bakteriyolojik tanı. Yönergeler. Tifo ve paratifo ateşlerinin bakteriyolojik teşhisi A, B ve C Bakteriyolojik laboratuvar teşhisi

Kültürel araştırma yöntemi belirli bir türdeki bakterilerin besin ortamından kültürleme yoluyla izolasyonu ve sonraki türlerin tanımlanmasıdır. Bakterilerin türü, yapıları, kültürel ve çevresel verileri ile genetik, biyokimyasal ve biyolojik göstergeler dikkate alınarak belirlenir. Bakteriyolojik teşhis için Sağlık Bakanlığı tarafından onaylanmış şemalar kullanılmaktadır.

Besin ortamından türetilen, özellikleri henüz belirlenmemiş yeni bakteri türlerine denir. saf kültür. Nihai özellikleri belirlendikten sonra belirli bir yerden ve belirli bir zamanda türeyen bakterilere bir isim verilir. gerilmek. Bu durumda, bir türün suşunun özellikleri, yeri veya izolasyon zamanında küçük bir farka izin verilir.

Yöntemin amacı:

1. Etiyolojik tanı, yani saf bir bakteri kültürünün izolasyonu ve tanımlanması.

2. Mikroorganizmaların sayısının ve özel özelliklerinin belirlenmesi. Örneğin, antibiyotiklere spesifik bir reaksiyon.

3. Epidemiyolojik ve genetik bileşenlerine dayalı olarak mikroorganizmaların intrajenerik farklılıklarının tanımlanması. Bu, farklı yerlerde izole edilen mikroorganizmaların ortaklığını belirlemek için gereklidir ve farklı koşullar epidemiyolojik amaçlar için önemlidir.

Bu araştırma yöntemi, aerobik, fakültatif ve zorunlu aerobik bakteriler için farklı olan belirli sayıda aşamaya sahiptir.

Aerobik ve fakültatif aerobik bakteriler için saf kültür yetiştirme.

1. Aşama

FAKAT) hazırlık faaliyetleri . Bu aşama, malzemenin toplanması, depolanması ve taşınmasını içerir. Ayrıca gerekirse çalışılan bakterinin özelliklerine bağlı olarak işlenebilir. Örneğin, tüberküloz materyali incelenirken aside dirençli mikrobakterileri tanımlamak için alkali veya asit çözeltileri kullanılır.

B) Zenginleştirme. Bu aşama isteğe bağlıdır ve test materyalindeki bakteri sayısı tam teşekküllü bir çalışma yürütmek için yeterli değilse gerçekleştirilir. Örneğin, bir kan kültürü izole edilirken, test kanı 1 ila 10 oranında bir besiyerine yerleştirilir ve bir gün boyunca 37°C sıcaklıkta saklanır.

İÇİNDE) mikroskopi. Test malzemesinin bir lekesi lekelenir ve mikroskop altında incelenir - mikroflora, özellikleri ve miktarı incelenir. Gelecekte, birincil yaymadan, içindeki tüm mikroorganizmaları ayrı ayrı izole etmek gerekir.

G) Ayrı kolonilerin oluşturulması. Malzeme bardağa özel, seçici bir ortam ile uygulanır, bunun için bir halka veya bir spatula kullanılır. Daha sonra, kolonileri yoğuşmadan korumak için bardağı baş aşağı yerleştirin ve bir termostatta yaklaşık 20 saat, sıcaklığı 37°C'de muhafaza ederek saklayın.

Önemli! Araştırma sürecinde izolasyon kurallarına uyulması gerektiği unutulmamalıdır. Bir yandan test materyalini ve uzaklaştırılacak bakterileri korumak, diğer yandan çevredeki kişilerin ve dış ortamın kontaminasyonunu önlemek için.

Koşullu patojenik mikroorganizmalara gelince, çıkarıldıklarında nicel özellikleri önemlidir. Bu durumda, izotonik sodyum klorür çözeltisi içinde malzemenin birkaç yüz kat seyreltilmesinin gerçekleştirildiği nicel tohumlama gerçekleştirilir. Bundan sonra, 50 μl'lik Petri kaplarında ekim yapılır.

