Kompleman bağlanma reaksiyonu. Açıklama, uygulama. Mikrobiyolojik araştırma tekniği ile mikrobiyoloji - tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu

(RSK) - serol. için kullanılan reaksiyon niceleme tamamlayıcı sabitleme Ab ve Ag. CSC'nin prensibi, spesifik bir immün kompleksin sisteme eklenen C'yi tamamen veya kısmen adsorbe etmesidir.C, C bağlanmasının nicel bir göstergesi olarak alınır. hemolitik sistem, hemoliz a sürüsü, teşhis sisteminde bir bağışıklık kompleksinin olmadığını gösterir. (negatif RSK), hemoliz gecikmesi - bağışıklık kompleksinin varlığı için (pozitif RSK). RSC'de aşağıdakiler kullanılır: 1) 57 ° C'de 30 dakika ısıtılır. s-ku, askıda partiküller, sitotoksinler, C olmadan taze olmalıdır. Deneyde, şüphelenilen hastalıkta RSK'nın tanı titresine bağlı olarak genellikle 2 seyrelti s-ki'nin birkaç katını alırlar; 2) satılık veya RSK için özel olarak hazırlanmış bir teşhis; 3) Çalışma dozunda C, Ag ile titre edildiğinde C titresine eşittir ve Ag olmadan titre edildiğinde C titresinden %20-25 daha yüksektir; 4) koyun eritrositleri birkaç kez tuzlu su ile yıkanır ve %3'lük bir süspansiyon hazırlanır; 5) Hemolitik asit, etikette belirtilen titreden 3 kat daha az seyreltilir. 5 bileşenin tamamı aynı hacimde (0,5 ml veya 0,25 ml) alınır. Araştırma, deneysel (teşhis) sisteme dahil edilir. s-ku, teşhisum, S. Kontroller hazırlanır: s-ki - s-ku, C ve salin solüsyonu (Ag yerine); diagnostik - diagnostik, C ve salin solüsyonu (s-ki yerine); C-C ve salin hacmini ikiye katlayın; bariz pozitif - standart immün s-ka, Ag, C; açıkçası negatif - normal s-ka, Ar, C. Tüpleri çalkalayın ve 45 dakika boyunca 37 ° C'de bir termostata koyun. Aynı zamanda %3 koyun eritrosit süspansiyonu ve hemolitik s-ki'nin eşit hacimlerde karıştırılmasıyla hemolitik sistem hazırlanır ve aynı süre için bir termostatta inkübe edilir. Duyarlılaştırmadan sonra, tüm deney ve kontrol tüplerine hemolitik sistemin iki katı (1 ml veya 0,5 ml) eklenir. Tüm tüpler, kontrol tüplerinde tam hemoliz oluşana kadar (yaklaşık 30 - 40 dakika) 37°C'de bir termostatta tutulur. Reaksiyonu ayarlamak için kantitatif bir yöntemle bir seyreltme bulunur, Krom'da hemolizde en az 2+ (araştırmada titre. S-ki) bir gecikme vardır ve bunu tanınan hastalığın tanı titresi ile karşılaştırın. Bir s-ki dilüsyonu (genellikle 1:5) olan yarı nicel bir yöntem, hemolizdeki gecikme derecesini 4+, 3+, 2+ ile belirlemeyi ve buna dayanarak reaksiyonun yoğunluğunu değerlendirmeyi mümkün kılar. . Daha doğru sonuçlar, s-ki titresinin %100 değil, %50 hemoliz ile bulunmasıdır (bkz. tamamlayıcı tanımı). Bir s-ki seyreltmesi, ancak birkaç doz C (1; 1.5; 2; 2.5; 3; 4) alınan, RSK'nın nicel ayarının bir varyantı önerilmektedir. Diğer tüm bileşenler aynı miktarlarda kullanılır. Değerlendirirken, daha fazla doz C'nin çalışmayı bağladığı gerçeğini göz önünde bulundurun. s-ka, içinde daha fazla At.

(Kaynak: Mikrobiyoloji Terimleri Sözlüğü)

Diğer sözlüklerde "Tamamlayıcı sabitleme reaksiyonu" nun ne olduğunu görün:

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu- RSK laboratuvar yöntemi. [İngilizce-Rusça aşılama ve bağışıklama ile ilgili temel terimler sözlüğü. Dünya Örgütü sağlık hizmetleri, 2009] Konular aşılama, aşılama Eşanlamlılar RSK EN tamamlayıcı fiksasyon testiCFFTCF testi ... Teknik Çevirmenin El Kitabı

TAMAMLAYICI BAĞLAMA REAKSİYONU- tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu, RSK, Bordet-Gangu reaksiyonu [Belg. bakteriyologlar J. Bordet ve O. Zhangu (O. Gengou), 1901], kompleksin özelliğine dayanan oldukça spesifik ve çok hassas bir serolojik reaksiyon ... ... Veteriner ansiklopedik sözlük

I Kompleman fiksasyon testi, antijen-antikor kompleksleri tarafından komplemanın tüketiminin (bağlanmasının) bir değerlendirmesine dayalı olarak bir antijen veya antikoru belirlemek için kullanılan bir serolojik test, bkz. İmmünolojik araştırma yöntemleri. II…… Tıp Ansiklopedisi

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu- (RSK), birçok bulaşıcı ve paraziter hayvan hastalığını teşhis etmek için kullanılan oldukça hassas ve spesifik bir serolojik test. Ardışık iki aşamadan oluşur. İlk aşamada antijen test serumu ile karıştırılır ve ... ... Tarım. Büyük ansiklopedik sözlük

