Interleukín 28 pri interpretácii výsledkov. Základný výskum. Výskyt v populácii

Gén interleukínu 28B, cytokínové receptory triedy II (IL28B). Detekcia mutácie g.39738787C>T (rs12979860, regulačná oblasť génu)

Názov génuIL28B

Umiestnenie génu na chromozóme19q13.2

Výskyt v populácii

Výskyt minor (T) alely v európskej populácii je 32 %.

Asociácia markera s chorobami

Marker je spojený s genetickou rezistenciou voči vírusové infekcie a účinnosť liečby chronickej hepatitídy C ribavirínom (Rebetol) a PEG-interferónom (PegIntron). Polymorfizmus IL28B určuje ako pravdepodobnosť spontánnej eliminácie vírusu, tak aj odpoveď na antivírusovú terapiu. Analýza je priradená:

• pred začatím liečby chronickej hepatitídy C - predpovedanie odpovede na liečbu;
• pri výbere taktiky na liečbu chronickej hepatitídy C.

Všeobecné informácie o štúdiu

Vírus hepatitídy C sa prenáša hlavne krvou. Postihuje asi 3 % svetovej populácie. Infekcia spôsobuje akútnu hepatitídu a je charakterizovaná nedostatočnou imunitnou odpoveďou. V 50-80% prípadov sa mení na chronická forma a vedie k cirhóze pečene a hepatocelulárnemu karcinómu.

V súčasnosti sa ako antivírusová terapia (AVT) hepatitídy C najčastejšie používa kombinácia dvoch liečiv, interferónu-alfa („PEG-interferón“) a ribavirínu, čo potvrdzujú medzinárodné štúdie aj klinická prax.

Hlavným cieľom antivírusovej liečby je prevencia cirhózy pečene a hepatokarcinómu. Priebeh liečby chronickej vírusovej hepatitídy C trvá 16-72 týždňov. Pri takom dlhodobom užívaní týchto liekov sa počet výrazných vedľajšie účinky takže v niektorých prípadoch sa musí liečba zastaviť. Účinnosť antivírusovej terapie závisí od mnohých faktorov: genotyp vírusu, počiatočná vírusová záťaž, dĺžka trvania infekcie, metabolizmus železa v organizme, aktivita transamináz, nadváha, steatóza pečene, inzulínová rezistencia, vek, pohlavie, závislosť od alkoholu a liekov, sprievodné ochorenia, prítomnosť ťažkej fibrózy.

Dosiahnutie trvalej virologickej odpovede a hodnotenia rizika Nežiaduce reakcie na recepcii antivírusové lieky pre pacienta veľmi dôležité. V poslednej dobe sa na posúdenie účinnosti počiatočnej alebo opakovanej AVT používa individuálny genetický faktor - stav génu. IL28B. Najväčšiu diagnostickú hodnotu má pri liečbe CHC spôsobenej 1. genotypom vírusu. Pri HCV spôsobenej 2. a 3. genotypom vírusu, génový polymorfizmus IL28B významné len u pacientov, ktorí nedosahujú rýchlu virologickú odpoveď (neprítomnosť RNA vírusu hepatitídy C v 4. týždni liečby).

Distribúcia genotypov IL28B sa líši v rôznych populáciách na celom svete a vysvetľuje rozdielnu účinnosť antivírusovej liečby PEG-interferónom a ribavirínom v etnických skupinách.

Keď sa u pacienta zistí genotyp CC, pozoruje sa nasledovné:

• dvojnásobné zvýšenie pravdepodobnosti vzniku SVR na HTP;
• vírusová záťaž (množstvo vírusu v krvi) pred liečbou je vyššia ako u nosičov alel TT a CT.

Genotyp CC sa deteguje prevažne u ľudí so spontánnym vymiznutím infekcie.

Pacienti s genotypmi C/T a T/T sa vyznačujú znížením pravdepodobnosti odpovede na AVT, t.j. nízkou účinnosťou liečby.

Horizontálne záložky

Popis

Teraz je dobre známe, že zmeny v zhluku génov pre cytokíny (IL28A, IL28B a IL29) lokalizované na chromozóme 19 (19q13) osoby sú hlavným faktorom, ktorý určuje vlastnosti antivírusovej obrany tela. Najväčší význam má polymorfizmus v oblasti susediacej s génom interleukínu 28B (IL28B). Ukázalo sa, že polymorfizmy IL28B určujú tak pravdepodobnosť spontánnej eliminácie HCV, ako aj odpoveď na liečbu interferónom a ribavirínom.
Hlavnú úlohu pri infekcii hepatitídy C zohrávajú dve jednonukleotidové substitúcie:
substitúcia cytozínu za tymín (C>T) označená ako rs12979860 v databáze dbSNP Národného centra pre biotechnologické informácie (NCBI).
nahradenie tymínu guanínom (T>G), ktorý má označenie rs8099917
Detekcia polymorfizmov v géne IL28B je jediným odporúčaným farmakogenetickým testom pre infikovaných vírusom hepatitídy C. Podľa Odporúčaní pre diagnostiku a liečbu dospelých pacientov s hepatitídou C Ministerstva zdravotníctva Ruska z roku 2013 „stanovenie tzv. genotyp pacienta podľa súhrnu alelických variantov jednonukleotidových polymorfizmov rs12979860 a rs8099917 v géne interleukínu 28 B (IL28B) u pacientov s HCV genotypom 1 je spoľahlivým prediktorom dosiahnutia trvalej virologickej odpovede počas duálnej a trojitej antivírusovej terapie.“
Ukázané, to najvyššia hodnota Polymorfizmus IL28B má, keď je infikovaný 1 podtypom HCV. Na základe toho sa pri príprave na liečbu odporúča nasledujúci vyšetrovací algoritmus.

