSK), vysoko citlivý a špecifický sérologický test používaný na diagnostiku mnohých infekčných a parazitárnych chorôb zvierat. Pozostáva z dvoch po sebe nasledujúcich fáz. V prvej fáze sa antigén zmieša s testovacím sérom a ... ... Poľnohospodárstvo. Veľký encyklopedický slovník

reakcia fixácie komplementu- (RSK; synonymum: Borde Zhanguova reakcia, reakcia odmietnutia komplementu zastarané, alexínová fixačná reakcia zastarané.) sérologická testovacia metóda založená na schopnosti výsledného komplexu antigén-protilátka viazať komplement, ktorý je detekovaný ... ... Veľký lekársky slovník- rus reakcia (g) fixácie komplementu, reakcia (g) Borde Zhanga; reakcia (g) odchýlka komplementu; alexín fixačná reakcia (g) test fixácie komplementu fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) kúpele… … Bezpečnosť a ochrana zdravia pri práci. Preklad do angličtiny, francúzštiny, nemčiny, španielčiny

Reakcia väzby komplementu- pozri Reakcia fixácie komplementu. (

Test fixácie komplementu (CFR) a dlhodobá reakcia fixácie komplementu (RDSC)

REAKCIA NA VÄZBU DOPLNKU (RSK) A DLHODOBÁ REAKCIA NA VÄZBU DOPLNKU (RDSK)

COMPLEMENT BONDING REACTION, RSK, Bordet-Janguova reakcia [pomenovaná podľa bakteriológov J. Bordeta a O. Gengou, 1901], vysoko špecifická a veľmi citlivá sérologická. reakcia založená na vlastnosti komplexu antigén-protilátka fixovať voľný komplement.

Komplement (komplementový systém) (z lat.complementum - prídavok), skupina guľovitých bielkovín v krvnom sére zvierat a ľudí, ktoré sú súčasťou tzv. imunitný systém organizmu. Keď baktérie alebo vírusy, ktoré ho infikujú, vstúpia do tela, niektoré toxíny alebo sa objavia jeho vlastné transformované bunky, aktivuje sa komplement, v dôsledku čoho sú cieľové bunky lyzované (zničené) a toxíny a vírusy sú neutralizované. Preto je komplementový systém považovaný spolu s makrofágmi za hranicu imunitnej obrany organizmu.

Táto reakcia je široko používaná pri identifikácii antigénov a pri sérodiagnostike infekcií, najmä chorôb spôsobených spirochétami (Wassermannova reakcia), rickettsiou a vírusmi.

RSK je komplexná sérologická reakcia. Zahŕňa komplement a dva systémy antigén-protilátka. V podstate ide o dve sérologické reakcie.

Prvý systém - hlavný - pozostáva z antigénu a protilátky (jeden je známy, druhý nie). Pridáva sa k nemu určité množstvo komplementu. Keď sa antigén a protilátka tohto systému zhodujú, spoja sa a naviažu komplement. Výsledný komplex je jemne rozptýlený a nie je viditeľný.

sérodiagnostika reakcie fixácie komplementu

Tvorba tohto komplexu je známa pomocou druhého hemolytického alebo indikátorového systému. Zahŕňa ovčie erytrocyty (antigén) a im zodpovedajúce hemolytické sérum (protilátka), t.j. hotový imunitný komplex. V tomto systéme môže k lýze erytrocytov dôjsť len v prítomnosti komplementu. Ak je komplement viazaný prvým systémom (ak v ňom korešponduje antigén a protilátka), tak v druhom systéme nedôjde k hemolýze – keďže tam nie je voľný komplement. Neprítomnosť hemolýzy (obsah skúmavky je zakalený alebo je na dne skúmavky sediment erytrocytov) sa zaznamenáva ako pozitívny výsledok RSK.

Ak sa v prvom systéme antigén nezhoduje s protilátkou, potom sa imunitný komplex nevytvorí a komplement zostáva voľný. Komplement, ktorý zostáva voľný, sa podieľa na druhom systéme, čo spôsobuje hemolýzu - výsledok RSC je negatívny (obsah skúmaviek je priehľadný - "laková krv").