- (RSK; eşanlamlı: Borde Zhangu reaksiyonu, kompleman reddetme reaksiyonu eski, alexin fiksasyon reaksiyonu eski.) ortaya çıkan antijen-antikor kompleksinin tespit edilen komplemanı bağlama yeteneğine dayanan bir serolojik test yöntemi ... ... Büyük tıbbi sözlük

TAMAMLAYICI BAĞLAMA REAKSİYONU (CFR)- son derece hassas ve spesifik. serolojik Teşhis için kullanılan reaksiyon. bulaşıcı ve invaziv hastalıklar. Ardışık iki parçadan oluşur aşamalar. İlk aşamada, antijen test serumu ve tamamlayıcı (bir protein kompleksi ... ...) ile karıştırılır. Tarım Ansiklopedik Sözlük

- (eski) bkz. Kompleman fiksasyon reaksiyonu... Büyük Tıp Sözlüğü

tamamlayıcı reddetme reaksiyonu- kompleman fiksasyonunun rus reaksiyonu (g), Borde Zhang'ın reaksiyonu (g); reaksiyon (g) kompleman sapması; alexin fiksasyon reaksiyonu (g) ​​tr tamamlayıcı fiksasyon testi fra réaction (f) de fiksasyon du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… … İş güvenliği ve sağlığı. İngilizce, Fransızca, Almanca, İspanyolca'ya çeviri

Bkz. Kompleman fiksasyon reaksiyonu. (

Kompleman fiksasyon testi, birçok hastalığı teşhis etmek için kullanılan geleneksel serolojik testlerden biridir. viral hastalıklar ve ayrıca antiviral antikorların tespiti için diğer bazı yöntemlerin temelini oluşturur. Nötralizasyon reaksiyonu, hemaglütinasyonun inhibisyonu, indirekt hemaglutinasyon, enzim immunoassay duyarlılıkta kompleman fiksasyon reaksiyonundan üstün olmasına rağmen, tekniğin basitliği, antikorların erken tespiti ve hemaglütinasyona sahip olmayan viral antijenlerin tespiti özellikler bunu açıklar. geniş uygulama virolojik araştırmalarda.

Böyle gerektirmez yüksek derece bir dizi başka immünolojik reaksiyon için gerekli olan antijenik preparatların konsantrasyonu ve saflığı. Ek olarak, birçok virüsün kompleman sabitleyici antijenlerinin grup özgüllüğü, kompleman sabitleme reaksiyonunun toplu teşhiste kullanılmasını mümkün kılar: bu reaksiyon, suş farklılıklarını ortaya çıkarmaz ve virüsler arasındaki antijenik ilişkilerin çalışmasında özel bir değere sahiptir.

Adın kendisi, iki ayrı reaksiyondan oluşan yöntemin özünü büyük ölçüde yansıtıyor. İlk aşamada, antijenler ve antikorlar reaksiyona (bu bileşenlerden biri önceden bilinir) ve ayrıca titre edilmiş miktarda bir tamamlayıcıya katılır. Antijen ve antikorlar eşleşirse, kompleksleri, ikinci aşamada bir gösterge sistemi (koyun eritrositleri ve bunlara antiserum karışımı) kullanılarak tespit edilen komplemanı bağlar. Antijen ve antikorların etkileşimi sırasında kompleman bağlanırsa, koyun eritrositlerinin parçalanması meydana gelmez (pozitif kompleman fiksasyon reaksiyonu). Negatif bir kompleman fiksasyon reaksiyonunda, bağlanmamış kompleman reaksiyonun sonuçlarını değerlendirmek için kullanılan hemolize katkıda bulunur.

Kompleman fiksasyon reaksiyonunun ana bileşenleri antijenler (bilinen veya saptanabilir), antikorlar (bilinen antiserumlar veya test serumları), kompleman, hemolitik serum ve ram eritrositler; seyreltici olarak izotonik salin kullanılır sodyum klorit(pH 7.2-7.4) veya çeşitli tampon çözeltileri. Antijenler ve serum anti-tamamlayıcılığa sahip olabilir, yani. hemolizi geciktiren ve reaksiyonun sonucunu bozan komplemanı adsorbe etme yeteneği.

CSC'ler için antijenler, enfekte olmuş hayvanların organlarından, enfekte tavuk embriyolarının allantoik veya amniyotik sıvısından ve ayrıca doku hücre kültürlerinde virüslerin kültürlenmesinden sonra kültür sıvısından hazırlanır. Antijenik müstahzarlar her zaman hayvan hücrelerinden veya doku kültürlerinden elde edilen ve reaksiyonun sonuçlarını da bozabilen çok sayıda balast maddesi içerir.

Ortaya çıkan viral antijenler inaktive edilir, çalışma dozu ve ayrıca anti-tamamlayıcı ve hemolitik özellikler belirlenir. Antijen daha sonra kompleman varlığında titre edilir.

Reaksiyonun formülasyonundaki ikinci ana bileşen tamamlayıcıdır. Bu terim, hayvanların ve insanların kanında bulunan karmaşık bir protein ve faktör sistemini ifade eder. Tipik olarak, kompleman fiksasyon reaksiyonunda kobay serumu kullanılır. Komplemanın aktivitesi (titresi), hemolisinin kullanılan hemolitik sistemin tam hemolizine neden olduğu en küçük miktarıdır.