Jednonukleotidové polymorfizmy (SNP) v lokusoch rs8099917 a rs12979860 génu IL28B sú spojené s frekvenciou spontánneho zotavenia pri akútnej hepatitíde C a pravdepodobnosťou dosiahnutia trvalej odpovede pri liečbe chronickej hepatitídy C interferónovými prípravkami. Priaznivý genotyp je CC (oproti CT a TT) v lokuse rs12979860 a TT (oproti TG a GG) v lokuse rs8099917.

Indikácie na vymenovanie:

• Predpovedanie výsledku ochorenia a odpoveď na liečbu,
• možnosť voľby medzi štandardným a pegylovaným interferónom v kombinácii s ribavirínom na liečbu chronickej hepatitídy C,
• voľba taktiky „čakanie na dostupnosť trojitej liečby so zaradením inhibítorov HCV proteázy“ alebo liečba štandardným režimom duálnej liečby interferónom v kombinácii s ribavirínom u pacientov s ďalšími faktormi (okrem fibrózy pečene), ktoré znižujú pravdepodobnosť liečby liekmi existujúceho štandardu antivírusovej terapie.

Úloha polymorfizmov génu pre interleukín 28B v prognóze liečby vírusovej hepatitídy C.

Výskum ukázal v posledných rokoch, osobitný vplyv na výsledok liečby, ako aj možnosť samovyliečenia pri infekcii vírusom hepatitídy C, majú genetické faktory, najmä polymorfizmy génu interleukínu 28B.

Interleukín 28B je predstaviteľom interferónov lambda alebo interferónov typu 3, ktoré majú silný antivírusový účinok a potláčajú replikáciu vírusu hepatitídy C. Boli študované polymorfizmy génu interleukínu 28B spojené s trvalou virologickou odpoveďou. Pri určitých genotypoch sa dosiahne udržateľná virologická odpoveď 2 krát častejšie.

Na posúdenie prognózy hepatitídy C sa najčastejšie používajú dva hlavné polymorfizmy: rs12979860 a rs8099917. V závislosti od nukleotidov v týchto lokusoch boli identifikované alely C (cytozín), T (tymín), G (guanín) a zodpovedajúce genotypy: pre alelu rs12979860 - CC, CT, TT, ako aj TT, TG, GG pre alely rs8099917.

Boli získané údaje, že genotyp interleukínu 28B je nezávislým a najvýznamnejším faktorom ovplyvňujúcim frekvenciu skorej a trvalej virologickej odpovede na AVT medzi inými prognostickými faktormi. Polymorfizmy rs12979860 sú zároveň zodpovedné za získanie odpovede a polymorfizmy rs8099917 sú úzko spojené s nedostatočnou odpoveďou na AVT.

Úspešnejšie výsledky AVT sa dosiahli u pacientov s genotypmi CC rs1297960 a TT rs8099917 – viac ako 70 %, v porovnaní s genotypmi RS1297960 CT a TT a genotypmi rs8099917 GT a GG – asi 30 %.

Stanovenie polymorfizmov interleukínu 28B umožňuje predpovedať pravdepodobnosť dosiahnutia SVR so senzitivitou viac ako 60 % a špecificitou okolo 80 %. Výhodné alely sú rs1297960 CC a rs8099917 TT. Všetky ostatné genotypy určujú negatívnu prognózu.

Priaznivé genotypy sú často spojené s väčšou zápalovou aktivitou a štádiom fibrózy. Okrem toho bola zaznamenaná asociácia polymorfizmu rs12979860 T s výskytom hepatocelulárneho karcinómu. Nosenie tejto alely sa v kombinácii s inými známymi rizikovými faktormi považuje za nezávislý rizikový faktor.