2. aşama

FAKAT ) Çalışması morfolojik özellikler ortamdaki koloniler ve mikroskopisi. Yemekler incelenir ve mikroorganizmaların özellikleri, sayıları, büyüme hızları ve en uygun besin ortamı not edilir. Çalışma için, merkeze daha yakın bulunan kolonileri seçmek en iyisidir ve birkaç tür saf kültür oluşursa, her birini ayrı ayrı inceleyin.Kültürün morfotip saflığını incelemek için bir koloni yayması kullanılır, boyanır (genellikle Gram yöntemini veya başka birini kullanarak) ve dikkatlice mikroskobik.

B) Saf kültür birikimi. Bunu yapmak için, tüm morfotiplerin kolonileri, bir besin ortamı ile ayrı test tüplerine yerleştirilir ve belirli bir sıcaklıkta bir termostatta tutulur (çoğu mikroorganizma için 37 ° C'lik bir sıcaklık uygundur, ancak bazı durumlarda farklı olabilir).

Kligler besiyeri genellikle birikim için bir besin ortamı olarak kullanılır.Tüplerinde parçalarının 2/3'ü sütun şeklinde ve 1/3'ü eğimli bir yüzey olan, açık kırmızı renkli test tüplerinde "eğimli" bir görünüme sahiptir. . Kompozisyon:

· MPA

· %0.1 glikoz

· %1 laktoz

· Hidrojen sülfür için özel reaktif

· Fenolik kırmızı gösterge.

Sahne 3

FAKAT) Büyüme seviyesi ve kültürün saflığı. Genel sırayla, türetilen saf kültür tek tip bir büyümeye sahiptir ve mikroskobik inceleme altında hücreler aynı morfolojik ve tentürel yapıya sahiptir. Ancak, farklı bir morfolojik yapıya sahip hücreler varken, belirgin pleoforizme sahip bazı bakteri türleri vardır.

Besleyici ortam olarak Kligler ortamı kullanılmışsa, kolonun ve eğimli kısmın rengi değiştirilerek biyokimyasal özellikler belirlenir. Örneğin, laktoz ayrışırsa, eğimli kısım sararır, eğer glikoz - kolonun sararması; hidrojen sülfür üretimi ile sülfatın demir sülfüre geçişi nedeniyle kararma meydana gelir.

Şekilde görebileceğiniz gibi, Kligler ortamı rengini değiştirme eğilimindedir. Bunun nedeni, azotlu maddelerin bakteriler tarafından parçalanması ve alkali ürünlerin oluşumunun hem kolonda (anaerobik koşullar) hem de eğimli yüzeyde (aerobik koşullar) homojen olmayan bir şekilde gerçekleşmesidir.

Aerobik bir ortamda (eğimli yüzey), anaerobik bir ortama (sütun) göre daha aktif alkali oluşumu gözlenir. Bu nedenle, glikoz ayrıştığında, eğimli yüzeydeki asit kolayca nötralize edilir. Ancak, konsantrasyonu çok daha yüksek olan laktozun ayrışmasıyla asit nötralize edilemez.

Anaerobik ortama gelince, çok az alkali ürün üretilir, bu nedenle burada glikozun nasıl fermente edildiğini görebilirsiniz.

Pirinç. Kligler'in besin ortamı:

1 - ilk ortam,

2 - büyüme E. koli

3 - büyüme S. paratyphi B,

4 - büyüme S. Typhi.

E.koli gaz oluşumu ile glikoz ve laktozun ayrışmasını destekler, hidrojen üretmez . Tüm ortamın süreksizliklerle sararmasına neden olur.

S. paratyphi - laktoz negatif gazların oluşumu ile glikozun ayrışmasını teşvik eder. Eğimli kısım renk değiştirmez, sütun sarıya döner.
S. paratyphi A- hidrojen sülfür üretmez.
S. paratyphi B - hidrojen sülfür üretilir (enjeksiyon sırasında siyah bir renk belirir).