Virüslere karşı kompleman bağlayıcı antikorları tespit etmek için, komplementi 30 dakika boyunca 560C'de elimine etmek için serumun zorunlu inaktivasyonu gerçekleştirilir. Bağışıklı hayvanlardan alınan serumlar genellikle referans serum olarak kullanılır. Ayrıca, bağışıklama için, aksi takdirde belirgin bir spesifik olmayan reaksiyon meydana geldiğinden, doku safsızlıklarından dikkatlice saflaştırılan viral antijenler kullanılır.

Kompleman fiksasyon reaksiyonunun zorunlu bir bileşeni, tavşanların koç eritrositleri ile hiperimmünizasyonu ile elde edilen koç eritrositlerini ve hemolitik serumu içeren hemolitik sistemdir.

Kompleman fiksasyon reaksiyonunu kurmak için aşağıdaki modifikasyonlar kullanılır: Takachi sisteminin mikrotiterindeki kompleman fiksasyon reaksiyonunun mikro yöntemi, uzun vadeli kompleman fiksasyon reaksiyonu, dolaylı kompleman fiksasyon reaksiyonu, jeldeki kompleman fiksasyon reaksiyonu , mikrodamlacık yöntemiyle tamamlayıcı sabitleme reaksiyonu, katı bir temelde tamamlayıcı sabitleme reaksiyonu.

Kompleman fiksasyon reaksiyonunun duyarlılığı düşük olmasına rağmen özgüllüğü yüksektir. Bu bakımdan genç sığırlarda viral pnömoenterit tanısında yaygın olarak kullanılmaktadır.

Kompleman fiksasyon testi (CFR), çökelme, aglütinasyon ve nötralizasyon yöntemlerine duyarlılık açısından karşılaştırılabilir bir serolojik testtir. RSK, iki antijen-antikor sisteminin kullanıldığı bir yöntemdir:

ilki spesifiktir;

ikincisi göstergedir (hemolitik).

RSC için 5 bileşen gereklidir: tanı antijeni, tanı antikorları, gösterge antijeni (koyun eritrositleri), gösterge antikorları (tavşan hemolizinleri), tamamlayıcı.

Antijen ve antikorun spesifik etkileşimine kompleman fiksasyonu eşlik eder. Ortaya çıkan kompleks görsel olarak tezahür etmez. Hemolitik sistem bir gösterge olarak kullanılır. Hemolitik serum, eritrositlerin parçalanmasının (hemoloz) meydana geldiği durumlarda, eritrositleri tamamlayıcının etkisine duyarlı hale getirir. Hemoliz yoksa, tamamlayıcı ilk sistem tarafından bağlanır ve bu nedenle, içindeki antijen antikora karşılık gelir - olumlu bir cevap. Antikor antijenle eşleşmezse, kompleks oluşmaz ve serbest kalan tamamlayıcı ikinci sistemle birleşerek hemolize neden olur - reaksiyon negatiftir.

RSC'yi kurmak için, ana deneyden önce tüm reaksiyon bileşenleri hazırlanır ve titre edilir.

Reaksiyonun arifesinde serum (hasta veya teşhis), kendi tamamlayıcısını etkisiz hale getirmek için 56ºС sıcaklıkta bir su banyosunda 30 dakika ısıtılır. Özellikle aşılanmış hayvanlardan alınan bazı serumlar, anti-tamamlayıcı özelliklere sahiptir, i. homolog bir antijenin yokluğunda tamamlayıcıyı bağlama yeteneği. Anticomplementarity, karbon dioksit ile muamele edilerek, 57-58ºº sıcaklıkta ısıtılarak, -20ºº veya -70ºº sıcaklıkta tekli dondurularak ve santrifüjleme ile tortunun uzaklaştırılması, 1:10 serum hacminde tamamlayıcı serum eklenmesi ve ısıtılmasıyla ortadan kaldırılır. 18-20 saat soğukta inkübasyondan sonra Serumların antikomplementerliğini önlemek için liyofilize formda veya düşük sıcaklıklarda dondurularak saklanır.

Çeşitli öldürülmüş mikroorganizmaların kültürleri, bunların lizatları, bakteri bileşenleri, patolojik olarak değiştirilmiş ve normal organlar, doku lipidleri, virüsler ve virüs içeren materyaller, CSC'ler için antijen görevi görebilir. Birçok mikrobiyal antijen endüstriyel olarak üretilir. Antijenlerin tamamlayıcılığı, termoliz (çoklu dondurma ve çözme), yağ çözücüleri (eter, kloroform, aseton), alkoller (metanol, etanol) vb. gibi yöntemler kullanılarak ortadan kaldırılır.

Tamamlayıcı olarak deneyden hemen önce alınan kobay serumu; kuru tamamlayıcı da kullanılabilir. Sonraki titrasyon için bazik bir çözelti elde etmek için, tamamlayıcı izotonik sodyum klorür çözeltisi ile 1:10 oranında seyreltilir.

Koyun eritrositleri izotonik sodyum klorür çözeltisi içinde 3 süspansiyon halinde kullanılır. Kan (100-150 ml) alınır. şahdamarı, cam boncuklu steril bir kavanoza yerleştirilir, 10-15 dakika çalkalanarak defibrine edilir ve fibrini çıkarmak için 3-4 kat steril gazlı bezden süzülür. Eritrositler, 3 kez izotonik sodyum klorür çözeltisi ile yıkanır ve ilk kan hacmine eritrosit tortusuna eklenir. Eritrositler 4-6ºС'de 5-6 gün saklanabilir. Eritrositlerin raf ömrü formalin ile muhafaza edildiklerinde artar.

