Bakteriyolojik laboratuvarın ekipmanı ve çalışma şekli. bakteriyolojik laboratuvar. Bir mikrobiyolojik laboratuvarın çalışması için gerekli modern genel laboratuvar ekipmanı

Bulaşıcı hastalık patojenleri ile çalışmak, laboratuvar tesislerinin ayrı bir binada bulunmasını veya hastane koğuşlarından, yiyecek bloklarından izole edilmesini gerektirir. Teşhis laboratuvarlarının iki girişi olmalıdır: biri çalışanlar için, diğeri araştırma için malzeme teslim etmek için. Transfer penceresinden malzeme alınmasına izin verilir. Laboratuvar tesisleri "bulaşıcı" ve "temiz" bölgelere ayrılmıştır ve analiz sırasında bulunur.

Laboratuvarın "temiz" alanı şunları içerir:

1. Dış giyim için yer.
2. Hazırlık çalışmaları için oda (hazırlık odası, besin ortamının hazırlanması ve şişelenmesi için yıkama odası, vb.)
3. Sterilizasyon.
4. Kültür ortamını ve teşhis hazırlıklarını saklamak için buzdolabı bulunan bir oda.
5. Dinlenmek ve yemek yemek için oda.
6. Dokümantasyon odası.
7. Yardımcı odalar.
8. Tuvalet.

"Bulaşıcı" bölgeye yerleştirilir:

1. Araştırma için alınan materyalleri almak ve kaydetmek için bir oda.

3. Bakteriyolojik araştırma odaları.

4. Serolojik çalışmalar için odalar.

5. Lüminesan mikroskopi için oda.

6. Zooentomolojik çalışma için yer.

7.Termostatik oda ve otoklav.

Canlı organizmalarla çalışmanın yapıldığı tesisler bakterisit lambalarla donatılmıştır.

Tıbbi mikrobiyoloji laboratuvarının görevi - bulaşıcı hastalıkların teşhisi. Bunu yapmak için patojen izole edilir ve vücudun mikroorganizmaların girişine karşı bağışıklık tepkisi belirlenir (serolojik teşhis). Ek olarak, patojenik (patojenik) mikroorganizmaların taşıyıcılarının tanımlanmasını gerçekleştirin. Virolojik çalışmaların yapıldığı laboratuvarlar bulunmaktadır. Özel sıhhi ve bakteriyolojik laboratuvarlarda, dış ortamın ve çeşitli nesnelerin mikrobiyal kontaminasyon derecesini belirlemek için çalışmalar yapılır.

laboratuvar odası yürütmek için tasarlanmış mikrobiyolojik araştırma. Geniş ve aydınlık olmalıdır. Duvarlar hafif yağlı boya ile boyanmış, zemin muşamba ile kaplanmış, laboratuvar masaları ıslak temizleme ve dezenfeksiyona uygun plastik veya cam ile kaplanmıştır. Laboratuar odası, bir doktor ve bir laboratuar asistanı için çalışma masaları, boyama hazırlıkları için bir yer, bir termostat, bir buzdolabı, bir santrifüj, bir mikroskop, dolaplar, bir sıcak ve bir lavabo ile donatılmıştır. soğuk su, gaz brülörleri (gaz yokluğunda alkol brülörleri ile çalışırlar).

Laboratuvar odalarının sayısı, laboratuvarın iş hacmine göre belirlenir. Büyük laboratuvarlarda, çeşitli patojenlerle çalışmak için ayrı odalar tahsis edilir.

Masaüstü, ışığın yandan veya doğrudan düşmesi için pencere tarafından kurulur. Masanın üzerine bir brülör, bakteriyolojik halkalar, dezenfektan solüsyonlu kavanozlar ve pamuk yünü yerleştirilir.

Çalışmaya başlamadan önce, çalışma için gerekli olan her şey masaya yerleştirilir. Brülör, çalışanın ön koluna eşit bir mesafede, yani çalışma sırasında gereksiz hareketleri dışlayan bir konumda kurulur. Brülördeki alevin boyutu ve doğru ışıma, çalışmaya başlamadan önce ayarlanır.

Rutin araştırma sırasında bir termostatta sıcaklık 37°C olmalıdır. Büyük laboratuvarlarda özel bir termal oda donatılabilir. Sıcaklık günlük olarak kaydedilir.

Pirinç. 1 Kuru fırın

Bazı besin ortamları, teşhis müstahzarları, kan, safra vb. buzdolabında saklanır.

Katı parçacıkları bir sıvıdan ayırmak için bir santrifüj kullanılır (örneğin, eritrositler serumdan).

Raflar, tabaklar, kuru besin ortamı, reaktifler vb. dolaplarda tutulur.

Lavabonun yanında, elleri temizlemek için dezenfektan solüsyonlu bir kap ve ilk yardım için bir dizi eşya içeren bir ilk yardım çantası olmalıdır.

Boks, özel sterilite gerektiren koşullarda mikrobiyolojik çalışmalar için kesinlikle izole edilmiş bir odadır. Havanın gübrelenmesi, bakterisit lambalar kullanılarak gerçekleştirilir. Besleme ve egzoz havalandırması yoluyla kutuya belirli bir sıcaklık ve nemde dezenfekte edilmiş hava beslemesi yapılır. en iyi yol emin olmak gerekli koşullar iş için. Genellikle boksta iki kişi çalışır. Kıyafetlerini (cüppesi, terlik, şapka, maske) değiştirdikleri antreden kutuya girerler ve ikinci kapıdan kutuya giderler.

Boksta konuşmazlar ve gereksiz hareketlerden kaçınırlar.

Kültür ortamının hazırlanma odası, yıkama ve sterilizasyon odasının yakınında olmalıdır. Bu odada sıcak ve soğuk su bulunan bir lavabo, bir damıtıcı, bir ocak (gaz veya elektrik), kuru besin maddelerini, kimyasalları ve steril kapları saklamak için dolaplar veya raflar bulunmalıdır.

yıkama- lavabosu olması gereken bulaşıkları yıkamak ve işlemek için bir oda (soğuk ve sıcak su) ve bir tabak. Çamaşır odası, bulaşık yıkamak için bulaşıklarla donatılmış masalar, raflar ile donatılmıştır: deterjanlar, ruffs, paçavra.

Sterilizasyon odasında temiz bulaşıkları, besin ortamlarını ve atık malzemeleri dekontamine etmek için cihazlar vardır: otoklavlar, kurutma kabini vb.

Ayrı bir hazırlık odası varsa, yemeklerin hazırlanması, paketlenmesi ve diğer yardımcı işler için kullanılır.

Kayıt defterinde veya yerini alan binaların bir bölümünde, çalışma için alınan materyali alır ve kaydederler ve mikrobiyolojik çalışmanın sonuçlarını yayınlarlar.

Vivaryum- sadece büyük laboratuvarlarda bulunan deney hayvanlarının tutulduğu bir oda.

Mikroorganizmaların tüm mikrobiyolojik, biyokimyasal ve moleküler biyolojik çalışmaları, yapısı ve ekipmanı çalışma nesnelerine (bakteriler, virüsler, mantarlar, protozoa) ve ayrıca hedef yönelimlerine (bilimsel araştırma, hastalıkların teşhisi). İnsan ve hayvan hastalıklarının immün yanıtı ve serodiagnozu çalışması immünolojik ve serolojik (serum - kan serumu) laboratuvarlarında gerçekleştirilir.

Bakteriyolojik, virolojik, mikolojik ve serolojik (immünolojik) laboratuvarlar, sıhhi ve epidemiyolojik istasyonların (SES), teşhis merkezlerinin ve büyük hastanelerin bir parçasıdır. SES laboratuvarları, hastalardan ve temas eden kişilerden elde edilen materyallerin bakteriyolojik, virolojik ve serolojik analizlerini yapmakta, bakteri taşıyıcılarını incelemekte ve su, hava, toprak, Gıda Ürünleri vb.

Hastanelerin ve teşhis merkezlerinin bakteriyolojik ve serolojik laboratuvarlarında bağırsak, pürülan, solunum ve diğer bulaşıcı hastalıkların teşhisi için araştırmalar yapılır, sterilizasyon ve dezenfeksiyonun mikrobiyolojik kontrolü yapılır.

özellikle teşhis tehlikeli enfeksiyonlar(veba, tularemi, şarbon vb.) organizasyonu ve işleyişi sıkı bir şekilde düzenlenmiş özel rejim laboratuvarlarında gerçekleştirilir.