Určenie genotypu interleukínu 28B a zohľadnenie ďalších nepriaznivých faktorov v prognóze antivírusovej terapie nám umožňuje hľadať možnosti zlepšenia účinnosti liečby ihneď po predpísaní terapie. Ukázalo sa, že dvojnásobné zvýšenie dávky interferónu u pacientov s nepriaznivým genotypom interleukínu 28B zvýšilo účinnosť liečby a znížilo počet relapsov v oveľa menšom rozsahu ako zvýšenie dĺžky liečby na 72 týždňov. Okrem toho u pacientov s priaznivým genotypom a rýchlou virologickou odpoveďou sa môže doba liečby skrátiť na 24 týždňov.

Spojenie genotypov interleukínu 28B s dosiahnutím trvalej virologickej odpovede je teda významné. Štúdium polymorfizmu génu interleukínu 28B spolu s ďalšími prognostickými faktormi umožňuje jasnejšie určiť prognózu priebehu infekcie a účinnosť liečby. Ide o dôležitý krok smerom k individualizovanej antivírusovej terapii, ktorá vám umožňuje individuálne určiť trvanie liečby a dávky liekov a nielen ich zvyšovať, ale aj znižovať.

2

1 FBSI "Federálne vedecké centrum pre technológie preventívneho riadenia zdravotných rizík spoločnosti Rospotrebnadzor"

2 GBOU VPO „Trvalý štát lekárska akadémia ich. ak. E.A. Wagner“ z ministerstva zdravotníctva Ruska

3 Štátny zdravotný ústav "Regionálna klinická infekčná nemocnica"

Účel štúdie. Študovať vzťah medzi laboratórnymi markermi cytolýzy, cholestázy, fibrózy, regenerácie pečene a polymorfizmu génu interleukínu 28B (IL28B) v oblasti rs12979860 u pacientov s chronickou hepatitídou C (CHC). Materiál a metódy. Vyšetrených bolo 100 pacientov s CHC a 90 zdravých darcov. V krvnom sére boli pomocou polymerázovej reťazovej reakcie hodnotené pečeňové testy, koncentrácia kyseliny hyalurónovej, alfa-fetoproteínu enzýmovou imunoanalýzou, úroveň vírusovej záťaže a polymorfizmus génu IL28B (rs12979860). Výsledky. U pacientov s CHC boli odhalené syndrómy cytolýzy a cholestázy a medián koncentrácie kyseliny hyalurónovej a alfa-fetoproteínu bol viac ako 2-krát vyšší ako hladiny týchto ukazovateľov v kontrolnej skupine (p = 0,004 a p = 0,0001). Vo všeobecnosti neexistoval žiadny štatisticky významný rozdiel vo frekvenciách genotypov a alel IL28B (rs12979860) medzi skupinami zdravých jedincov a pacientov s CHC. Napriek tomu malo 71,4 % pacientov s hepatitídou nepriaznivú kombináciu genotypov CT a TT, a teda potenciálne riziko rozvoja negatívnej odpovede na antivírusovú liečbu s maximálnou manifestáciou u homozygotov TT. V korelačnej analýze minoritná alela T génu IL-28B vykazovala významné vzťahy s alanínom (r = 0,25, p = 0,02) a asparágovými (r = 0,22, p = 0,019) transaminázami, priamym bilirubínom (r = 0,019, 25 , p = 0,02), kyselina hyalurónová(r = 0,17, p = 0,03), alfa-fetoproteín (r = 0,25, p = 0,02), vírusová záťaž (r = 0,25, p = 0,021). Záver. Polymorfizmus génu IL-28B je spojený so závažnosťou poškodenia pečene u pacientov s CHC.

chronická hepatitída C

polymorfizmus génu interleukínu 28B

syndróm cytolýzy

cholestáza

kyselina hyalurónová

alfa-fetoproteínu

1. Abdurakhmanov D.T. Perspektívy liečby chronickej hepatitídy C // Klinická hepatológia. - 2010. - č. 3. - S. 3–9.

2. Simankova T.V., Garmash I.V., Arisheva O.S., Manukhina N.V. Polymorfizmus génu IL-28B ako prediktor odpovede na antivírusovú terapiu chronickej hepatitídy C. Klin. pharmacol. ter. - 2012. - č. 21 (1). – S. 17–22.

3. Shchekotova A.P. Vzájomný vzťah markerov endotelovej dysfunkcie a fibrózy pečene s vírusovou záťažou pri chronickej vírusovej hepatitíde C // Súčasné problémy veda a vzdelávanie (elektronický časopis). 2012. Číslo 1. URL: www.science-education.ru/101-5458.

4. Agúndez J.A., García-Martin E., Maestro M.L., Cuenca F., Martínez C. a kol. Vzťah polymorfizmu génu IL28B s biochemickými a histologickými znakmi pri ochorení pečene vyvolanom vírusom hepatitídy C. http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0037998.

5. Eurich D., Boas-Knoop S., Bahra M., Neuhaus R., Somasundaram R., Neuhaus P., Neumann U., Seehofer D. Úloha polymorfizmu IL28B vo vývoji hepatocelulárneho karcinómu vyvolaného vírusom hepatitídy C fibróza štepu a potransplantačná antivírusová terapia. Transplantácia/ 27. marec 2012;93(6):644–9.