CSC için hemolitik serum aşağıdaki gibi elde edilir Tavşanlar, %50 yıkanmış koyun eritrosit süspansiyonu (1 ml 4-6 kez gün aşırı) ile kulak damarına enjekte edilerek bağışıklanır. Örnek serum, son enjeksiyondan 7 gün sonra alınır. Serum titresi 1:1200'den düşük değilse kan alma işlemi yapılır. Serum 56ºС sıcaklıkta 30 dakika ısıtılır. Bakteri üremesini önlemek için hemolitik seruma bir koruyucu eklenir (mertiolat 1:10000 veya 1 borik asit).

Hemolitik sistem, eşit hacimlerde (üçlü titrede alınmış) karıştırılmış hemolitik serum ve 3 ram eritrosit süspansiyonundan oluşur. Eritrositleri hemolizinlerle duyarlı hale getirmek için karışım, 30 dakika boyunca 37ºС sıcaklıkta bir termostatta tutulur.

Hemolitik serum titrasyonu. Serum, 0,5 ml (1:600, 1:1200, 1:1600, 1:3200 vb. dilüsyonlarda) ile 1:10 dilüsyonda 0,5 ml 3 eritrosit süspansiyonu ve 0,5 ml taze kompleman karıştırılarak titre edilir. . Kontrol test tüplerindeki reaksiyon için karışımın hacmi, izotonik sodyum klorür solüsyonu eklenerek 1.5 ml'ye ayarlandı. Reaksiyonun sonuçları, 37ºС sıcaklıkta 1 saatlik inkübasyondan sonra dikkate alınır. Hemolitik serum titresi, tam hemolize neden olan en yüksek seyreltisidir. Serum liyofilize formda saklanır.

Hemolitik serum için titrasyon şeması

Tamamlayıcı titrasyon. Deneyden önce, bazik tamamlayıcı çözelti (1:10) 0,05 ila 0,5 ml arasında bir dizi test tüpüne döküldü ve her izotonik sodyum klorür çözeltisine ilave edilerek sıvı hacmi 1,5 ml'ye getirildi. Tüpler 45 dakika 37ºº sıcaklıktaki bir termostata yerleştirilir, ardından bunlara hemolitik sistem eklenir ve 30 dakika termostatta tutulur, ardından kompleman titresi belirlenir.

Deney için, titreden% 20-30 daha yüksek olan bir çalışma dozu (0.5 ml'lik bir hacimde bulunur) alınır.

Tamamlayıcı titrasyon şeması

45 dakika boyunca 37ºС'de termostat

30 dakika boyunca 37ºС'de termostat

Antijenin titrasyonu. CSC için kullanılan antijenler, bir miktar komplemanı adsorbe edebilir, yani. anti-tamamlayıcı özelliklere sahiptir. Bu nedenle, deneyden önce antijenler, çalışan bir tamamlayıcı dozu varlığında titre edilir. Daha az ölçüde, tamamlayıcı olmayan özellikler, üretim tarafından üretilen spesifik antijenlerde ifade edilir. Titreleri, her deneyden önce değil, depolama sırasında azalma olasılığı dikkate alınarak ayda bir kez belirlenir.

Antijenin titresini belirlemek için, 0,5'ten 0,05 ml'ye azalan bir miktarda birkaç test tüpüne dökülür ve sodyum klorür çözeltisi eklenerek içlerindeki hacim 1 ml'ye getirilir. Daha sonra, her test tüpüne 0,5 ml tamamlayıcı çalışma dozu eklenir ve 37ºº sıcaklıkta 1 saat boyunca bir termostata yerleştirilir. Daha sonra tüm test tüplerine 1 ml hemolitik sistem eklenir, tekrar 1 saat termostatta inkübe edilir ve reaksiyon sonuçları dikkate alınır.

Antijen titresi, tam hemolizin meydana geldiği en küçük miktar olarak kabul edilir. CSC için, yaklaşık 1/2-1/3 titre olan bir çalışma dozu antijeni kullanılır. Kompleman titresinin %30'dan fazla azaldığı antijenler, reaksiyon için uygun değildir.

Antijen titrasyon şeması

1 saat boyunca 37ºС'de termostat

1 saat boyunca 37ºС'de termostat

RSC'nin ana deneyimini yürütmek. Reaksiyon bileşenlerinin toplam hacmi 2,5 ml'dir, her birinin çalışma dozunun hacmi 0,5 ml'dir. Birinci tüpe uygun dilüsyondaki serum, antijen ve kompleman, uygun dilüsyondaki serum, ikinci tüpe kompleman ve izotonik sodyum klorür solüsyonu (serum kontrolü), ikinci tüpe antijen, kompleman ve izotonik sodyum klorür solüsyonu (antijen kontrolü) verilir. üçüncü tüp. Aynı zamanda, 2 ml hemolitik serumun üçlü titrede (talimatlarda belirtilenle ilgili olarak) ve% 3 koyun eritrosit süspansiyonunun (başlangıç ​​kan hacmiyle ilgili olarak) karıştırılmasıyla bir hemolitik sistem hazırlanır. Tüpler 1 saat 37ºº sıcaklıktaki bir termostatta tutulur, ardından ilk 3 tüpe (birinci sistem) 1 ml hemolitik sistemden (ikinci sistem) eklenir. Malzemeler iyice karıştırıldıktan sonra, test tüpleri tekrar 37ºº sıcaklıkta 1 saat süreyle bir termostata yerleştirilir.