Zložky reakcie fixácie komplementu:

1. Antigén - zvyčajne lyzát, extrakt, haptén; menej často suspenzia mikroorganizmov

2. Protilátka – sérum pacienta

3. Doplnok - sérum pre morčatá

4. Antigén - ovčie erytrocyty Hemolytický systém

5. Protilátka - hemolyzín proti ovčím erytrocytom

6. Izotonický roztok

Príprava ingrediencií

1. Sérum sa zriedi 3-krát menej, ako je jeho titer. Na celý experiment pripravte celkové riedenie séra, ktorého objem sa určí vynásobením objemu séra v jednej skúmavke (napríklad 0,5 ml) počtom skúmaviek o niečo väčším, ako je ich počet v experimente. Prebytok kvapaliny je nevyhnutný pri príprave všetkých zložiek reakcie: časť zostáva na stenách skúmaviek, baniek, pipiet. Objemy zriedeného hemolyzínu a suspenzie erytrocytov, pridanie séra k erytrocytom, dôkladne premiešajte a inkubujte 30 minút pri 37 °C (senzibilizácia).

2. Ovčie erytrocyty. Pre celý počet skúmaviek v experimente sa pripraví 3 % suspenzia premytých ovčích erytrocytov. Na prípravu hemolytického systému sa 30 minút pred jeho zavedením do experimentu zmiešajú rovnaké objemy baraních erytrocytov s protilátkou proti nim.

3. Doplnok sa zvyčajne riedi v pomere 1 : 10. Pred každým experimentom sa musí titrovať. Titer komplementu je jeho najmenšie množstvo, po pridaní do hemolytického systému dôjde k úplnej hemolýze do 1 hodiny pri 37°C.

4. Antigén sa zvyčajne dostáva hotový s uvedením jeho titra, t.j. množstvo, ktoré by po zriedení antigénu malo byť obsiahnuté v 1 ml. Napríklad pri titre 0,4 sa zriedi v 0,96 ml izotonického roztoku. Podľa skúseností odoberte množstvo antigénu, ktoré sa rovná polovici titra (0,5 ml). Toto je jeho pracovná dávka. Pripravte celkové riedenie antigénu pre celý experiment vynásobením 0,5 ml počtom skúmaviek v experimente.

5. Protilátka – sérum pacienta. Čerstvé sérum sa pred experimentom inaktivuje, aby sa zničil komplement v ňom prítomný. K tomu sa zahrieva 30 minút na 56°C vo vodnom kúpeli alebo v inaktivátore s termostatom. Uprednostňuje sa posledná metóda: eliminuje možnosť prehriatia

Vyhlásenie o reakcii fixácie komplementu (RSC).

Reakcia sa vloží do objemu 1 cu. cm (0,2 kubických cm každého komponentu).

Testovacie séra sa vyšetrujú v riedení 1:5 a 1:10 (dávka séra je 0,04 cm3 a 0,02 cm3 so špecifickým antigénom, pri riedení 1:5 s kontrolným antigénom (pre špecifickosť) a bez antigén (pre antikomplementaritu).

Testované a kontrolné séra sa inaktivujú v deň reakcie v zriedenej forme pri 56-65 °C (v závislosti od typu zvieraťa) počas 30 minút. (aj v RDSC).

Oba stupne reakcie sa uskutočňujú vo vodnom kúpeli pri 37-38°C, bakteriolytický systém sa udržiava 60 minút, druhý stupeň reakcie (s hemolytickým systémom) je 20 minút.

Ovládanie hlavného zážitku RSK:

pozitívne sérum zriedené 1:5 bez antigénu a s kontrolným antigénom; v riedeniach od 1:5 do jeho titra so špecifickým antigénom;

negatívne sérum v riedeniach 1:5 a 1:10 so špecifickým antigénom, v riedení 1:5 s kontrolným antigénom a bez antigénu - špecifické a kontrolné antigény v dvojnásobnej dávke - pre antikomplementaritu (komplement +) a pre hemotoxicitu (komplement );

hemolytický systém pre hemotoxicitu (doplnok).

Účtovanie výsledkov. V kontrolách by nemali byť ani stopy po hemolýze, pretože jedna z nich nemá komplement, zatiaľ čo druhá neobsahuje hemolyzín. Kontroly indikujú neprítomnosť hemotoxických reakcií (schopnosť spontánne lyzovať erytrocyty) v zložkách.