6. Ge D., Fellay J., Thompson A. Genetická variácia v IL28B predpovedá klírens vírusu vyvolaný liečbou hepatitídou C // Nature. 2009 Vol. 461. s. 399-401.

7. McCarthy J., Li J., Thompson A. Replikovaná asociácia medzi variantom génu IL28B a trvalou odpoveďou na pegylovaný interferón a ribavirín // Gastroenterológia. 2010 Vol. 138. s. 2307–2314.

8. Moliner L., Pontisso P., De Salvo G.L. a kol. Hladiny HCV RNA v sére a pečeni u pacientov s chronickou hepatitídou C: korelácia s klinickými a histologickými znakmi // Črevo. 1998. Vol. 42. s. 856–860.

9. Perz J., Armstrong G., Farrington L. Príspevky infekcií vírusom hepatitídy B a hepatitídy C k cirhóze a primárnej rakovine pečene na celom svete // J. Hepatol. 2006 Vol. 45 ods. rr. 529–538.

10. Statermayer A.F., Stauber R., Hofer H., Rutter K. a kol. Vplyv genotypu IL28B na skoré a trvalé virologické odpovede u predtým neliečených pacientov s chronickou hepatitídou C. Klinická gastroenterológia a hepatológia. 2011. V. 4. č. 3. http://health.elsevier.ru / journals.

11. Thomas D.L., Thio C.L., Martin M.P. Genetická variácia v IL28B a spontánny klírens vírusu hepatitídy C // Príroda. 2009 Vol. 461 (7265). rr. 798-801.

Vírusová hepatitída C patrí medzi spoločensky významné ochorenia a je jednou z hlavných príčin chronické ochorenie pečeň. WHO odhaduje, že vírusom hepatitídy C (HCV) je celosvetovo infikovaných 170 miliónov ľudí alebo 3 % populácie. V súčasnosti je „zlatým štandardom“ antivírusovej liečby chronickej hepatitídy C (CHC) pegylovaný interferón v kombinácii s ribavirínom. Kombinovaná antivírusová liečba poskytuje stabilnú virologickú odpoveď v priemere u 50-60 % pacientov s chronickou hepatitídou C, vrátane 40-50 % pacientov s HCV genotypom 1 a 70-80 % s genotypom 2 a 3. Individuálny prístup k liečbe, včasná prevencia a náprava nežiaducich udalostí zvyšuje účinnosť liečby, ale v takmer 40% prípadov je antivírusová terapia neúčinná. Objavil sa genetický marker, ktorý umožňuje čiastočne predpovedať jeho výsledok: polymorfizmus génu interleukínu 28B (IL28B) do určitej miery určuje citlivosť imunitného systému pacienta na stimuláciu interferónom.

V roku 2009 D. Ge a kol. našli jednu nukleotidovú substitúciu v IL28B na chromozóme 19, ktorý bol, berúc do úvahy lokalizáciu, označený ako rs12979860. V závislosti od dusíkatej bázy umiestnenej v tomto lokuse boli izolované 2 alely: rs12979860 C (cytozín) a rs12979860 T (tymín). Na základe kombinácie alel sú možné 3 genotypové varianty polymorfizmu génu IL28B: CC, CT a TT. V závislosti od frekvencie v populácii je hlavná alela rs12979860 C; vyskytujúce sa častejšie a alela rs12979860 T je minoritná. Bolo dokázané, že frekvencia pozitívnej odpovede na antivírusovú liečbu je vyššia u pacientov s genotypmi RS12979860 CC (70,5 %) a nižšia u pacientov s genotypmi RS12979860 CT a TT (32,0 %, resp. 23,3 %). Prenos alely T, ktorý zvyšuje pravdepodobnosť negatívnej odpovede na antivírusovú terapiu, je dôležitejší ako „ochranný účinok“ alely C. Napriek tomu genotyp CC prispieva k eliminácii vírusu. Stanovenie polymorfizmu génu IL28B umožnilo predpovedať pravdepodobnosť dosiahnutia trvalej virologickej odpovede so senzitivitou 65 % a špecificitou 78 % pre marker rs12979860 tohto génu.

Stanovenie genetického polymorfizmu tohto markera má najväčší význam u pacientov s HCV genotypom 1, vzhľadom na nižšiu mieru odpovede na štandardnú antivírusovú liečbu. Niektoré štúdie nenašli jasný vzťah medzi polymorfizmom IL28B a mierou trvalej virologickej odpovede u týchto pacientov. Stanovenie genotypu IL28B má veľký význam pri hodnotení potenciálnej odpovede na antivírusovú liečbu a pri výbere pacientov, ktorí môžu mať prospech z kratších liečebných cyklov. Vo všeobecnosti je polymorfizmus IL28B jedným z faktorov, ktoré umožňujú individualizovať liečbu chronickej hepatitídy C. V literatúre existuje dôkaz, že polymorfizmus génu IL28B je spojený s vývojom HCV-indukovaného hepatocelulárneho karcinómu. Zdá sa teda zaujímavé študovať vzťah tohto génového polymorfizmu so závažnosťou poškodenia pečene, najmä s abnormálnymi pečeňovými testami, laboratórnymi testami fibrózy a regenerácie pečene, čo pomôže objasniť úlohu polymorfizmu IL28B v patogenéze a progresie CHC.