Virolojik laboratuvarlar, virüslerin (grip, hepatit, çocuk felci vb.), bazı bakterilerin neden olduğu hastalıkları teşhis eder - klamidya(ornitoz vb.) ve riketsiya(tifüs, Q ateşi, vb.). Virolojik laboratuvarları düzenlerken ve donatırken, en katı asepsi gerektiren virüsler, hücre kültürleri ve tavuk embriyoları ile çalışmanın özelliklerini dikkate alırlar.

Mikolojik laboratuvarlar, mikozların etken maddeleri olan patojenik mantarların neden olduğu hastalıkların teşhisini gerçekleştirir.

Laboratuvarlar genellikle, alanı işin kapsamı ve amacı ile belirlenen birkaç odada bulunur.

Her laboratuvarda şunlar bulunur:

a) bireysel patojen gruplarıyla çalışmak için kutular;

b) serolojik araştırmalar için tesisler;

c) bulaşık yıkama ve sterilize etme, yemek pişirme odaları
leniya besin ortamı;

d) sağlıklı ve deney hayvanları için kutulu vivaryum
nyh;

e) testlerin alınması ve verilmesi için kayıt.

Bu odaların yanı sıra virolojik laboratuvarlarda, test materyalinin özel olarak işlenmesi ve hücre kültürleriyle çalışılması için kutular bulunur.

Mikrobiyolojik laboratuvarlar için donatım

Laboratuvarlar bir dizi zorunlu alet ve aparatla donatılmıştır.

1. Mikroskopi aletleri: Ek cihazlarla (aydınlatıcı, faz kontrast cihazı, karanlık alan yoğunlaştırıcı, vb.), lüminesan mikroskopla biyolojik daldırma mikroskobu.

2. Termostatlar ve buzdolapları.

3. Besin ortamlarının, çözeltilerin vb. hazırlanması için cihazlar: damıtılmış su (damıtıcı), teknik ve analitik teraziler, pH ölçerler, filtreleme ekipmanı, su banyoları, santrifüjler elde etmek için cihazlar.

4. Mikroplarla manipülasyon için bir dizi araç: bakteriyolojik halkalar, spatulalar, iğneler, cımbız vb.

5. Laboratuar kapkacakları: test tüpleri, şişeler, Petri kapları, şilteler, şişeler, ampuller, Pastör ve dereceli pipetler, vb., pamuklu gazlı bez tüpleri yapmak için aparatlar.

Büyük teşhis kompleksleri, alınan bilgileri değerlendirmek için otomatik analizörlere ve bilgisayarlı bir sisteme sahiptir.

Laboratuvarda, özel boyalar, alkol, asitler, filtre kağıdı vb. Çözeltilerin bulunduğu mikroskobik müstahzarları boyamak için bir yer vardır. Her işyeri bir gaz brülörü veya ispirto lambası ve dezenfektan solüsyonlu bir kap ile donatılmıştır. Günlük çalışma için laboratuvar, gerekli besin ortamına, kimyasal reaktiflere, teşhis hazırlıklarına ve diğer malzemelere sahip olmalıdır.

Büyük laboratuvarların sahip olduğu mikroorganizmaların toplu ekimi için termostatik odalar, serolojik reaksiyonların ayarlanması. Kültürlerin yetiştirilmesi, saklanması, laboratuvar kaplarının sterilizasyonu ve diğer amaçlar için aşağıdaki ekipmanlar kullanılmaktadır.

1. Termostat. Sabit bir sıcaklığın muhafaza edildiği bir cihaz. Çoğu patojen mikroorganizmanın üremesi için optimum sıcaklık 37 "C'dir. Termostatlar hava ve sudur.

2. Mikroanaerostat. Anaerobik koşullar altında mikroorganizmaları büyütmek için aparat.

3. C0 2 - kuluçka makinesi. Belirli bir gaz bileşiminin sabit bir sıcaklığını ve atmosferini oluşturmak için bir cihaz. Atmosferin gaz bileşimini talep eden mikroorganizmaların yetiştirilmesi için tasarlanmıştır.

4. buzdolapları. Mikrobiyoloji laboratuvarlarında mikroorganizma kültürlerinin, besleyici ortamların, kanın, aşıların, serumların ve diğer biyolojik olarak aktif preparatların yaklaşık 4 °C sıcaklıkta saklanması için kullanılır. İlaçları 0 ° C'nin altındaki sıcaklıklarda saklamak için, sıcaklığın -20 ° C veya -75 ° C'de tutulduğu düşük sıcaklıklı buzdolapları kullanılır.

5. Santrifüjler. Mikroorganizmaların, eritrositlerin ve diğer hücrelerin çökeltilmesinde, homojen olmayan sıvıların (emülsiyonlar, süspansiyonlar) ayrılmasında kullanılır. Laboratuvarlarda farklı çalışma modlarına sahip santrifüjler kullanılmaktadır.

6. Kurutma ve sterilizasyon kabini(Pastör fırın). Cam laboratuvar cam eşyalarının ve diğer ısıya dayanıklı malzemelerin kuru hava sterilizasyonu için tasarlanmıştır.

7. Buhar sterilizatörü (otoklav). Aşırı ısıtılmış buharla (basınç altında) sterilizasyon için tasarlanmıştır. Mikrobiyoloji laboratuvarlarında çeşitli modellerde (dikey, yatay, sabit, portatif) otoklavlar kullanılmaktadır.

BAKTERİYOLOJİK, VİROLOJİK, MİKOLOJİK, İMMÜNOLOJİK LABORATUVARLAR VE EKİPMANLARI. MODERN MİKROSKOP CİHAZI. MİKROSKOPİ YÖNTEMLERİ. MİKROORGANİZMALARIN MORFOLOJİSİ ÇALIŞMA YÖNTEMLERİ

programı

1. Mikrobiyolojik (bakteriyolojik, virolojik, mikolojik) laboratuvarların çalışma kuralları ve organizasyonu.

2. Mikrobiyoloji laboratuvarının temel araç ve gereçleri.

3. Mikroskoplar ve mikroskobik ekipman. Daldırma mikroskobu ile çalışma kuralları (hedefler).

Gösteri

1. Mikrobiyoloji laboratuvarlarında kullanılan ana alet ve ekipmanların düzenlenmesi ve uygulanması: termostat, santrifüjler, otoklav, kurutma kabini, alet ve gereçler.

2. Biyolojik mikroskop cihazı. Çeşitli mikroskopi yöntemleri: karanlık alan, faz kontrastı, ışıldayan, elektron.

3. Mikropların (maya ve bakteri) çeşitli mikroskopi yöntemleriyle hazırlanması.

öğrencilere atama

1. Cinsine ait maya benzeri mantarların mikroskobik ve taslak preparatları kandida kullanarak Farklı türde mikroskopi.

yönergeler

Mikrobiyoloji laboratuvarlarında çalışma kuralları.

Mikrobiyoloji laboratuvarında çalışmak tıbbi kurum bulaşıcı hastalıkların patojenleri ile gerçekleştirilir - patojenik mikroorganizmalar.

Bu nedenle, enfeksiyona karşı korunmak için personelin iç düzenlemelere kesinlikle uyması gerekir:

1. Tüm çalışanlar tıbbi önlük, bone ve çıkarılabilir ayakkabı ile çalışmalıdır. Laboratuvara bornozsuz giriş kesinlikle yasaktır. Gerekli durumlarda işçiler yüzlerine gazlı bez maske takıyor. Özellikle tehlikeli mikroplarla çalışma, özel talimatlarla düzenlenir ve güvenli laboratuvarlarda gerçekleştirilir.

2. Laboratuvarda sigara içmek ve yemek yemek yasaktır.

3. İş yeri iyi durumda tutulmalıdır. Çalışanların kişisel eşyaları özel olarak belirlenmiş bir yerde saklanmalıdır.

4. Bir masa, zemin ve diğer yüzeylerdeki enfekte bir malzeme ile kazara temas halinde, bu yer dezenfektan solüsyonu ile dikkatlice tedavi edilmelidir.

5. Mikrobiyal kültürlerin saklanması, izlenmesi ve yok edilmesi özel talimatlara göre yapılmalıdır. Patojenik mikropların kültürleri özel bir dergide kayıtlıdır.

6. İşin sonunda eller iyice yıkanmalı ve gerekirse dezenfektan solüsyonu ile tedavi edilmelidir.