S. tifo - glikoz gaz oluşumu olmadan ayrışır, hidrojen sülfür üretilir, laktoz itici. Enjeksiyon sırasında eğimli kısım renk değiştirmez, kolon sararır ve ortam siyah olur.

Shigella spp.- laktoz negatif, glukoz pozitif, hidrojen sülfür üretilmez. Sütun sarı bir renk alır ve eğimli kısım aynı kalır.

B) Saf kültürün nihai tanımlaması ve antibiyotiklere yanıtı. Bu aşamada kültürün biyokimyasal, biyolojik, serolojik ve genetik özellikleri incelenir.

Araştırma pratiğinde, mikroorganizmaların tüm özelliklerini incelemeye gerek yoktur. Mikroorganizmaların belirli bir türe ait olup olmadığını belirlemek için en basit testleri kullanmak yeterlidir.

bakteriyolojik yöntem hastadan alınan materyalin bakteriyoskopisini, patojenin saf kültürünün izolasyonunu ve antibiyotiklere ve kemoterapi ilaçlarına duyarlılığın belirlenmesi ile tanımlanmasını içerir.

Malzeme seçimi bakteriyoskopik inceleme için, hastalığın iddia edilen etiyolojisine, hastalığın evresine, patogenezini, patojenin biyolojik özelliklerini ve diğer faktörleri dikkate alarak bağlıdır.
1. saat bulaşıcı hastalıklar bakteriyemi ile ortaya çıkan (tifo, jeneralize ve septik salmonelloz formları); sadece piyojenik kokkal mikroflora, Pseudomonas aeruginosa'nın değil, aynı zamanda daha nadir patojenlerinin (Serratia Salinaria, fermente etmeyen bakteriler, anaeroblar, L-form streptokoklar (Suknev yöntemi) ve diğer mikroorganizmaların neden olduğu herhangi bir etiyolojinin sepsisi ile), bunlara başvuran özel besin ortamlarında mahsuller için durumlar. Hastanın kanından ve diğer biyolojik sırlarından izole edilen patojenlerin frekans ve spektrumunun başarısının, bakteriyoloji laboratuvarı çalışanlarının bilgisine, merakına, azim ve azimine bağlı olduğu vurgulanmalıdır.
2. Beyin omurilik sıvısı (pürülan menenjit; tüberküloz menenjit Tüberküloz bakterilerinin izolasyonu için özel besin ortamlarında uzun süreli ekim (bir aydan fazla) ile.
3. Balgam (akut pnömoni ve trakeobronşit, tüberküloz, boğmaca, veba, nadir görülen formlar) Tifo(pnömotifoid), lejyonelloz, solunum mikoplazmozu ve klamidya).
4. Mukus, bademciklerden irin (streptokok ve stafilokok bademcik iltihabı).

5. Bademciklerden gelen plak ve mukus, boğaz ve burundan, konjonktivadan, genital organlardan (difteri) akıntı.
6. Nazal mukozadan kazıma (cüzzam).
7. Burun ve orofarenksten akıntı (sinüzit, ozena, rinoskleroma).

8. Ödemli sıvı, etkilenen kas parçaları, nekrotik dokular (anaerobik enfeksiyonlar); yara akıntısı (botulizm; gerekirse tetanoz).
9. Büyümüş lenf düğümlerinden (tüberküloz, toksoplazmoz) noktalanma.
10 Karbonkül içeriği ve suppureated lenf nodlarından (veba, tularemi, septikopiyemi, şarbon) punktat.

bakteriyolojik çalışmalarözellikle tehlikeli enfeksiyonlar(veba, tularemi, bruselloz, kolera (sadece dışkının (!) incelendiği), çalışanlarının bakteri kültürleri ile çalışırken kendi kendine bulaşma olasılığını ve patojenlerin bunların dışına yayılmasını dışlayan özel rejim laboratuvarlarında gerçekleştirilir. laboratuvarlar.