Cieľom štúdie bolo študovať vzťah medzi laboratórnymi markermi cytolýzy, cholestázy, kyseliny hyalurónovej (HA), alfa-fetoproteínu (AFP), vírusovej záťaže (VL) a genetického polymorfizmu IL28B v oblasti rs12979860 u pacientov s CHC.

Materiály a metódy výskumu

Vyšetrili sme 100 pacientov s CHC v reaktivačnej fáze, hospitalizovaných v Perm Regional Infectious klinická nemocnica začať kombinovanú antivírusovú liečbu. Priemerný vek pacientov bol 38,3 ± 10,4 rokov, z toho 48 mužov a 52 žien. Etiologické overenie diagnózy sa uskutočnilo kvalitatívnym a kvantifikácia v krvi pacientov s HCV RNA pomocou polymerázovej reťazovej reakcie (PCR), ako aj sérologických markerov HCV. Podľa genotypu HCV boli pacienti s CHC rozdelení nasledovne: genotyp 1 bol stanovený u 56 % pacientov, genotyp 2 a 3 – u 44 %. Kontrolná skupina zhodného pohlavia zahŕňala 90 zjavne zdravých (darcov) jedincov s priemerným vekom 36,3 ± 7,9 rokov bez ochorenia pečene.

Biochemické parametre v krvnom sére boli stanovené na automatickom analyzátore "Architect-4000" (USA). Hladina HA - priamy marker fibrózy pečene - v krvnom sére bola hodnotená pomocou súpravy BCM Diagnostics enzýmovou imunoanalýzou na analyzátore Stat-Fax (USA) u 76 pacientov. Koncentrácia AFP v krvnom sére bola študovaná imunochemiluminiscenčnou analýzou pomocou súpravy AFP (Siemens) na analyzátore Immulite-1000 (Nemecko) u 44 pacientov. V kontrolnej skupine bola sledovaná koncentrácia HA a AFP u 20 prakticky zdravých jedincov.

Alelovo špecifická PCR s detekciou produktu v reálnom čase sa použila na identifikáciu polymorfných variantov markera rs12979860 génu IL28B. Návrh primerov a sond bol vykonaný zamestnancami CJSC Syntol (Moskva). (USA). Na určenie genotypov tohto génu u všetkých pacientov s CHC a 90 zdravých darcov bola DNA izolovaná z celej žilovej krvi, predtým stabilizovaná EDTA.

Štatistické spracovanie získaných výsledkov bolo realizované pomocou programu Statistica 7.0 (StatSoft). Rozdelenie výsledkov bolo kontrolované podľa Kolmogorov-Smirnovovho kritéria. Pre popis získaných kvantitatívnych charakteristík boli údaje prezentované ako medián (Me) a 25. a 75. percentil, minimum (min) a maximum (max). Keďže distribúcia hodnôt GA a AFP sa odchyľovala od normálu, na posúdenie významnosti rozdielov medzi nezávislými skupinami sa použil neparametrický Mann-Whitney test. Na opísanie pomeru frekvencií genotypov a alel génov sa použila Hardy-Weinbergova rovnováha. Študované skupiny boli v rovnovážnom (stabilnom) stave z hľadiska genotypových frekvencií študovaného génu (p > 0,05). Rozdiely v dvoch populáciách sa vypočítali podľa pomeru šancí (OR) s použitím prístupu kontroly prípadu pre rôzne vzory dedičnosti: aditívne, spoločné, multiplikatívne, dominantné a recesívne, a považovali sa za významné pri p.< 0,05. Kvantifikácia lineárny vzťah medzi dvoma nezávislými premennými bol stanovený pomocou Spearmanovho koeficientu poradovej korelácie (r). Významnosť vzťahov a rozdielov medzi vzorkami sa považovala za významnú, keď hodnota p< 0,05.

Výsledky výskumu a diskusia

Berúc do úvahy biochemické parametre krvi u pacientov s CHC, bol zistený syndróm cytolýzy, ktorý bol charakterizovaný zvýšením aktivity alanínu (ALT) a aspartátových transamináz (AST) v krvnom sére, mezenchymálnym zápalovým syndrómom (zvýšený tymolový test) a syndróm cholestázy (zvýšená aktivita alkalickej fosfatázy, priamy bilirubín).