Mikroskoplar ve mikroskopi yöntemleri

Pirinç. 1.1. Mikroskoplar.

fakat - Genel form mikroskop "Biolam"; b — MBR-1 mikroskop: 1 — mikroskop tabanı; 2 - konu tablosu; 3 - nesne tablosunu hareket ettirmek için vidalar; 4 - ilaca basan terminaller; 5 - yoğunlaştırıcı; 6 - kondenser braketi; 7 - manşondaki kondansatörü güçlendiren vida; 8 - kondansatörü hareket ettirmek için kol; 9 - kondansatörün iris diyaframının kolu; 10 - ayna; 11 - tüp tutucu; 12 - makrometrik vida sapı; 13 - mikrometrik vidanın sapı; 14 - hedeflerin tabancası; 15 - lensler; 16 - eğimli boru; 17 - boruyu sabitlemek için vida; 18 - mercek.

Mikrobiyolojik çalışmalar için çeşitli mikroskop türleri (biyolojik, ışıldayan, elektronik) ve özel mikroskopi yöntemleri (faz-kontrast, karanlık alan) kullanılır.

Mikrobiyolojik uygulamada yerli markaların mikroskopları kullanılır: MBR-1, MBI-2, MBI-3, MBI-6, "Bio-lam" R-1, vb. (Şekil 1.1). Boyutu 0,2-0,3 mikrondan az olmayan çeşitli mikropların şeklini, yapısını, boyutunu ve diğer özelliklerini incelemek için tasarlanmıştır.

daldırma mikroskopisi

Yöntemin çözünürlüğünü artırmak için kullanılır ışık mikroskobu. Bir ışık-optik mikroskopi sisteminin çözme gücü, görünür ışığın dalga boyu ve sistemin sayısal açıklığı ile belirlenir. Sayısal açıklık, merceğe giren maksimum ışık konisinin açısının büyüklüğünü gösterir ve nesne ile objektifin merceği arasındaki ortamın optik özelliklerine (kırılma gücü) bağlıdır. Merceği, cama yakın yüksek kırılma indisine sahip bir ortama (mineral yağ, su) daldırmak, ışığın nesneden saçılmasını önler.

Pirinç. 1.2. Daldırma sistemindeki ışınların seyri, n kırılma indisidir.

Pirinç. 1.3. Karanlık alan yoğunlaştırıcılarında ışınların yolu, a bir paraboloid yoğunlaştırıcıdır; b - kardioid kondansatör; 1 - mercek; 2 - daldırma yağı; 3 - hazırlık; 4 - ayna yüzeyi; 5 - diyafram.

Böylece sayısal açıklıkta bir artış ve buna bağlı olarak çözünürlük elde edilir. Daldırma mikroskopisi için, bir etiketle donatılmış özel daldırma lensleri kullanılır (MI - yağa daldırma, VI - suya daldırma). Daldırma mikroskobunun sınırlayıcı çözünürlüğü 0,2 µm'yi geçmez. Daldırma sistemindeki ışınların seyri Şekil 2'de gösterilmektedir. 1.2.

Bir mikroskobun toplam büyütmesi, objektifin büyütmesi ile oküler büyütmesinin çarpımı ile belirlenir. Örneğin, daldırma hedefi 90 ve göz merceği 10 olan bir mikroskobun büyütmesi: 90 x 10 = 900'dür.

İletilen ışıkta mikroskopi (parlak alan mikroskobu) Sabit müstahzarlarda lekeli nesneleri incelemek için kullanılır.

Karanlık alan mikroskobu. Doğal boyanmamış müstahzarlarda mikropların intravital çalışması için kullanılır. Karanlık alan mikroskobu, bir sıvı içinde asılı kalan parçacıkların yan aydınlatması altında ışık kırınımı olgusuna dayanır ( Tyndall etkisi). Etki, biyolojik bir mikroskopta geleneksel bir yoğunlaştırıcının yerini alan bir paraboloid veya kardioid yoğunlaştırıcı kullanılarak elde edilir (Şekil 1.3). Bu aydınlatma yöntemiyle, yalnızca nesnenin yüzeyinden yansıyan ışınlar merceğe girer. Sonuç olarak, karanlık bir arka planda (ışıksız görüş alanı) parlak parlak parçacıklar görülebilir. Bu durumda hazırlık, Şekil 2'de gösterilen forma sahiptir. 1.4, b (ek üzerinde).

Kontrast mikroskopi aşaması. Yerli ilaçların incelenmesi için tasarlanmıştır. Faz kontrast cihazı, şeffaf nesneleri mikroskopta görmeyi mümkün kılar. Işık, nesnenin optik yoğunluğuna bağlı olarak çeşitli biyolojik yapılardan farklı hızlarda geçer. Sonuç olarak, ışık dalgasının fazında gözle algılanmayan bir değişiklik meydana gelir. Özel bir kondansatör ve lens içeren faz cihazı, bir ışık dalgasının fazındaki değişiklikleri, genlikteki görünür değişikliklere dönüştürür. Böylece, nesnelerin optik yoğunluğundaki farkın arttırılması sağlanır. Olumlu veya olumsuz olabilen yüksek kontrast elde ederler. Pozitif faz kontrastı, parlak bir görüş alanındaki bir nesnenin karanlık bir görüntüsüne, negatif - bir nesnenin karanlık bir arka plan üzerindeki hafif bir görüntüsüne denir (bkz. Şekil 1.4; ekte).

Faz kontrast mikroskopisi için, geleneksel bir mikroskop ve ek bir faz kontrast cihazı KF-1 veya KF-4 (Şekil 1.5) ve ayrıca özel aydınlatıcılar kullanılır.

Lüminesan (veya floresan) mikroskopisi. Fotolüminesans fenomenine dayanır.

lüminesans- dış radyasyonun etkisi altında meydana gelen maddelerin parlaması: ışık, ultraviyole, iyonlaştırıcı vb. Fotolüminesans - ışığın etkisi altındaki bir nesnenin ışıldaması. Parlak bir nesneyi mavi ışıkla aydınlatırsanız, kırmızı, turuncu, sarı veya yeşil ışınlar yayar. Sonuç, nesnenin renkli bir görüntüsüdür.

Pirinç. 1.5. Faz-kontrast cihazı, a - faz hedefleri; b - yardımcı mikroskop; c - fazlı kondansatör.

Yayılan ışığın dalga boyu (lüminesans rengi), ışıldayan maddenin fizikokimyasal yapısına bağlıdır.

Öncelik biyolojik nesnelerin ışıldaması (sahip olmak, veya biyolüminesans) kendi ışıldayan maddelerinin mevcudiyeti nedeniyle ön boyama olmadan gözlemlenir, ikincil (uyarılmış) -özel ışıldayan boyalarla yapılan boyama hazırlıklarının bir sonucu olarak ortaya çıkar - florokromlar(akridin portakalı, auromin, korifosfin, vb.). Lüminesan mikroskopi, geleneksel yöntemlere göre bir takım avantajlara sahiptir: canlı mikropları inceleme ve test materyalinde düşük konsantrasyonlarda tespit etme yeteneği. yüksek derece zıtlık.

Laboratuvar pratiğinde, floresan mikroskopi, birçok mikrobu tanımlamak ve incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır.

Elektron mikroskobu. Boyutları bir ışık mikroskobunun (0,2 mikron) çözünürlüğünün ötesinde olan nesneleri gözlemlemenizi sağlar. Virüsleri incelemek için bir elektron mikroskobu kullanılır, iyi yapıçeşitli mikroorganizmalar, makromoleküler yapılar ve diğer mikroskobik nesneler. Bu tür mikroskoplardaki ışık ışınları, belirli ivmelerde yaklaşık 0.005 nm dalga boyuna sahip olan bir elektron akışı ile değiştirilir, yani. görünür ışığın dalga boyundan neredeyse 100.000 kat daha küçüktür. 0,1-0,2 nm'ye ulaşan elektron mikroskobunun yüksek çözünürlüğü, 1.000.000'a kadar toplam yararlı bir artış elde etmenizi sağlar.

"Yarı saydam" tipteki cihazlarla birlikte taramalı elektron mikroskopları, nesnenin yüzeyinin bir rölyef görüntüsünü sağlamak. Bu cihazların çözme gücü, "transmisyon" tipi elektron mikroskoplarından çok daha düşüktür.

Mikroskop ile çalışma kuralları

Herhangi bir ışık mikroskobu ile çalışmak, görüş alanının doğru şekilde aydınlatılmasını ve çeşitli amaçlarla hazırlanmasını ve mikroskopisini içerir. Aydınlatma, özel ışık kaynaklarının kullanıldığı doğal (gün ışığı) veya yapay olabilir - farklı markaların aydınlatıcıları.