RSC'nin ana deneyini yürütme şeması

1 saat boyunca 37ºС'de termostat

1 saat boyunca 37ºС'de termostat

Reaksiyon sonuçları, ön - test tüpleri termostattan çıkarıldıktan sonra ve son olarak - buzdolabında veya oda sıcaklığında 15-18 saat bekletildikten sonra dikkate alınır.

Son sayımda, reaksiyonun yoğunluğu artılarla ifade edilir: (++++) - hemolizde tam bir gecikme ile karakterize edilen keskin bir pozitif reaksiyon (test tüpündeki sıvı renksizdir, tüm eritrositler dibe yerleşir) ); (+++, ++) - hemoliz nedeniyle sıvının renginde bir artış ve tortudaki eritrosit sayısında bir azalma ile kendini gösteren pozitif reaksiyon; (+) - zayıf pozitif reaksiyon (sıvı yoğun renklidir, tüpün altında az miktarda eritrosit vardır). saat ters tepki(–) tam hemoliz görülür, test tüpündeki sıvı yoğun pembe renge sahiptir (laklı kan).

Artan hassasiyet ve kullanılan daha az miktarda bileşen ile karakterize edilen bir dizi RSC modifikasyonu önerilmiştir. Bu nedenle, örneğin, virolojik çalışmalarda, soğukta CSC için bileşenlerin hacmi 1 ml'dir. Damla RSC için 1 damla serum + 1 damla antijen + 1 damla kompleman + 2 damla hemolitik sistem alın.

Tamamlayıcı bağlanma reaksiyonu, mikrobiyolojik ve serolojik teşhiste en geniş dağılımı bulmuştur.

RSK'nın yardımıyla, sifiliz, glander, kronik gonore, riketsiyoz, viral hastalıklar vb. Hastaların kan serumunda tamamlayıcı sabitleyici antikorlar tespit edilir.

RSC, klinik immünoloji için özellikle ilgi çekicidir. Reaksiyon, çeşitli lenfosit alt popülasyonlarını izole etmek, trombositler, nakledilen lenfoblastlar, fibroblastlar, tümör hücreleri ve trombosite özgü antijenler üzerindeki HLA antijenlerini ve ayrıca karşılık gelen antikorları saptamak için kullanılır.

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu , RSK, Bordet-Gangu reaksiyonu [Belg. bakteriyologlar J. Bordet ve O. Zhangu (O. Gengou), 1901], antijen-antikor kompleksinin serbest komplemanı sabitleme özelliğine dayanan oldukça spesifik ve çok hassas bir serolojik reaksiyon (), birçok bakteriyel ve viral ve bazı protozoal ve helmintik hastalıkların yanı sıra antijen veya antikor miktarındaki bir değişikliğin eşlik ettiği süreçleri incelemek. CSC 2 aşamada ilerler: 1) antikorlar, antijen ve tamamlayıcının etkileşimi, bunun sonucunda serbest tamamlayıcı, oluşan antijen-antikor kompleksi (spesifik faz) ile bağlanır; 2) eritrositler tarafından duyarlı hale getirilen reaksiyonun göstergesi (spesifik olmayan faz). RSK'da 2 sistem kullanılır: bir antikor (test serumu), antijen ve tamamlayıcıdan oluşan spesifik bir bakteriyolojik sistem ile hemolizin (hemolitik serum) ve bir ram eritrosit süspansiyonu içeren spesifik olmayan bir "gösterge" sistemi. Bir antijen, bir antikora yalnızca kompleman varlığında bağlanır. Test serumu, alınan antijene homolog antikorlar içeriyorsa, reaksiyona giren karışımda bulunan tamamlayıcı, ortaya çıkan antijen-antikor kompleksi tarafından adsorbe edilir ve duyarlılaştırılmış eritrositleri, yani tamamlayıcı olmadan hemolizin (hemolitik antikor) parçalama yeteneğini kaybeder. eritrositleri yok etmeyin (pozitif reaksiyon). Test serumunun antijen ve antikorları arasında spesifik bir ilişkinin olmadığı durumlarda kompleks oluşmaz ve kompleman serbest halde kalır. Bu durumda hemolitik sistem eklenirken, bağlanmamış kompleman, duyarlı kırmızı kan hücrelerinin hemolizine neden olur (negatif reaksiyon). RSK'yı evrelemek için çeşitli seçenekler vardır: makro ve mikrovaryantlar şeklinde klasik evreleme yöntemi, soğukta uzun vadeli kompleman fiksasyon reaksiyonu (RDSK), duyarlı eritrositlerin %50 hemolizine göre kantitatif RSK yöntemi, vb. Veterinerlik tanı uygulamasında, klasik RSK yöntemi daha sık olarak, her bileşenin belirli bir çalışma titresinde 0,5 veya 0,25 ml olarak alındığı bir makro varyant şeklinde kullanılır. Kompleman, kanı incelenecek olan aynı hayvan türünün serumları üzerinde bakteriyolojik bir sistemde titre edilir. Test serumları genellikle 1:5 ve 1:10 antijenli ve 1:5 antijensiz dilüsyonlarda (kontrol) incelenir. Spesifik fazda tamamlayıcı bağlanma süresi 20 dak, spesifik olmayan fazda hemoliz reaksiyon süresi 20 dak. t 37-38ºC. Bir dizi hastalığın teşhisi için daha hassas bir yöntem kullanılır - RDSC. Bu durumda, reaksiyonun ilk aşaması şu anda gerçekleştirilir: t 16-18 saat boyunca 4-6ºC, bu da küçük miktarlarda antijen ve antikorlar tarafından komplemanın adsorpsiyonunun artmasına neden olur. Daha sonra hemolitik sistem eklenir ve reaksiyon, t 37-38ºC 20 dakika. RSK ve RDSK sonuçları, aşağıdaki eritrosit hemoliz yüzdelerine karşılık gelen, haçlar veya eksi ile gösterilen hemoliz gecikmesi derecesi ile dikkate alınır: ++++ %0 ila %10; +++ %10'dan %40'a; ++ %40 ila %70; + %70 ila %90; - %90'dan %100'e. Veterinerlik mevzuatı, her hastalık için ayrı ayrı RSK ve RDSK'nın formüle edilmesi, kaydedilmesi ve değerlendirilmesi için özel talimatlar sağlar.