V skupine pacientov s CHC bol zaznamenaný zvýšený obsah HA, čo odráža aktiváciu fibrózy na pozadí chronického zápalu pečene, pričom medián koncentrácie HA v krvi bol 2-krát vyšší ako hladina v kontrolná skupina (p = 0,01) (tabuľka 1). Koncentrácia AFP ako markera regenerácie hepatocytov u pacientov s CHC bola tiež významne vyššia ako v kontrolnej skupine.

Virémia u pacientov s CHC vykazovala veľké rozdiely vo VL. Hladina VL u pacientov bola v 70 % vysoká – nad 2∙106 kópií/ml, v 30 % prípadov nízka – pod 2∙106 kópií/ml. Zároveň bola minimálna virémia 0,022∙106, maximum - 8800∙106 kópií/ml. Variabilita virémie v skupine vyšetrovaných počas reaktivácie CHC je v súlade s údajmi z literatúry.

stôl 1

Kyselina hyalurónová a alfa-fetoproteín u pacientov s CHC a v kontrolnej skupine

Poznámka. p - významnosť rozdielov v ukazovateli v skúmaných skupinách bola vypočítaná pomocou Mann-Whitneyho testu.

V tejto štúdii sme analyzovali jednonukleotidovú substitúciu (SNP) v géne IL-28B (rs12979860) u 190 jedincov (90 darcov bez chronické choroby pečene a 100 pacientov s CHC).

Prevalencia homozygotov pre alelu C (CC) v skupine zdravých a CHC pacientov sa signifikantne nelíšila (χ2 = 0,61; p = 0,44) a predstavovala 42 a 36 % (obrázok). Výskyt patologických homozygotov TT v skupine zdravých a CHC pacientov bol 6 % a 8 % (χ2 = 0,35; p = 0,55). V oboch skupinách prevládali ST heterozygoti (χ2 = 0,79; p = 0,67). Pomer frekvencií alel študovaného markera v študovaných skupinách tiež nebol charakterizovaný rozdielom. Výskyt patologickej minoritnej alely T v skupine CHC bol 36 %, v kontrolnej skupine 32 % (χ2 = 0,64; p = 0,42). Získané výsledky o výskyte genotypov a alel IL-28B (rs12979860) u zdravých jedincov aj v skupine CHC medzi populáciou Permského územia sa prakticky nelíšia od údajov iných autorov. Najmä v Rusku je prevalencia ochrannej alely C v populácii 61-64%, v našich štúdiách - 64% u pacientov s CHC a 61% v kontrolnej skupine. Počas štúdie sa teda nezistil žiadny štatisticky významný rozdiel vo frekvenciách genotypov a alel markera IL-28B (rs12979860) medzi skupinami zdravých jedincov a jedincami s CHC. V skupine pacientov s CHC bola frekvencia rizikovej alely T 0,359, čo sa významne nelíšilo od jej frekvencie 0,319 u zdravých ľudí. Z 56 pacientov infikovaných HCV-1 malo 40 ľudí nepriaznivú kombináciu genotypov RS12979860 CT a TT (35, resp. 5), ktorá sa významne líšila od kontrolnej skupiny (χ2 = 4,55; p = 0,03). Potenciálne riziko vzniku nestabilnej virologickej odpovede s HCV genotypu 1 teda bolo 71,4 %.

Prevalencia genotypov a alel polymorfizmu génu IL-28B (rs12979860) u pacientov s CHC a v kontrolnej skupine

V korelačnej analýze minoritná alela T génu IL-28B (rs12979860) vykazovala významné vzťahy s funkčnými pečeňovými testami: ALT, AST, celkovým a priamym bilirubínom, čo poukazuje na vzťah génového polymorfizmu a závažnosti poškodenia pečene. Tieto údaje poukazujú aj na nepriaznivý vplyv závažnosti cytolýzy a cholestázy na prognózu antivírusovej terapie (tab. 2). Získané výsledky sú v súlade s údajmi štúdie Agundez J.A. a kol. (2009), ktorí odhalili vzťah génového polymorfizmu s ALT, gama-glutamyl transpeptidázou, pomerom AST/ALT.

tabuľka 2

Vzťah vedľajšej alely T génu IL-28B (rs12979860) s funkčnými pečeňovými testami, kyselinou hyalurónovou a alfa-fetoproteínom pri CHC

Poznámky: r - vzťah ukazovateľov; p je významnosť korelácie.