Daldırma lensli preparatların mikroskopisi yapılırken, kesinlikle belirli bir sıraya uyulmalıdır:

1) Slayt üzerinde hazırlanan ve lekelenen smear üzerine bir damla immersiyon yağı damlatın ve klemplerle sabitleyerek slayt masasına yerleştirin;

2) tabancayı daldırma hedefinin 90x veya 100x işaretine çevirin;

3) mercek bir damla yağa daldırılana kadar mikroskop tüpünü dikkatlice indirin;

4) makrometrik vidayı kullanarak yaklaşık odağı ayarlayın;

5) bir mikrometre vidası ile preparasyonun son odaklama işlemini kendi içinde döndürerek gerçekleştirin. sadece bir dönüş. Lensin lensle temas etmesine izin vermeyin.
paratomi, çünkü bu, kapak camının veya objektifin ön merceğinin kırılmasına neden olabilir (daldırma objektifinin serbest mesafesi 0,1–1 mm'dir).

Mikroskobun sonunda, daldırma lensinden yağı çıkarın ve tabancayı küçük bir 8x merceğe taşıyın.

Karanlık alan ve faz kontrast mikroskobu için doğal preparasyonlar kullanılır ("ezilmiş" damla vb., bkz. konu 2.1); 40x objektifle veya sayısal açıklığı 1,25 ila 0,85 arasında ayarlamanıza izin veren iris diyaframlı özel bir daldırma objektifi ile mikroskoplanmıştır. Slaytların kalınlığı 1-1.5 mm'yi, lamelleri - 0.15-0.2 mm'yi geçmemelidir.

Bulaşıcı hastalıkların patojenleri ile çalışma koşullarının düzenlenmesi, mikroorganizmaların insanlar için tehlike derecesine göre yapılır. Bu temelde, dört grup patojenik biyolojik ajan (PBA) tanımlanmıştır:

Grup I: özellikle tehlikeli enfeksiyonların patojenleri (veba, çiçek hastalığı vb.)

Grup II: yüksek derecede bulaşıcı bakteriyel, fungal ve viral enfeksiyonlar(şarbon, kolera, kuduz vb.)

Grup III: bağımsız nozolojik formlar (boğmaca, tetanoz, tüberküloz, vb.) olarak tanımlanan bakteriyel, fungal, viral ve protozoal enfeksiyonların etken maddeleri

Grup IV: bakteriyel, fungal, viral septisemi, menenjit, pnömoni, enterit, toksik enfeksiyonlara neden olan ajanlar, akut zehirlenme(Pseudomonas aeruginosa, vb.).

Çoğu mikrobiyolojik laboratuvar, PBA grupları III ve IV ile çalışır ve yalnızca özel laboratuvarlar, özellikle tehlikeli enfeksiyonların patojenlerinin (grup I ve II) araştırılmasıyla ilgilenir.

PBA grup III ve IV ile çalışan temel laboratuvarlar, bir takım gereksinimleri (ayrı bina veya ayrı giriş, su ve elektrik besleme sistemlerinin mevcudiyeti, ısıtma, havalandırma vb.) karşılamalı ve üretim kapasitesine uygun olarak gerekli tesis setine sahip olmalıdır. ve yapılan çalışmaların kapsamı. Her laboratuvarın bir "temiz" ve bir "kirli" alanı olmalıdır.

"Kirli" bölge, malzemenin kabulü ve kaydı için odalar, mikrobiyolojik araştırmalar için kutular ve odalar, termostatik, malzeme dezenfeksiyonu için otoklav içerir. Tüm odalardaki pencereler ve kapılar hava geçirmez şekilde kapatılmalıdır. Canlı mikroorganizmalarla çalışma odaları bakterisit lambalarla donatılmalı veya biyolojik güvenlik dolaplarına sahip olmalıdır. "Kirli" bölgenin besleme ve egzoz havalandırması, egzoz havası için ince filtrelerle donatılmalıdır. Masaların, otoklavların, dezenfektan solüsyonlu kapların, temiz ve enfekte malzeme raflarının zorunlu olarak etiketlenmesi. Laboratuvar özel mobilyalarla donatılmalı, deterjan ve dezenfektanlara dayanıklı düz zemin ve duvar yüzeylerine sahip olmalıdır.

“Temiz” bölge, ön çalışma için binaları (yıkama odası, hazırlık odası, besin ortamının hazırlanması ve doldurulması için oda, vb.), Dokümantasyonla çalışma odası, besin ortamının depolanması için buzdolaplı odalar ve teşhis preparatları, bir gardırop içerir. dış giyim için, dinlenme odası . "Temiz" bölgede, cansız PBA (serolojik, moleküler genetik, biyokimyasal çalışmalar) ile çalışmak mümkündür.

Patojenik mikroorganizmalarla çalışmanın güvenliğini sağlamak iki ana faktörü içerir: teknik ve insan. Teknik faktör, iş için gerekli "temiz" ve "kirli" bölgelerin, ekipmanın, koruyucu sistemlerin vb. mevcudiyetidir. İnsan faktörü, güvenliği sağlamak için insan eylemlerinin doğruluğu, profesyonel ekipmandaki yeterlilik seviyesi, olası enfeksiyon kaynakları ve mekanizmaları hakkında bilgi, uygun eğitim ve eğitimdir.

Bir eğitim bakteriyoloji laboratuvarında çalışmak aynı zamanda iki tehlikeli faktörle de ilişkilidir - bulaşıcı hastalıklara neden olan mikroorganizmalar ve anti-salgın ve yangın güvenliği önlemlerine uyulmasını gerektiren açık ateş. Öğrencilerin güvenlik kurallarına aşina olmaları ve bunlara kesinlikle uymaları gerekmektedir:

Gerekli:

Uzun kollu medikal önlük, medikal bone ve galoşlarda çalışmak;

Kişisel eşyalarınızı özel olarak belirlenmiş bir yerde saklayın, dış giyim eşyalarını vestiyerde bırakın;

Her tür faaliyet belirli bir alanda gerçekleştirilir: mikroorganizmalarla çalışmak - özel olarak donatılmış bir laboratuvar masasında, protokolleri doldurmak - masaüstünde;

Masa, zemin ve diğer nesnelere bulaşmış malzeme ile temas halinde derhal öğretmene haber veriniz ve dezenfekte ediniz;

· Enfekte materyaller, laboratuvardan çıkarılmadan önce kapalı, güçlü su geçirmez kaplara veya dezenfektan solüsyonlu kaplara yerleştirilmelidir.

Laboratuvar kapıları çalışma sırasında kapalı tutulmalıdır.

İşin sonunda ellerinizi iyice yıkayın ve gerekirse dezenfektan solüsyonu ile tedavi edin.

laboratuvarda yemek yemek

ağız yoluyla bir pipete sıvı çekmek

bir ruh lambasını diğerinden yakmak

yanan bir alkol lambası taşımak

Kullanım amacı sona erdikten sonra ispirto lambasını açık bırakın

Sabitlenmemiş müstahzarları, kültürlü Petri kaplarını ve bulaşıcı materyal içeren diğer kapları işyerinde bırakın

tohumlanmış Petri kaplarındaki test materyaline elinizle dokunun

Bakteriyolojik laboratuvar ve içindeki çalışma kuralları. Mikroorganizmaların sınıflandırılması. Bakterilerin morfolojisi. Mikrop türünü belirleme yöntemleri. bakteriyoskopik yöntem. Daldırma sistemli mikroskopi tekniği

ders özeti

Tıp ve Veterinerlik

DERS 1 DERSİN KONUSU: Bakteriyolojik laboratuvar ve içindeki çalışma kuralları. Mikroorganizmaların sınıflandırılması. Bakterilerin morfolojisi. Mikrop türünü belirleme yöntemleri. bakteriyoskopik yöntem. Daldırma sistemli mikroskopi tekniği. ÖĞRENİM HEDEFİ...

1. AKTİVİTE

DERSİN KONUSU : Bakteriyolojik laboratuvar ve içindeki çalışma kuralları. Mikroorganizmaların sınıflandırılması. Bakterilerin morfolojisi. Mikrop türünü belirleme yöntemleri. bakteriyoskopik yöntem. Daldırma sistemli mikroskopi tekniği.

ÖĞRENİM HEDEFİ: Bakteriyoloji laboratuvarının cihazını ve içindeki çalışma kurallarını öğrenin. Mikroorganizmaların sınıflandırılması ilkelerini öğrenin. Bakterilerin morfolojik özelliklerini ve mikrop türünü belirleme yöntemlerini incelemek. Daldırma sistemi ile bakteriyoskopik araştırma yöntemi ve mikroskopi tekniğinde uzmanlaşmak.