Edebiyat:
Veteriner Hekimlikte Laboratuvar Araştırmaları, M., 1971;
İmmünoloji Kılavuzu, ed. O. E. Vyazova ve Sh. Kh. Khodzhaeva, Moskova, 1973.

Veteriner ansiklopedik sözlük. - M.: "Sovyet Ansiklopedisi". Baş editör V.P. Şişkov. 1981 .

Diğer sözlüklerde "" ne olduğunu görün:

Kompleman fiksasyon reaksiyonu- (RSK) serol. tamamlayıcı sabitleyici Ab ve Ag'yi ölçmek için kullanılan bir reaksiyon. RSK'nın prensibi, spesifik bir immün kompleksin sisteme eklenen C'yi tamamen veya kısmen adsorbe etmesidir. mikrobiyoloji sözlüğü

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu- RSK Laboratuvar yöntemi. [İngilizce-Rusça aşılama ve bağışıklama ile ilgili temel terimler sözlüğü. Dünya Sağlık Örgütü, 2009] Konular aşılama, aşılama Eş anlamlılar RSK EN tamamlayıcı fiksasyon testiCFFTCF testi ... Teknik Çevirmenin El Kitabı

Kompleman fiksasyon reaksiyonu- Kompleman fiksasyon testi, antijen-antikor kompleksleri tarafından kompleman tüketiminin (bağlanmasının) değerlendirilmesine dayalı olarak bir antijen veya antikoru belirlemek için kullanılan bir serolojik test, bkz. İmmünolojik araştırma yöntemleri. II…… Tıp Ansiklopedisi

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu- kompleman fiksasyonunun rus reaksiyonu (g), Borde Zhang'ın reaksiyonu (g); reaksiyon (g) kompleman sapması; alexin fiksasyon reaksiyonu (g) ​​tr tamamlayıcı fiksasyon testi fra réaction (f) de fiksasyon du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… …

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu- (RSK), birçok bulaşıcı ve paraziter hayvan hastalığını teşhis etmek için kullanılan oldukça hassas ve spesifik bir serolojik test. Ardışık iki aşamadan oluşur. İlk aşamada antijen test serumu ile karıştırılır ve ... ... Tarım. Büyük ansiklopedik sözlük

tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu- (RSK; eşanlamlı: Borde Zhangu reaksiyonu, kompleman reddetme reaksiyonu eski, alexin fiksasyon reaksiyonu eski.) ortaya çıkan antijen-antikor kompleksinin tespit edilen komplemanı bağlama yeteneğine dayanan bir serolojik test yöntemi ... ... Büyük Tıp Sözlüğü- kompleman fiksasyonunun rus reaksiyonu (g), Borde Zhang'ın reaksiyonu (g); reaksiyon (g) kompleman sapması; alexin fiksasyon reaksiyonu (g) ​​tr tamamlayıcı fiksasyon testi fra réaction (f) de fiksasyon du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… … İş güvenliği ve sağlığı. İngilizce, Fransızca, Almanca, İspanyolca'ya çeviri

Kompleman bağlama reaksiyonu- bkz. Kompleman fiksasyon reaksiyonu. (

Kompleman fiksasyon testi (CFR) ve uzun vadeli kompleman fiksasyon reaksiyonu (RDSC)

TAMAMLAYICI BAĞLANMA REAKSİYONU (RSK) VE UZUN VADEDE TAMAMLAYICI BAĞLANMA REAKSİYONU (RDSK)

TAMAMLAYICI BAĞLAMA REAKSİYONU, RSK, Bordet-Jangu reaksiyonu [bakteriyolog J. Bordet ve O. Gengou, 1901'den almıştır], oldukça spesifik ve çok hassas serolojik. serbest tamamlayıcıyı sabitlemek için antijen-antikor kompleksinin özelliğine dayanan bir reaksiyon.

Kompleman (tamamlayıcı sistem) (lat.complementum'dan - ekleme), hayvanların ve insanların kan serumundaki bir grup küresel protein, parçası olan bağışıklık sistemi organizma. Onu enfekte eden bakteri veya virüsler vücuda girdiğinde, bazı toksinler veya kendi dönüştürülmüş hücrelerinin görünümü, kompleman aktive olur, bunun sonucunda hedef hücreler parçalanır (yok edilir) ve toksinler ve virüsler nötralize edilir. Bu nedenle, tamamlayıcı sistem, vücudun bağışıklık savunmasının sınırı olarak makrofajlarla birlikte kabul edilir.