Pozitívna významná korelácia medzi alelou T a HA naznačuje, že skúmaný gén možno hodnotiť ako faktor v progresii fibrózy pečene. Korelácia s AFP tiež naznačuje asociáciu génového polymorfizmu s výraznejším poškodením pečene a rizikom hepatokarcinómu. Eurich D. a kol. (2012) zistili súvislosť medzi IL-28B a AFP pri hepatokarcinóme spojenom s CHC a s progresiou fibrózy u pacientov s HCV infekciou po transplantácii pečene. Vzťah alely T s hladinou VL môže naznačovať závažnejšie poškodenie hepatocytov u pacientov s CHC, čo je v súlade so vzťahom medzi HA a stupňom virémie. Vo všeobecnosti identifikované vzťahy minoritnej alely génu T so študovanými testami naznačujú skutočnosť, že genetický polymorfizmus IL-28B možno realizovať nepriamo prostredníctvom množstva parametrov zapojených do patogenézy CHC a ovplyvňujúcich účinnosť antivírusových terapiu. Medzi tieto faktory patrí prítomnosť syndrómov cytolýzy a cholestázy, závažnosť fibrózy pečene, aktivácia regenerácie hepatocytov a hladina VL.

Polymorfizmus génu IL-28B (rs12979860) je teda u pacientov s CHC spojený so závažnosťou poškodenia pečene, čo je potrebné vziať do úvahy pri rozhodovaní o optimalizácii liečby v prípade nepriaznivej kombinácie týchto faktorov, najmä u pacientov s vedľajšou T alelou.

1. U pacientov s CHC v reaktivačnej fáze bolo zistené zvýšenie HA a AFP, čo poukazuje na aktiváciu fibrózy a regeneráciu v pečeni.

2. Počas štúdie sa nezistil štatisticky významný rozdiel vo frekvencii výskytu genotypov a alel génu IL-28B (rs12979860) medzi skupinami zdravých jedincov a pacientmi s CHC s rôznymi genotypmi vírusu.

3. U 71,4 % pacientov infikovaných HCV-1 bola nepriaznivá kombinácia genotypov RS12979860 CT a TT, a teda potenciálne riziko rozvoja negatívnej odpovede na antivírusovú liečbu s maximálnym prejavom u homozygotov TT.

4. U pacientov s chronickou hepatitídou C bol zistený vzťah medzi minoritnou alelou T génu IL-28B (rs12979860) a závažnosťou syndrómov cytolýzy a cholestázy, markermi fibrózy a regenerácie pečene, ako aj úrovňou virémie. .

5. U pacientov s CHC s HCV genotypu 1 je pre stanovenie prognózy antivírusovej terapie a riešenie problematiky optimalizácie liečby potrebné zhodnotiť kombináciu faktorov: závažnosť cytolýzy a cholestázy, koncentráciu HA, plazmatické koncentrácie HA, koncentráciu HA, cholestázu a cholestázu. AFP a počiatočná úroveň virémie, najmä u pacientov s vedľajšou alelou T génu IL-28B.

Recenzenti:

Ustinova O.Yu., doktorka lekárskych vied, profesorka, zástupkyňa riaditeľa pre lekársku prácu, FBSI "Federálne vedecké centrum pre medicínske a preventívne technológie pre riadenie zdravotných rizík populácie", Perm;

Gein SV, doktor lekárskych vied, vedúci výskumník, Laboratórium biochémie mikrobiálneho vývoja, Ústav ekológie a genetiky mikroorganizmov, Uralská pobočka Ruskej akadémie vied, Perm.

Dielo sa do redakcie dostalo 16.12.2013.

Bibliografický odkaz

Bulatova I.A., Krivtsov A.V., Shchekotova A.P., Larionova G.G., Shchekotov V.V. VZŤAH ZÁVAŽNOSTI POŠKODENIA PEČENE S POLYMORFIZMOM GÉNU INTERLEUKÍN 28B U PACIENTOV S CHRONICKOU HEPATITIDOU C // Základný výskum. - 2013. - č.12-2. - S. 186-190;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=33301 (dátum prístupu: 02/01/2020). Dávame do pozornosti časopisy vydávané vydavateľstvom "Academy of Natural History"

Interleukín-28 IN(PCR)

Nedávne štúdie ukázali, že genetické faktory, najmä polymorfizmus génu pre interleukín 28B, majú osobitný vplyv na výsledok liečby, ako aj možnosť samovyliečenia pri infekcii vírusom hepatitídy C. Interleukín 28B je predstaviteľom interferónov lambda alebo interferónov typu 3, ktoré majú silný antivírusový účinok a potláčajú replikáciu vírusu hepatitídy C. Bol študovaný polymorfizmus génu pre interleukín 28B spojený s trvalou virologickou odpoveďou. Pri určitých genotypoch sa trvalá virologická odpoveď dosahuje 2-krát častejšie. Na posúdenie prognózy hepatitídy C sa najčastejšie používajú dva hlavné polymorfizmy: rs12979860 a rs8099917. V závislosti od nukleotidov v týchto lokusoch boli identifikované alely C (cytozín), T (tymín), G (guanín) a zodpovedajúce genotypy: pre alelu rs12979860 - CC, CT, TT, ako aj TT, TG, GG pre alely rs8099917. Boli získané údaje, že genotyp interleukínu 28B je nezávislým a najvýznamnejším faktorom ovplyvňujúcim frekvenciu skorej a trvalej virologickej odpovede na AVT medzi inými prognostickými faktormi. Polymorfizmy rs12979860 sú zároveň zodpovedné za získanie odpovede a polymorfizmy rs8099917 sú úzko spojené s nedostatočnou odpoveďou na AVT. Úspešnejšie výsledky AVT sa dosiahli u pacientov s genotypmi CC rs1297960 a TT rs8099917 – viac ako 70 % v porovnaní s genotypmi RS1297960 CT a TT a genotypmi rs8099917 GT a GG – približne 30 %. Stanovenie polymorfizmu interleukínu 28B umožňuje predpovedať pravdepodobnosť dosiahnutia SVR so senzitivitou vyššou ako 60 % a špecificitou okolo 80 %. Výhodné alely sú rs1297960 CC a rs8099917 TT. Všetky ostatné genotypy určujú negatívnu prognózu. Priaznivé genotypy sú často spojené s väčšou zápalovou aktivitou a štádiom fibrózy. Okrem toho bola zaznamenaná asociácia polymorfizmu rs12979860 s výskytom hepatocelulárneho karcinómu. Nosenie tejto alely sa v kombinácii s inými známymi rizikovými faktormi považuje za nezávislý rizikový faktor.