DERSİN AMAÇLARI:

1. Bakteriyolojik laboratuvarın yapısı ve içindeki çalışma kuralları hakkında bilgi edinin.

2. Mikroorganizmaların sınıflandırılması ilkeleriyle tanışın.

3. Bakterilerin morfolojik özelliklerini ve mikrop türünü belirleme yöntemlerini incelemek.

4. Daldırma sistemi ile mikroskopi tekniğinde ustalaşın.

Bakteriyolojik laboratuvar cihazı

Bakteriyolojik laboratuvar, patojen içeren materyallerin incelenmesi için tasarlanmıştır. Bakteriyel enfeksiyonlar, sıhhi ve mikrobiyolojik göstergeleri belirlemek, spesifik bağışıklık ve diğer mikrobiyolojik çalışmaların durumunu ve gerginliğini kontrol etmek. Bakteriyoloji laboratuvarı, diğer laboratuvarlardan izole edilmiş odalarda bulunmalıdır. gerekli ekipman ve mobilya. Laboratuvarın ayrı bir girişi, dolabı ve duş odası olmalıdır. Bakteriyolojik laboratuvar aşağıdaki binaları içermelidir:

Malzemelerin alınması ve kaydedilmesi için oda;

Mikrobiyolojik araştırmalar için kutulu odalar;

Otoklav;

yıkama;

Vivaryum.

Mikrobiyolojik araştırma odaları termostatlar, buzdolapları, santrifüjler, teraziler, su banyoları ve elektromanyetik karıştırıcılarla donatılmıştır. Masalara gerekli ekipmanlar yerleştirilir. Enfekte malzeme ile çalışma yapılırön kutulu kutu . Kutunun girişinde dezenfektana batırılmış bir mat olmalıdır. Kutu içerisinde gelen numuneler demonte edilir, smear-imprintleri hazırlanır ve sabitlenir, besin ortamlarına mikroorganizma aşıları yapılır. Bu nedenle, çalışma için gerekli aletlerin yerleştirildiği kutuya tablolar yerleştirilir: kullanılmış bulaşıklar için dezenfektan içeren kaplar, test tüpleri için raflar, test tüpleri ve besleyici ortamlı Petri kapları, steril pipetler, harçlar vb. , kapaklar, maskeler ve ayrıca soyunma odasında değiştirilebilir ayakkabılar olmalıdır. Antre, termostatlar, buzdolapları, santrifüjler ve diğer ekipmanları barındırabilir. Kutularda ve ön kutularda, ıslak temizleme, dezenfeksiyon ve bakterisit lambalarla ışınlama günlük olarak 30-40 dakika iş öncesi ve sonrası yapılır.

otoklavda iki otoklava sahip olmak gereklidir: temiz malzemeler için bir otoklav (cam eşyaların, besin maddelerinin, aletlerin sterilizasyonu için); enfekte materyaller için başka bir otoklav (enfekte olmuş alet ve malzemelerin atılması için).

yıkama bulaşık yıkamak için tasarlanmıştır. Enfekte materyalle kontamine olan tabaklar, pipetler ve aletler ancak sterilizasyondan sonra yıkanmalıdır. Kurutma dolapları vardır.

vivaryum laboratuvar hayvanlarını tutmak için kullanılan binaları ifade eder. Bir vivaryumda karantina bölümü, deney ve sağlıklı hayvanlar için odalar, kafesleri yıkama ve dezenfekte etme odaları, envanter ve tulumlar, yemek hazırlamak için bir mutfak, kiler, yem ve bir yakma fırınının olması gerekir. Vivaryumun tüm odaları birbirinden izole edilmelidir.

Bakteriyolojik bir laboratuvarda çalışma kuralları

Laboratuvar personeli aşağıdaki kurallara uymalıdır:

1. Özel kıyafetlerle çalışmasına izin verilir - sabahlık ve şapka. Boksta steril önlük, maske, bone ile çalışırlar ve gerekirse lastik eldiven ve gözlük takarlar. Ayakkabı değiştirdiğinizden emin olun.

2. Önlükle laboratuvardan çıkmak veya önlük üzerine dış giyim giymek yasaktır.

3. Laboratuvarda sigara içmek ve yemek yemek yasaktır.

4. Analiz için laboratuvara giren tüm materyallerin enfekte olduğu kabul edilmelidir. Bu nedenle, malzeme ambalajından çıkarken dikkatli olunmalıdır. Konteynerlerin dışı dezenfektan solüsyonla silinmeli ve tepsilere veya küvetlere yerleştirilmelidir.

5. Sabahlık, eller, masa, ayakkabılar üzerinde enfeksiyon bulaşmış malzeme ile temas halinde dezenfeksiyon işlemi yapılmalı ve laboratuvar başkanına bildirilmelidir.

6. Enfekte materyal otoklavlanarak yok edilmelidir. Aletler ve işten sonra masaüstünün yüzeyi dezenfekte edilir.

7. Ön dezenfeksiyon yapılmadan laboratuvardan ekipman, envanter, malzemelerin çıkarılması yasaktır.

8. Pipetler, lamlar ve lameller ve diğer kullanılmış gereçler dezenfektan solüsyonuna daldırılarak dezenfekte edilir.

9. İş bitiminde işyeri düzene konulur ve iyice dezenfekte edilir. Daha fazla çalışma için gerekli olan mikroorganizma kültürleri buzdolabında saklanır.

Bakteriyolojik laboratuvar aşağıdaki belgeleri tutar:

1. Müze kültür türlerinin envanter defteri.

2. Laboratuvarda malzeme hareketi günlüğü.

3. Enfekte materyalin sterilizasyon ve imha dergisi.

4. Enfekte deney hayvanlarının kaydı.

5. Araştırma dergisi (uzmanlık).

Mikroorganizmaların sınıflandırılması

sınıflandırma organizmaların, bunların muhasebeleştirilmesi esasına göre dağılımıdır. ortak özellikler gruplar halinde veya takson . Sınıflandırma dayanmaktadır dış işaretler organizmalar (fenotip) vegenetik özelliklerorganizmalar (genotip).

şu anda mMikroorganizmaların ir'si aşağıdaki formlara ayrılır:

1. Hücresel olmayan formlar:

prionlar;

viroidler;

Virüsler.

2. Hücre formları:

2.1. Prokaryotlar:

Bakteri alanı:

İnce hücre duvarlı bakteriler (gram-negatif);

Kalın duvarlı bakteriler (gram-pozitif);

Hücre duvarı olmayan bakteriler (mikoplazma).

Arke alanı:

Arkebakteriler.

2.2. ökaryotlar:

protozoa;

Mantarlar.

Yaşayan dünyanın sınıflandırılması, hücre yapısının tipine dayanır - ökaryotik veya prokaryotik. Bir prokaryotik (bakteriyel) hücre ile bir ökaryotik hücre arasındaki temel farklar şunlardır: aşağıdaki yapıların yokluğu: resmileştirilmiş bir çekirdek (yani, bir nükleer zar), hücre içi zarlar, nükleoller, Golgi kompleksi, lizozomlar, mitokondri.

Mikropların sınıflandırılması aşağıdakileri kullanırtaksonomik kategoriler: krallık, bölüm, sınıf, düzen, aile, cins, tür. HAKKINDAAna taksonomik birim türdür.Mikroorganizmaların adı, Uluslararası Bakteri Adlandırma Kodunun kurallarına göre belirlenir. bakteri türlerini belirtmek için kullanılır.çift ​​(ikili) isimlendirme, önerilen XVIII Yüzyılda Carl Linnaeus. İsimlendirmeye göre, ilk önce Latin harfleriyle yazılmıştır. cins adı (genel ad) ve ardından - tür adı (tür adı). Mikroorganizma sadece cinse ait ise tür adı yerine kelime yazılır. sp. (Türler - görüş). Bir mikrobun jenerik ilişkisi, bazı morfolojik özellikleri veya mikrobu keşfeden bilim adamının adını belirtir ve tür ilişkisi, mikroorganizmanın koloni tipini veya habitatını belirtir. Örneğin, Escherichia koli mikrobun T. Escherich tarafından keşfedildiğini ve mikropun bağırsakta yaşadığını gösterir.Mikroorganizmaların bilimsel adlarının oluşumu ve kullanımı, Uluslararası Bakteri Adlandırma Yasası, Uluslararası Botanik Adlandırma Yasası (mantar), Uluslararası Zoolojik Adlandırma Yasası (protozoa) ve Uluslararası Bakteri Taksonomisi Komitesi kararları ile düzenlenir. Virüsler.