serolojik çalışmalar. Kliniğe R. Koch tarafından önerilen bakteriyolojik yöntemden biraz sonra tanıtıldılar. 1896'da F. Vidal, hastalığın 1. haftasının sonunda, tifolu hastaların kan serumunun, tifo ateşinin etken maddesi olan tifo basili aglütine etme yeteneği kazandığını keşfetti ( pozitif reaksiyon Vidal). Enfeksiyöz hastalıkların polimikrobiyal etiyolojisi ile Vidal'in keşfinden sonra, patolojik materyalden izole edilen çeşitli bakteri türlerine (otovidal reaksiyon) serum aglutininlerinin titrelerini belirlemeye ve hastalığın evresine bağlı olarak dinamiklerini kontrol etmeye başladılar. hastalık. İzole bakteri türlerinden birine karşı en yüksek aglutinin titreleri, hastalığın gelişiminde daha büyük etiyolojik katılımı lehine tanıklık eder.

zaten başlangıçta Vidal reaksiyonunun uygulamaları klinikte en çok şiddetli formlarörneğin, kanda aglutininlerin yokluğunda tifo ortaya çıkabilir ( olumsuz tepki Vidal), bu yöntemin hem tifo ateşinde hem de diğer bulaşıcı hastalıklarda göreceli tanı değerini gösterir. Daha sonraları daha hassas serolojik yöntemlerle değiştirildi. Ancak Vidal'ın keşfinin öncelikli değeri sonsuza kadar kalacaktır.

Şu anda serolojik tanı için Bakteriyel enfeksiyonlar Bakteriyel antijen eritrositlerin yüzeyinde adsorbe edildiğinde daha hassas yöntemler kullanılır (eritrosit tanıları1). Böylece, temelde yeni serolojik testler geliştirildi: doğrudan (TPHA) ve dolaylı hemaglütinasyon (RIHA). Bakteriyel, viral ve diğer birçok enfeksiyonun (tifo, salmonelloz, şigelloz, bruselloz, tularemi vb.) serolojik tanısında yaygın olarak kullanılırlar. Çökelme reaksiyonu, belirli hastalıklarda (botulizm ve şarbon - hayvanlarda teşhisi için Ascoli reaksiyonu) teşhis değerini korur. Serodiagnozda, 1901'de Fransız araştırmacılar Bordet ve Zhangu tarafından önerilen kompleman fiksasyon reaksiyonu (RCC) (sifiliz, bel soğukluğu, bruselloz, toksoplazmoz, tüberküloz, cüzzam, glanderler) günümüzde yaygın olarak kullanılmaktadır. RSK'nın sahip olduğu en yüksek değer serolojik tanı için viral enfeksiyonlar(grip, diğer akut solunum yolu viral enfeksiyonları, uçuk, ensefalit, parotit, ornitoz, vb.) ve ayrıca çok sayıda riketsiyoz.

Mikobakterilerin izolasyonu ve tanımlanması için patolojik materyali incelemenin bakteriyolojik yöntemi 3 yöntemi içerir: bakteriyoskopik, kültürel ve biyolojik / R.V. Tkzova, 1983; I.I. Rumachik, 1987, 1993; OLARAK. Donçenko, 1989; Yu.Ya. Kassich, 1990; A.Kh Naimanov, 1993; L.P. Khodun, 1997/. Bakteriyolojik inceleme süresi 3 ayı geçmemelidir.

Sığırların organ ve dokularındaki makroskopik tüberküloz değişikliklerine sığır tüberkülozuna neden olan ajanın neden olduğu göz önüne alındığında, bu tür materyalleri bakteriyolojik olarak incelemenin bir anlamı yoktur. Bu tür malzeme araştırma için laboratuvara teslim edilirse, bir komisyon denetimi yapılır ve bir işlem düzenlenir. Malzeme zararsız hale getirilir.