Bu reaksiyon, antijenlerin tanımlanmasında ve enfeksiyonların, özellikle spiroketlerin (Wassermann reaksiyonu), riketsiya ve virüslerin neden olduğu hastalıkların serolojik teşhisinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

RSK, karmaşık bir serolojik reaksiyondur. Kompleman ve iki antijen-antikor sistemini içerir. Esasen, bunlar iki serolojik reaksiyondur.

İlk sistem - ana sistem - bir antijen ve bir antikordan oluşur (biri biliniyor, diğeri bilinmiyor). Buna belirli bir miktarda tamamlayıcı eklenir. Bu sistemin antijeni ve antikoru eşleştiğinde, tamamlayıcıyı bağlayacak ve bağlayacaktır. Ortaya çıkan kompleks ince bir şekilde dağılmıştır ve görünmez.

kompleman fiksasyon reaksiyonu serodiagnozu

Bu kompleksin oluşumu, ikinci bir hemolitik veya gösterge sistemi yardımıyla bilinir. Koyun eritrositlerini (antijen) ve bunlara karşılık gelen hemolitik serumu (antikor), yani. hazır bağışıklık kompleksi. Bu sistemde eritrosit lizizi ancak kompleman varlığında gerçekleşebilir. Kompleman birinci sisteme bağlıysa (antijen ve antikor içinde karşılık geliyorsa), o zaman ikinci sistemde hemoliz olmayacaktır - çünkü serbest tamamlayıcı yoktur. Hemoliz olmaması (tüpün içeriği bulanık veya tüpün dibinde eritrosit tortusu var) olarak kaydedilir. olumlu sonuç RSK.

Birinci sistemde antijen antikorla eşleşmezse, bağışıklık kompleksi oluşmaz ve tamamlayıcı serbest kalır. Serbest kalan tamamlayıcı, ikinci sistemde yer alır ve hemolize neden olur - RSC'nin sonucu negatiftir (tüplerin içeriği şeffaftır - "kan vernik").

Tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonunun bileşenleri:

1. Antijen - genellikle bir lizat, özüt, hapten; daha az sıklıkla bir mikroorganizma süspansiyonu

2. Antikor - hasta serumu

3. Tamamlayıcı - kobay serumu

4. Antijen - koyun eritrositleri Hemolitik sistem

5. Antikor - koyun eritrositlerine karşı hemolizin

6. İzotonik çözüm

Malzemelerin hazırlanması

1. Serum titresinden 3 kat daha az seyreltilir. Hacmi, bir tüpteki serum hacminin (örneğin, 0,5 mi) deneydeki sayısından biraz daha fazla tüp sayısıyla çarpılmasıyla belirlenen tüm deney için toplam serum seyreltmesi hazırlayın. Reaksiyonun tüm bileşenlerinin hazırlanmasında fazla sıvı gereklidir: bunun bir kısmı test tüplerinin, şişelerin, pipetlerin duvarlarında kalır. Seyreltilmiş hemolizin hacimleri ve eritrosit süspansiyonu, eritrositlere serum eklenir, iyice karıştırılır ve 30 dakika 37°C'de inkübe edilir (hassaslaştırma).

2. Koyun eritrositler. Deneydeki tüm test tüpleri için %3'lük bir yıkanmış koyun eritrosit süspansiyonu hazırlanır. Hemolitik sistemi hazırlamak için, deneye dahil etmeden 30 dakika önce, eşit hacimlerde koç eritrositleri onlara bir antikor ile karıştırılır.

3. Kompleman genellikle 1:10 oranında seyreltilir.Her deneyden önce titre edilmelidir. Kompleman titresi en küçük miktarıdır, hemolitik sisteme eklendiğinde 37°C'de 1 saat içinde tam hemoliz gerçekleşir.

4. Antijen genellikle titresinin bir göstergesi ile hazır olarak alınır, yani. antijenin seyreltilmesinden sonra 1 ml'de bulunması gereken miktar. Örneğin, 0,4 titrede 0,96 ml izotonik çözelti içinde seyreltilir. Deneyimde, titrenin yarısına (0,5 mi) eşit antijen miktarını alın. Bu onun çalışma dozu. 0,5 ml'yi deneydeki tüp sayısıyla çarparak tüm deney için toplam antijen seyreltmesi hazırlayın.

5. Antikor - hastanın serumu. Taze serum, içinde bulunan komplemanı yok etmek için deneyden önce inaktive edilir. Bunun için su banyosunda veya termostatlı inaktivatörde 56°C'de 30 dakika ısıtılır. İkinci yöntem tercih edilir: aşırı ısınma olasılığını ortadan kaldırır

Kompleman fiksasyon reaksiyonunun (RSC) ifadesi.

Reaksiyon 1 cu hacme konur. cm (her bileşenden 0,2 cm küp).

Test serumları 1: 5 ve 1: 10'luk bir dilüsyonda (serum dozu, spesifik bir antijenle 0.04 cc ve 0.02 cc'dir, bir kontrol antijeni ile 1: 5'lik bir dilüsyonda (özgüllük için) ve bir antijen (anti-tamamlayıcılık için). ).

Test ve kontrol serumları reaksiyon gününde seyreltilmiş halde 56-65°C'de (hayvan tipine bağlı olarak) 30 dakika süreyle inaktive edilir. (ayrıca RDSC'de).

Reaksiyonun her iki aşaması 37-38°C'de bir su banyosunda gerçekleştirilir, bakteriyolitik sistem 60 dakika tutulur, reaksiyonun ikinci aşaması (hemolitik sistemle) 20 dakikadır.