Bakteriler oldukça değişkendir. Belirli bir özellik bakımından farklılık gösteren bakterilerin tür içi farklılaşması için "varyant" ("var" olarak kısaltılır) kavramı kullanılır. Antijenik özelliklerde farklılık gösteren varyantları tahsis edin ( serovarlar ), bakteriyofajlara dirençli varyantlar ( ibneler ), biyokimyasal olarak farklılık gösteren varyantların yanı sıra ( kemovarlar ), biyolojik veya kültürel özellikler ( biyovarlar).

Mikrobiyolojide özel terimler kullanılır: saf kültür, karışık kültür, soy, klon.

kültür - bir laboratuvarda yoğun veya sıvı bir besin ortamında yetiştirilen bir dizi mikroorganizma. Aynı türe ait bireylerin oluşturduğu mikroorganizma kültürüne ne ad verilir?saf kültür. karma kültürMikroorganizma karışımı denir farklı şekiller incelenen materyali ekerken veya bir tür mikropla aşılanmış besin ortamına dış ortamdan diğer mikroorganizma türleri girdiğinde bir besin ortamında yetiştirilir.

Gerilme (Alman ercik - meydana gelir) - bu, belirli bir anda belirli bir nesneden alınan, incelenen materyalden izole edilmiş belirli bir mikroorganizma türünün saf kültürüdür.

Klon (Yunanca klon - katmanlama) - bu, belirli bir mikroorganizma türünün bir ana hücresinin (viral parçacık) yavrularıdır (kültürüdür).

Mikroorganizmaların sınıflandırılması ilkeleri

Bakterileri tanımlamak için gereken minimum veri listesi aşağıdaki özellikleri içerir.

1. Morfolojik ve tentürsel özellikler -büyüklük, şekil, hücreler, bir kapsülün varlığı, sporlar, flagella, boyalarla lekelenme yeteneği.

2. Solunum tipi - ihtiyaç gaz halinde oksijen.

3. Biyokimyasal özellikler -karbonhidratları fermente etme, proteinleri parçalama yeteneği.

4. Antijenik yapı - antijenlerin varlığı.

5. Bakteriyofajlara duyarlılık.

6. Kimyasal bileşim - karbonhidratların, lipidlerin, proteinlerin içeriği ve bileşimi.

7. Diğer bakterilerle genetik ilişki.

Mikrobiyolojide, mikroorganizmaların tanımlanması için belirleyiciler oluşturulmuştur: N.A. Krasilnikova (1949), “Mikropların Belirleyicisi”, R.A. Ziona (1948) ve D.Kh. Burgi. En yaygın olanı, Amerikan bakteriyolog D.Kh'nin sınıflandırmasıdır. Burgi.Bergey'in determinantı bilinen tüm bakterileri 4 bölüme ayırır:

Bölüm I. Gracilicutes (lat. gracilis - zarif, ince, kesik - cilt) - ince bir hücre duvarına sahip türler, gram-negatif olarak boyanır.

Bölüm II. Firmicutes (lat. Firmus - güçlü, cutis - cilt) - kalın hücre duvarlı bakteriler, gram pozitif boyanır.

Bölüm III. Tenericutes (lat. tener - nazik, cutis - cilt) - hücre duvarı olmayan bakteriler - mikoplazma.

Bölüm IV. Mendosicutes (Latin mendosus - yanlış, cutis - cilt) - arkebakteriler. Bu departman şunları içerir:metan oluşturucu, kükürt oksitleyici, mikoplazma benzeri, termoasidofilik ve kökenleri en eski olan diğer bakteriler.

Bakterilerin morfolojisi

Bakteriler çıplak gözle görülmez. Işık ve elektron mikroskopları kullanılarak incelenirler. Bakteriyel hücreler mikrometre cinsinden ölçülür (1 µm, 10'a eşittir.-3 mm) ve bakterilerin ince yapısının elementleri nanometre cinsinden ölçülür (1 nm, 10'a eşittir)-3 um). Ortalama bakteri boyutu 0,5-3 mikrondur.

Bakteriler hücre şekillerine göre 3 ana gruba ayrılır:

Küresel formlar veya koklar;

çubuk şeklindeki formlar;

Kıvrımlı formlar.

kok düzenli bir top, elips, fasulye şeklinde küresel bir şekle sahiptir. Bölündükten sonra hücrelerin göreli konumuna bağlı olarak, aşağıdaki türler kok:

mikrokok farklı düzlemlere bölünmüş ve tek, çift veya rastgele düzenlenmiş;

stafilokoklar farklı düzlemlere bölünmüş ve kümeler halinde düzenlenmiş;

diplokok çiftler halinde düzenlenmiş bir düzlemde bölünmüş;

streptokoklar bir zincir şeklinde düzenlenmiş bir düzlemde bölünmüş;

tetrakoklar dörtte düzenlenmiş, karşılıklı olarak dik iki düzleme bölünmüş;

sarcinler birbirine dik üç düzlemde bölün ve 8-16 hücreden oluşan düzenli paketler oluşturun.

çubuk şeklindeki bakteriyuvarlak, sivri veya küt uçlu silindirik bir şekle sahiptir. Çubuk şeklindeki bakteriler 2 gruba ayrılır:

bakteri - spor oluşturmayan çubuklar;

basil - spor oluşturan çubuklar. Spor çapının vejetatif hücrenin genişliğinden fazla olduğu çubuklara denir. klostridya.

Boyuta göre çubuk şeklindeki bakteriler gruplara ayrılır:

Küçük - 1,5 mikrona kadar;

Orta boy (1,5 - 3 mikron);

Büyük (3 mikrondan fazla).

Uçların şekline göre ayırt ederler:

Yuvarlak (E. coli);

Kıyılmış (şarbon etkeni);

Sivri uçlu (kaulobakter);

Kalınlaşmış (difteri etken maddesi);

Bölünmüş (bifidobakteriler).

Hücrelerin göreceli konumuna göre:

Rastgele yerleştirilmiş (salmonella);

Çiftler halinde düzenlenmiştir (diplobakteriler);

Zincirler (streptobakteriler);

Çalı odunu şeklinde (mikobakteri tüberküloz);

Sigara paketleri şeklinde (cüzzamın etken maddesi);

Bir açıda (difteri etkeni).

kıvrımlı bakteri birleştirmek:

titreşimler - virgül şeklinde bir spiralin kıvrımının 1/2-1/4'ünü oluşturan silindirik kavisli bir şekle sahip olmak;

spiral 4-6 dönüşlü spiral olarak bükülmüş çubuklar şeklindedir;

Spiroketler 2 tip bobinin bulunduğu spiral olarak kıvrılmış formlar: protoplazmik silindirin kıvrımlarından oluşan birincil bobinler ve tüm vücudun eğrilerini temsil eden ikincil bobinler.

Mikrop türünü belirleme yöntemleri

Mikroorganizma tipinin belirlenmesi, aşağıdaki araştırma yöntemleri kullanılarak gerçekleştirilir:

- bakteriyoskopik yöntem- canlı veya lekeli bir durumda mikroskobik mikroorganizmaların incelenmesi;

- bakteriyolojik yöntem- katı ve sıvı besin ortamlarında mikrobiyal büyümenin doğasının incelenmesi, mikropların enzimatik aktivitesinin belirlenmesi, mikropların tanımlanması (tür tanımlaması);

- serolojik yöntem- mikropların antijenik yapısının incelenmesi;

- biyolojik yöntem (deneysel)- laboratuvar hayvanları kullanılarak bakterilerin patojenik özelliklerinin incelenmesi;

- moleküler biyolojik yöntem- mikropların genetik özelliklerinin incelenmesi.

Bu yöntemleri kullanarak, mikropların aşağıdaki özellikleri incelenir:

- morfolojiközellikler - bakterilerin şekli ve boyutu;

tentür özellikler - bakterilerin boyalara oranı;

Kültürel özellikler - besin ortamında büyümenin doğası;

Biyokimyasal aktivite - karbonhidratların, proteinlerin ve diğer bileşiklerin fermantasyonu;

antijenik bakteri yapısı;

patojenite;

genetik mikropların özellikleri.

Bakteriyoskopik araştırma yöntemi

Mikroorganizma hücreleri hem canlı halde (ezilmiş damla yöntemi ve asılı damla yöntemi) hem de sabit ve lekeli bir durumda incelenebilir.

ezilmiş damla yöntemi. Yağı alınmış bir cam slaytın yüzeyine bir damla test malzemesi veya bir bakteri süspansiyonu uygulanır ve bir lamel ile kaplanır. Damla lamel kenarlarının ötesine geçmemelidir. Numune, x40 objektifle mikroskoplanır. Ezilmiş damla yöntemi, bakteri hücrelerinin hareketliliğini incelemek ve ayrıca büyük mikroorganizmaları - küfleri, mayaları incelemek için uygundur.

asılı damla yöntemi. Preparat, ortasına bir damla bakteri süspansiyonunun uygulandığı bir kapak camı üzerinde hazırlanır. Daha sonra, kenarları vazelin ile önceden yağlanmış, delikli özel bir cam sürgü, damla deliğin ortasında olacak şekilde lamel üzerine bastırılır. Hazırlık bir lamel ile ters çevrilir. Düzgün hazırlanmış bir preparasyonda, damla, dibine veya kenarlarına dokunmadan kuyunun üzerine serbestçe asılmalıdır. Mikroskopi için önce büyütme altında damlanın kenarları bulunan kuru bir x8 lens kullanılır ve ardından x40 lens takılır ve preparasyon incelenir.