Štúdium polymorfizmu génu interleukínu 28B spolu s ďalšími prognostickými faktormi umožňuje jasnejšie určiť prognózu priebehu infekcie a účinnosť liečby. Ide o dôležitý krok smerom k individualizovanej antivírusovej terapii, ktorá umožňuje určiť načasovanie liečby a dávky liekov.

Hlavnú úlohu pri infekcii hepatitídy C zohrávajú dve jednonukleotidové substitúcie:

substitúcia cytozínu za tymín (C > T), označená ako rs12979860;
. substitúcia tymínu za guanín (T > G), ktorý má označenie rs8099917.

:
PCR v reálnom čase

:

• Dôležitá podmienka pre zabezpečenie kvality laboratórny výskum krv sa odoberá nalačno, ráno (do 12:00).
• 12 hodín pred štúdiom by ste mali vylúčiť alkohol, fajčiť, jesť, obmedziť fyzickú aktivitu.
• Ráno v deň odberu krvi na výskum môžete piť vodu.
• Vylúčte lieky; ak nie je možné liek zrušiť, treba o tom informovať laboratórium.
• Odporúča sa odobrať materiál pred akýmikoľvek lekárskymi diagnostickými manipuláciami.
• Pri hodnotení hladiny hormónov u žien je dôležité zvážiť deň menštruačný cyklus kedy je najlepšie zistiť určité hormóny. Tieto informácie môžete získať od svojho lekára.

Indikátor	Charakteristický
Analyzátor a testovací systém	Detekčný zosilňovač "DT-96"; "Technológia DNA" (Rusko)
Indikácie na vymenovanie
Interpretácia výsledkov
Genotyp rs8099917 T/T je spojený so spontánnym vymiznutím infekcie bez ohľadu na liečbu. Alela G v rs8099917 je riziková alela a je spojená s nízky level odpoveď na liečbu pegylovaným interferónom a ribavirínom

Indikátor

Charakteristický

Analyzátor a testovací systém

Detekčný zosilňovač "DT-96"; "Technológia DNA" (Rusko)

Indikácie na vymenovanie

• Predpovedanie výsledku ochorenia a odpoveď na liečbu;
• výber medzi štandardným a pegylovaným interferónom v kombinácii s ribavirínom na liečbu chronickej hepatitídy C;
• voľba taktiky „čakanie na dostupnosť trojitej liečby so zahrnutím inhibítorov HCV proteázy“ alebo liečba štandardným režimom duálnej liečby interferónom v kombinácii s ribavirínom u pacientov s ďalšími faktormi (inými ako fibróza pečene), ktoré znižujú pravdepodobnosť liečba liekmi existujúceho štandardu antivírusovej terapie

Interpretácia výsledkov

Nosiči genotypu rs12979860 C/C majú dvojnásobné zvýšenie pravdepodobnosti pozitívnej odpovede na liečbu interferónom a ribavirínom, zatiaľ čo účinnosť liečby v skutočnosti priamo nesúvisí s rasou alebo národnosťou – práve Afroameričania sú častejšie nositeľmi T/T genotypu ako u Európanov a Východoázijčanov. Genotyp C / C sa tiež deteguje prevažne u ľudí so spontánnym vymiznutím infekcie, imunitný systém nositelia alel C/C s väčšou pravdepodobnosťou porazia vírus sami. Je zaujímavé, že pri genotype C/C je vírusová záťaž (množstvo vírusu v krvi) pred liečbou vyššia ako u nosičov alel T/T.
Genotyp rs8099917 T/T je spojený so spontánnym vymiznutím infekcie bez ohľadu na liečbu. Alela G v rs8099917 je riziková alela spojená so slabou odpoveďou na liečbu pegylovaným interferónom a ribavirínom.