V experimente môže aktivita komplementu klesnúť v dôsledku jeho nešpecifickej adsorpcie inými reakčnými zložkami, preto sa pre experiment množstvo komplementu zvýši: odoberie sa dávka podľa titra. Toto je pracovná dávka.

Existujú rôzne možnosti inscenácie RSC: classic. metóda nastavenia vo forme makro- a mikrovariantov, reakcia dlhodobej fixácie komplementu (RDSC) v chlade, metóda veličín. RSC 50% hemolýzou senzibilizovaných erytrocytov atď. Na diagnostiku množstva ochorení sa používa citlivejšia metóda - RDSC.

Vyjadrenie reakcie dlhodobej fixácie komplementu (RDSC).

Prvá fáza reakcie sa uskutočňuje v chladničke pri teplote 2-6 °C počas 16-18 hodín, druhá fáza vo vodnom kúpeli počas 20 minút pri teplote 37-38 °C.

Doplnok sa používa v pracovnom riedení 1:25 alebo 1:30 (pri stanovení jeho pracovného riedenia).

Prvý deň sa séra a antigén plnia do fliaš na hlavný experiment. Reakcia sa vloží do objemu 1 cu. cm (0,2 kubických cm každého komponentu). Ovládanie RDSC je rovnaké ako pri nastavení RSC.

Potom, doplnok 0,2 cu. cm, v závislosti od jeho pracovného riedenia sa skúmavky pretrepú a vložia do chladničky na 16-18 hodín. pri 2-6°C.

Nasledujúci deň sa stojany s prvou fázou vyberú z chladničky a po 20-30 minútach. pri izbovej teplote sa hemolytický systém naleje do všetkých skúmaviek v dávke (v danom príklade 0,6 cm kubického). Stojany sa pretrepú a umiestnia sa na 20 minút do vodného kúpeľa. pri 37-38 °C.

Schéma hlavného experimentu RDSC je uvedená v tabuľke 3.

Po zohľadnení výsledkov RSC sa RDSC vykonáva dvakrát: prvýkrát - bezprostredne po vodnom kúpeli, druhýkrát - potom, čo sa erytrocyty usadili na dne skúmavky (3-4 hodiny po vodnom kúpeli) alebo ďalší deň, ak sa uchováva v chladničke pri teplote od 2 °C do 6 °C.

Na objektívne stanovenie výsledkov reakcie sa odporúča vyhodnotiť percento hemolýzy. Na tento účel sa z reakcie vyberie 5 skúmaviek s úplnou (100%) hemolýzou a kvapalina z nich sa naleje do jednej skúmavky. Pripravujú sa z neho riedenia s nižším percentom hemolýzy, takzvaná "štandardná" stupnica.

Stupeň hemolýzy v skúmavkách s testovacími sérami sa stanoví porovnaním so stupňom hemolýzy v „štandardných“ skúmavkách a percento hemolýzy sa vyjadrí krížikmi.

Stupeň oneskorenia je nepriamo úmerný percentu hemolýzy erytrocytov:

++++ (4 krížiky) - žiadna hemolýza, supernatant priehľadný, bezfarebný;

+++ (3 kríženia) - hemolýza 25% erytrocytov;

++ (2 kríženia) - hemolýza 50% erytrocytov;

+ (1 kríž) - hemolýza 75% erytrocytov;

(mínus) - úplná hemolýza erytrocytov, bez sedimentu, kvapalina je intenzívne zafarbená hemoglobínom.

Vyhodnotenie výsledkov RSK, RDSK.

Vyhodnoťte testovacie séra v riedeniach 1:5 a 1:10 (0,04 cm3, 0,02 cm3) s úplnou hemolýzou erytrocytov v kontrolnom sére bez antigénu a s kontrolným antigénom.

Pozitívna reakcia sa hodnotí, keď sa hemolýza erytrocytov oneskorí o 3-4 kríženia v riedení 1:10.

Pochybné - s oneskorením hemolýzy erytrocytov o 1 kríž v riedení séra 1: 10 a od 2 do 4 krížov v riedení 1: 5.

Negatívny - s úplnou hemolýzou erytrocytov v riedeniach séra 1: 5 a 1: 10.