Sabit müstahzarların hazırlanması. İlacın hazırlanması için, yağı alınmış bir cam lam üzerine bir damla su veya bir izotonik sodyum klorür solüsyonu uygulanır, bunun içine test materyali bakteriyolojik bir öze ile verilir ve elde edilecek şekilde özenin dairesel bir hareketiyle dağıtılır. 1-1.5 cm çapında ince ve üniform bir smear sıvı madde incelenirse doğrudan ilmek ile cam lam üzerine uygulanır ve smear hazırlanır. Lekeler havada kurutulur.

Sabitleme için fiziksel ve kimyasal yöntemler kullanır. Bir lekeyi düzeltmek için fiziksel yöntem cam sürgü brülörün alevinden 3 kez yavaş yavaş geçirilir. Organ ve dokuların kan yaymaları, yaymaları-izleri, metil veya etil alkol, Nikiforov karışımı ve diğer sabitleyici sıvılara 5-20 dakika batırılarak kimyasal bir yöntemle sabitlenir.

boyama için mikroplar basit ve karmaşık yöntemler kullanır. saat basit yöntem sabit bir leke herhangi bir boya ile boyanır, örneğin, sulu çözelti fuksin (1-2 dakika) veya metilen mavisi (3-5 dakika), suyla yıkandı, kurutuldu ve mikroskopta tutuldu. Gelişmiş boyama teknikleri, çoklu boyaların sıralı kullanımını içerir. Bu, belirli hücre yapılarını tanımlamanıza ve bazı mikroorganizma türlerini diğerlerinden ayırt etmenize olanak tanır.

Daldırma sistemli mikroskopi tekniği

Mikroorganizmaların bakteriyoskopik incelemesi için en sık daldırma hedefleri kullanılır. Preparat ve objektif lens arasında hava bulunan kuru lenslerden farklı olarak, daldırma objektifleri kullanıldığında, objektif lens ile preparasyon arasına camın kırılma indeksine yakın bir kırılma indisine sahip bir sıvı yerleştirilir. Böyle bir sıvının rolü, çoğunlukla daldırma yağı ile gerçekleştirilir - sedir yağı. Homojen bir optik ortamdan (cam ve yağ) geçen ışık ışınları yön değiştirmez. Bu, görüntünün netliğini önemli ölçüde artırmanıza olanak tanır. Daldırma lensler, tasarımlarında (hareketli ön lens) ve kuru lenslerden farklıdır. görünüm: Çerçeveleri siyah dairesel bir kesime sahiptir ve MI (yağlı daldırma) işaretiyle kazınmıştır.

Daldırma objektif mikroskopisi, nesnenin iyi bir şekilde aydınlatılmasını gerektirir. Bunun için nesne aşamasının altında bulunan ek bir mercek sistemi kullanılır - bir kondansatör. Mikroskobu çalışmaya hazırlarken, kondenser özel bir vida kullanılarak sonuna kadar hareket ettirilir. Lekeli smear üzerine bir damla immersiyon yağı sürülür ve cam obje masasına yerleştirilir. Yandan görsel kontrol altında, lens damla ile temas edene kadar indirilir. Lens bir damla yağa daldırıldıktan sonra makrometrik vida döndürülerek nesnenin konturları belirlenir ve ardından mikrometrik vida kullanılarak nesnenin net bir görüntüsü oluşturulur.

Mikroskopi tamamlandıktan sonra daldırma objektifi kaldırılır, preparasyon çıkarılır ve objektifin ön merceği yumuşak bir bezle yağ kalıntılarından silinir. Ardından mercek düşük büyütmeye veya nötr konuma getirilir ve kondansatör indirilir.

Dersin konusuyla ilgili kontrol soruları:

1. Bir bakteriyolojik laboratuvar cihazı.

2. Bakteriyolojik bir laboratuvarda çalışma kuralları.

3. Mikroorganizmaların sınıflandırılması ilkeleri.

4. Bakteri hücrelerinin formları.

5. Mikrop türünü belirleme yöntemleri.

6. Daldırma sistemli mikroskopi tekniği.

Derse hazırlanmak için literatür:

Ana literatür:

1. Tıbbi mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji. Ed. AA Vorobyov. M., 2004.

Ek literatür:

1. L.B. Borisov. Tıbbi mikrobiyoloji, viroloji, immünoloji. M., 2002.

2. tamam Pozdeev. Tıbbi mikrobiyoloji. M., GEOTAR-MEDYA, 2005.

3. Tıbbi mikrobiyoloji. Dizin. Ed. VE. Pokrovsky ve O.K. Pozdeeva. M., GEOTAR-MED, 1998.

Genel bilgi

Bağımsız olarak bakteriyolojik laboratuvarlar yapısal birimler sıhhi ve epidemiyolojik istasyonlarda (SES), bulaşıcı hastalıklar hastanelerinde, hastanelerde organize genel tip, bazı uzmanlaşmış hastaneler (örneğin, tüberküloz, romatoloji, dermatovenereoloji) ve polikliniklerde.

SES'teki bakteriyolojik laboratuvarlar, genel bakteriyel kontaminasyonun yanı sıra koşullu patojenik ve patojenik mikroflora ile enfeksiyon, çevresel nesneler: hava, su, toprak, gıda; organize ekiplerin anketlerini yapmak ve bireyler bağırsak grubunun patojenik bakterilerinin taşınmasında, corynebacterium difteri, boğmaca, parapertussis, meningokok. Mikrobiyoloji laboratuvarının SES'in diğer bölümleriyle birlikte çalışmasının belirli bir görevi vardır - çevreyi iyileştirmek ve nüfus insidansını azaltmak.

Tıbbi kurumlardaki bakteriyolojik laboratuvarlar, tanıyı koymak ve netleştirmek için gerekli testleri yapar. bulaşıcı hastalık, katkı doğru seçimözel tedavi ve hastanın bulaşıcı hastalıklar hastanesinden taburcu olma zamanının belirlenmesi. Bakteriyolojik laboratuvarlarda araştırma konuları şunlardır:

• insan vücudundan atılımlar: idrar, dışkı, balgam, irin, ayrıca kan, beyin omurilik sıvısı ve kadavra materyali;
• çevresel nesneler: su, hava, toprak, yiyecek, envanterdeki eşyalar, eller vb.

Bakteriyolojik laboratuvar odası ve işyeri ekipmanları

Mikrobiyolojik çalışmanın özgünlüğü, laboratuvar için ayrılan odanın hastane koğuşlarından, oturma odalarından ve yiyecek bloklarından izole edilmesini gerektirir. Bakteriyolojik laboratuvar şunları içerir: bakteriyolojik araştırma için laboratuvar odaları ve hizmet odaları; atık malzeme ve kontamine mutfak eşyalarının dezenfeksiyonu için otoklav veya sterilizasyon; bulaşık yıkamak için donatılmış yıkama; besin ortamının hazırlanması, şişelenmesi, sterilizasyonu ve depolanması için sredovovarochnaya; deney hayvanlarını tutmak için vivaryum; yedek reaktiflerin, mutfak eşyalarının, ekipmanların ve ev ekipmanlarının depolanması için malzeme.

Bağımsız yapısal birimler olarak listelenen hizmet odaları, büyük bakteriyolojik laboratuvarların bir parçasıdır. Küçük laboratuvarlarda yemek pişirme ve sterilizasyon odaları tek bir odada birleştirilir; deney hayvanlarını tutmak için özel bir yer yoktur.

Tüm bakteriyolojik araştırmaların yapıldığı laboratuvar odalarının altında en aydınlık, ferah odalar tahsis edilmiştir. Yerden 170 cm yükseklikteki bu odalarda duvarlar yağlı boya ile açık renklerde boyanmıştır. Zemin astar veya muşamba ile kaplıdır. Bu tür bir cila, odayı temizlerken dezenfektan solüsyonları kullanmanızı sağlar.