Malzemenin bakteriyoskopik (mikroskobik) muayenesi, her organdan (veya tüberkülozda şüpheli değişiklikleri olan organ parçalarından) ve muayene için verilen bir lenf düğümünden, 2 imprint smear'in hazırlanması, havada kurutulması, bir alevin üzerinde sabitlenmesinden oluşur. alkol lambası, Cyl-Nielsen'e göre boyama ve her yaymada en az 50 görüş alanı ile lekeli yaymaların mikroskop altında görüntülenmesi. Bir karkastan alınan malzemeden en az 20 smear baskısının hazırlanması gerekmektedir. Ek olarak, besin ortamına ekilen materyalin bir süspansiyonundan mikroskopi için yaymalar da hazırlanır.

Smearlerin Ziehl-Neelsen boyaması mikobakterilerin tespiti için seçicidir: lekeli dokuların veya yabancı mikrofloranın mavi arka planına karşı mikobakteriler kırmızı, pembe veya yakut kırmızısı çubuklar olarak görülür. 1.5 (nozul) x 7 (mercek) x 90 veya 100 (objektif) büyütmede binoküler mikroskop altında lekeleri görüntülemek en iyisidir.

Bu yöntem bir sinyal olarak kullanılır, çünkü yaymalarda mikobakterilerin varlığı veya yokluğu ileri araştırmaların gidişatını kesinlikle etkilemez ve pozitif bir bakteriyoskopi sonucunun bile yasal bir önemi yoktur (kuşlar hariç). Malzemenin daha fazla araştırılması gerekiyor.

Test materyalinden bir kuş mikobakteri kültürü (papağanlardan - insan veya kuş türlerinden) izole edilirse, kuşlarda tüberkülozun laboratuvar tanısının kurulmuş olduğu kabul edilir, olumlu sonuç biyo-tahliller ve ayrıca mikroskobik inceleme sırasında patolojik materyalden bulaşmalarda mikobakteriler tespit edildiğinde (kılavuzun 7.3.2. maddesi).

Künye yaymalarının hazırlanmasının, fiksasyonunun ve izlenmesinin çok zaman aldığı gerçeğine de dikkat etmek gerekir ve tohumlanmış bir materyal süspansiyonundan bulaşmalarda bile mikobakterilerin tespit edilmesi çok nadirdir. Bu nedenle, kesim sırasında değişiklik göstermeyen hayvanlardan elde edilen materyalin incelenmesinde çalışma süresinden ve paradan tasarruf etmek için, kendimizi yalnızca besin ortamına ekilen materyalin süspansiyonundan bulaşmaları hazırlamak ve incelemekle sınırlamamız tavsiye edilir. Bu, tüberküloz tanısında hasara yol açmayacaktır, çünkü materyalin çalışması daha da devam etmektedir.

Geleneksel ışık mikroskobuna ek olarak, floresan mikroskopi kullanılabilir. Smearlar aynı şekilde hazırlanır, sabitlenir ve bir florokrom karışımı ile boyanır. Lekeli lekeler floresan mikroskop altında incelenir. Yöntem daha duyarlıdır, ancak daha az spesifiktir ve bu nedenle özellikle pratik laboratuvarlarda çok kabul edilebilir değildir.

Besin ortamlarında mikobakterilerin kültürel izolasyonu, mevcut aşamada tüberkülozun laboratuvar tanısında önemli bağlantılardan biridir. Bununla birlikte, ilk 2-3 haftada materyalin ekildiği besin ortamı (talimatlara göre 5-10 tüp için), aşılama sırasında sterilitenin ihlali nedeniyle kural olarak kısmi veya tam çimlenmeye sahiptir. malzeme. Mahsuller, atipik mikobakterilerin ilk büyümesinin ortaya çıkmasının en muhtemel olduğu zamanda atılır (daha sonra büyüme gösteren tüberkülozun etken maddesinin ilk büyümesinin tezahüründen bahsetmiyorum bile). Bu gibi durumlarda, mikobakterileri besin ortamında mekanik olarak izole etmenin kültürel yöntemi ortadan kalkar. Bu, malzemenin bakteriyolojik incelemesinde olumsuz sonuç alınmasının ana nedenlerinden biridir. Sonuç olarak, materyalin aşılanmasından sonra besin ortamında mikobakteri kolonilerinin üremesi alınmamış ve laboratuvar hayvanları 3 ay boyunca hayatta kalmış, laboratuvarların standart yanıtı şu şekildedir: “Tüberküloza neden olan ajan izole edilmemiştir” veya “ Materyalin tüberküloz için incelenmesi olumsuz” dedi. Çalışmaların sonuçlarına göre, sığırların tüberküline reaksiyonunun nedeni belirlenememiştir ve bu, sığır tüberkülozu olmayan çiftliklerde tüberküline reaksiyon gösteren önemli sayıda hayvanın haksız yere daha fazla kesilmesine yol açmaktadır. büyük ekonomik hasar, sürünün devrini ve üremesini bozar.