Ana RSK deneyiminin kontrolleri:

antijen olmadan ve kontrol antijeni ile 1:5 oranında seyreltilmiş pozitif serum; 1: 5'ten titresine spesifik bir antijen ile seyreltmelerde;

negatif serum spesifik bir antijen ile 1: 5 ve 1: 10 dilüsyonlarında, kontrol antijeni ile ve antijen olmadan 1: 5'lik bir seyreltmede - spesifik ve kontrol antijenleri çift dozda - antikomplemanterlik (tamamlayıcı +) ve hemotoksisite (tamamlayıcı) için );

hemotoksisite için hemolitik sistem (tamamlayıcı).

Sonuçlar için muhasebe. Kontrollerde biri kompleman olmadığı için diğeri hemolizin içermediği için kontrollerde hemoliz izi bile olmamalıdır. Kontroller, bileşenlerde hemotoksisite reaksiyonlarının (eritrositleri kendiliğinden parçalama yeteneği) olmadığını gösterir.

Deneyde, diğer reaksiyon bileşenleri tarafından spesifik olmayan adsorpsiyonundan dolayı kompleman aktivitesi düşebilir, bu nedenle deney için kompleman miktarı arttırılır: titreyi takip eden doz alınır. Bu çalışma dozudur.

RSC'yi evrelemek için çeşitli seçenekler vardır: klasik. makro ve mikro değişkenler şeklinde ayar yöntemi, soğukta uzun süreli tamamlayıcı sabitlemenin (RDSC) reaksiyonu, miktar yöntemi. Hassaslaştırılmış eritrositlerin %50 hemolizi için RSK, vb. Bir dizi hastalığın teşhisi için daha hassas bir yöntem kullanılır - RDSK.

Uzun süreli kompleman fiksasyonu (RDSC) reaksiyonunun beyanı.

Reaksiyonun ilk aşaması 2-6°C'de buzdolabında 16-18 saat, ikinci aşaması su banyosunda 20 dakika 37-38°C'de gerçekleştirilir.

Kompleman, 1:25 veya 1:30'luk bir çalışma dilüsyonunda (çalışma seyreltmesi belirlenirken) kullanılır.

İlk gün, ana deney için sera ve antijen şişelenir. Reaksiyon 1 cu hacme konur. cm (her bileşenden 0,2 cm küp). RDSC'nin kontrolleri, RSC ayarındaki ile aynıdır.

Ardından, 0,2 cu'luk bir tamamlayıcı. cm, çalışma seyreltmesine bağlı olarak, test tüpleri çalkalanır ve 16-18 saat buzdolabına yerleştirilir. 2-6°C'de.

Ertesi gün ilk fazlı raflar buzdolabından çıkarılarak 20-30 dakika bekletilir. oda sıcaklığında, hemolitik sistem bir dozda tüm test tüplerine dökülür (verilen örnekte 0.6 kübik cm). Raflar çalkalanır ve 20 dakika boyunca bir su banyosuna yerleştirilir. 37-38°C'de.

Ana deney RDSC'nin şeması Tablo 3'te sunulmuştur.

RSC'nin sonuçlarını hesaba katarak, RDSC iki kez gerçekleştirilir: ilk kez - su banyosundan hemen sonra, ikincisi - eritrositler test tüpünün dibine yerleştikten sonra (su banyosundan 3-4 saat sonra) veya bir sonraki 2 ° ila 6 ° C arasında bir buzdolabında saklandığında gün

Reaksiyonun sonuçlarını objektif olarak belirlemek için hemoliz yüzdesinin değerlendirilmesi önerilir. Bunu yapmak için, reaksiyondan tam (% 100) hemolizli 5 tüp seçilir ve bunlardan gelen sıvı bir tüpe dökülür. Daha düşük bir hemoliz yüzdesine sahip seyreltmeler, "Standart" skala olarak adlandırılan ondan hazırlanır.

Test serumlu test tüplerindeki hemoliz derecesi, "standart" tüplerdeki hemoliz derecesi ile karşılaştırılarak belirlenir ve hemoliz yüzdesi çapraz olarak ifade edilir.

Gecikme derecesi, eritrosit hemoliz yüzdesi ile ters orantılıdır:

++++ (4 çapraz) - hemoliz yok, süpernatan sıvı şeffaf, renksiz;

+++ (3 çapraz) - eritrositlerin %25'inin hemolizi;

++ (2 haç) - eritrositlerin %50'sinin hemolizi;

+ (1 çapraz) - eritrositlerin %75'inin hemolizi;

(eksi) - eritrositlerin tam hemolizi, tortu yok, sıvı hemoglobin ile yoğun bir şekilde boyanıyor.

RSK, RDSK sonuçlarının değerlendirilmesi.

Test serumları, antijensiz ve kontrol antijenli kontrol serumunda eritrositlerin tam hemolizi ile 1: 5 ve 1: 10 (0.04 cc, 0.02 cc) dilüsyonlarında değerlendirilir.

Eritrositlerin hemolizi 1: 10'luk bir seyreltmede 3-4 çaprazlama geciktirildiğinde pozitif bir reaksiyon değerlendirilir.

Şüpheli - eritrositlerin hemolizinde 1: 10'luk bir serum seyreltmesinde 1 çaprazlama ve 1: 5'lik bir seyreltmede 2 ila 4 çaprazlama gecikmesi ile.

Negatif - 1: 5 ve 1: 10 serum seyreltmelerinde eritrositlerin tam hemolizi ile.