Her odada sıhhi tesisatlı bir lavabo ve bir şişe dezenfektan solüsyonu için bir raf olmalıdır.

Odalardan birinde, aseptik koşullarda çalışmak için ön kutulu cam bir kutu bulunur. Boksta, mahsuller için bir masa koyarlar, bir tabure, işyerinin üzerine bakterisit lambalar monte edilir. Ön kutuya steril malzeme depolamak için bir dolap yerleştirilmiştir. Laboratuvar odası, çalışma için gerekli ekipman, mutfak eşyaları, boyalar ve reaktifleri depolamak için laboratuvar tipi masalar, dolaplar ve raflar ile donatılmıştır.

Çok büyük önem iş için bir doktor - bakteriyolog ve laboratuvar asistanının işyerinin doğru organizasyonuna sahiptir. Laboratuvar masaları pencerelerin yanına yerleştirilmiştir. Bunları yerleştirirken, ışığın işçinin önüne veya yanına, tercihen sol tarafa, ancak hiçbir durumda arkadan düşmemesini sağlamaya çalışmanız gerekir. Çalışma için eşit dağınık ışık gerektiğinden, analiz odaları, özellikle mikroskopi için kuzey veya kuzeybatıya yönelik pencerelere sahip olması arzu edilir. Çalışma masalarının yüzeyinin aydınlatması 500 lux olmalıdır. Dezenfeksiyon kolaylığı için laboratuvar masalarının yüzeyi plastik, üzerindeki her işyeri aynalı cam ile kaplanmıştır.

Her laboratuvar çalışanına 150 × 60 cm alana sahip ayrı bir işyeri tahsis edilmiştir.Tüm işyerleri günlük işler için gerekli eşyalarla donatılmıştır.

Laboratuvarda çalışma ve davranış kuralları

Bakteriyolojik çalışmanın bir özelliği, laboratuvar personelinin bulaşıcı materyal, patojenik mikrop kültürleri, enfekte hayvanlar, hastanın kanı ve salgılarıyla sürekli temasıdır. Bu nedenle, bakteriyoloji laboratuvarının tüm çalışanlarının, işte sterilliği sağlayan ve laboratuvar içi enfeksiyon olasılığını önleyen aşağıdaki çalışma kurallarına uymaları gerekmektedir:

1. Bir sabahlık ve beyaz bir bere veya atkı gibi özel kıyafetler olmadan bakteriyoloji laboratuvarına girmek mümkün değildir.
2. Laboratuvara yabancı cisimler sokmayınız.
3. Laboratuvardan palto ile çıkmak veya palto üzerine palto giydirmek yasaktır.
4. Bakteriyoloji laboratuvarı bünyesinde sigara içmek, yemek yemek ve yiyecek depolamak kesinlikle yasaktır.
5. Laboratuvara giren tüm materyaller enfekte olarak kabul edilmelidir.
6. Gönderilen bulaşıcı materyali ambalajından çıkarırken dikkatli olunmalıdır: araştırma için materyali içeren kavanozların dışı dezenfektan solüsyonla silinir ve doğrudan masaya değil, tepsilere veya küvetlere yerleştirilir.
7. Patojenik mikrop içeren sıvıların transfüzyonu, dezenfektan solüsyonu ile dolu bir kap üzerinde gerçekleştirilir.
8. Enfeksiyöz materyal içeren cam eşyalar veya sıvı enfeksiyöz materyalin dökülmesi ile ilgili kaza vakaları, derhal laboratuvar başkanına veya vekiline bildirilmelidir. Elbisenin patojenik materyali ile kontamine olan vücut bölümlerinin, işyeri eşyalarının ve yüzeylerinin dezenfeksiyonu için önlemler derhal gerçekleştirilir.
9. Enfeksiyöz materyali incelerken ve patojenik mikrop kültürleriyle çalışırken, bakteriyolojik uygulamada genel olarak kabul edilen ve ellerin bulaşıcı materyalle temas olasılığını dışlayan teknik yöntemleri kesinlikle gözlemlemek gerekir.
10. Enfekte materyal ve gereksiz kültürler mümkünse aynı gün içinde imha edilmelidir. Enfeksiyöz malzeme ile yapılan çalışmalarda kullanılan aletler, kullanımdan hemen sonra ve ayrıca işyerinin yüzeyi dezenfekte edilir.
11. Bakteriyolojik çalışma yaparken, ellerin temizliğini kesinlikle izlemek gerekir: bulaşıcı malzeme ile çalışmanın sonunda dezenfekte edilirler. Günün sonunda iş yeri düzene sokulur ve iyice dezenfekte edilir ve daha fazla çalışma için gerekli bulaşıcı materyal ve mikrop kültürleri kilitlenebilir bir buzdolabında veya kasada saklanır.
12. Bakteriyolojik laboratuvar çalışanları, etken maddeleri incelenen nesnelerde bulunabilen bulaşıcı hastalıklara karşı zorunlu aşılamaya tabidir.

Laboratuvar odası temizliği

Mikrobiyoloji laboratuvarı temiz tutulmalıdır. Laboratuvar tesisleri düzenli olarak temizlenmelidir. Laboratuvarın tam sterilitesini sağlamak çok zordur ve her zaman gerekli değildir, ancak laboratuvar odalarında havadaki ve çeşitli yüzeylerdeki mikroorganizmaların sayısını önemli ölçüde azaltmak mümkündür. Bu, dezenfeksiyon yöntemlerinin pratik uygulamasıyla, yani çevresel nesnelerde bulaşıcı hastalıkların patojenlerinin yok edilmesiyle elde edilir.

Zemin, duvarlar ve mobilyalar mikrobiyoloji laboratuvarında vakumlanır ve çeşitli dezenfektan solüsyonlarla silinir. Vakumlama, nesnelerin tozdan arındırılmasını ve önemli miktarda mikroorganizmanın onlardan uzaklaştırılmasını sağlar. Bir nesnenin yüzeyi üzerinde bir elektrikli süpürge fırçasının 4 kat süpürülmesiyle, mikroorganizmaların yaklaşık% 47'sinin ondan ve 12 kat -% 97'ye kadar çıkarıldığı tespit edilmiştir. Çoğu zaman, dezenfektan çözeltileri olarak% 2-3'lük bir soda (sodyum bikarbonat) veya lisol (yeşil sabun ilaveli bir fenol preparatı),% 0,5-3'lük bir sulu kloramin çözeltisi ve diğer bazı dezenfektanlar kullanılır.

Hava laboratuvarda havalandırma ile dezenfekte etmek en kolay yoldur. Odanın pencereden uzun süre havalandırılması (en az 30-60 dakika) keskin düşüş havadaki mikroorganizmaların sayısı, özellikle dış ortam havası ile iç ortam havası arasında önemli bir sıcaklık farkı olduğunda. Daha etkili ve en yaygın olarak kullanılan hava dezenfeksiyonu yöntemi, 200 ila 400 nm dalga boyuna sahip UV ışınlarıyla ışınlamadır. Bu ışınlar son derece Antimikrobiyal etkinlik ve sadece vejetatif hücrelerin değil, aynı zamanda mikroorganizma sporlarının da ölümüne neden olabilir.

Edebiyat

Wikimedia Vakfı. 2010 .

Diğer sözlüklerde "Bakteriyoloji Laboratuvarı" nın ne olduğunu görün:

1) deneysel, kontrol veya analitik araştırma yapan eğitimsel, bilimsel, pratik, endüstriyel bir kurum veya böyle bir kurum, teşebbüsün bir alt bölümü; 2) belirtilen çalışmaların yapıldığı oda. İÇİNDE… … mikrobiyoloji sözlüğü

L., patojenleri tanımlamak, tanıyı netleştirmek ve ... Büyük Tıp Sözlüğü

Bu makale veya bölümün gözden geçirilmesi gerekiyor. Lütfen makaleyi makale yazma kurallarına uygun olarak geliştirin. Deneyler için araştırma laboratuvarı laboratuvarı ve bilimsel araştırma bilim adamları ve... Vikipedi Tıp Ansiklopedisi

Prof. Leffler (Loeffler), 1892'de, çeşitli deneyler için tasarlanmış beyaz fareler arasında Greifswald'da gözlemlediği epizootikleri tanımladı. Çalışmadaki bu epizootik etkenin etken maddesi, Leffler ve ... ... ansiklopedik sözlük F. Brockhaus ve I.A. efron

Sağlık kurumları veya yapısal birimler tedavi edici ve profilaktik veya sıhhi önleyici kurumlarçeşitli tıbbi araştırmalar için tasarlanmıştır. Bu grup bilimsel içermez ... ... Tıp Ansiklopedisi