Yukarıdakiler göz önüne alındığında, bölge veteriner laboratuvarlarında tüberkülozun bakteriyolojik teşhisinde en zayıf halka olarak mikobakterileri besleyici ortamdaki materyalden izole etmeye yönelik kültürel yönteme öncelik vermek gerekir.

Mikobakterilerin kültürel izolasyon yönteminin olumlu sonuçları esas olarak iki koşula bağlıdır: bir kutuda çalışırken mikobakterilerin materyalden tohumlanmasının güvenilirliğinde bir artış ve sterilite koşullarına uygunluk.

Çalışma için alınan materyalden mikobakteri tohumlama güvenilirliğindeki artış, her şeyden önce, kalitatif seçimine, ekim öncesi muameleye ve tohumlamanın yapıldığı ortamın test tüplerinin sayısındaki artışa bağlıdır.

Malzemeyi besin ortamına ekerken, mikobakteri kolonilerinin büyümesini garanti eden ana koşullar:

a) Kesim sırasında değişiklik göstermeyen kesilen hayvanlardan, her karkastan ayrı olarak bakteriyolojik inceleme için materyal alınır ve her bir numuneyi (her bir hayvandan alınan materyal) besiyerinin 10-20 test tüpüne aşağıdaki şemaya göre aşılanır:

Başın lenf düğümleri (submandibular, faringeal);

Bronşiyal ve mediastinal lenf düğümleri;

Mezenterik (mezenterik) lenf düğümleri;

Diğer lenf düğümleri (şüpheli alanlar varsa);

Organlar (gerekirse de).

Sonuç, ortamın 30-50 test tüpü için bir hayvandan alınan materyalin aşılanmasıdır. Bu, mikobakteri tohumlama güvenilirliğinde 3-5 kat artış sağlar, çünkü numuneler ayrılmadan (talimatlara göre), materyalin iki kafadan ortamın sadece 5-10 test tüpüne ekilmesi tavsiye edilir. Çiftlik.

b) Doğrudan materyalin bakteriyolojik aşılanması sırasında, lenf nodu veya organın morfolojik yapısı bozulmuş parçalar (hiperplazi, sertleşme, noktasal ve çizgili kanamalar, vb.) Ayrıca, değiştirilen tüm alanları kesmek gerekir. Bir harçta hacimce çok fazla malzeme varsa, ikiye ayrılabilir.

c) Malzemeyi işleme ve ekim modunu ihlal etmeden, iş için alınan metodolojiye kesinlikle uyun.

d) Malzemeyi homojenleştirirken, özellikle Lenf düğümleri, steril kum veya ince kırılmış steril cam kullanılması gereklidir. Test materyalinden mikobakterilerin daha iyi çıkarılması için materyali mümkün olduğunca (kremsi bir kıvamda) öğütün

e) Homojenize edilmiş malzemeye, bir malzeme süspansiyonunun besleyici ortam üzerine aşılanması ve biyo-tahlil için gerekli miktarda (ortalama olarak, bir test tüpünde 0,5 cm3'e kadar ve deri altı enfeksiyonu için 1-2 cm3'e kadar) bir harç içinde salin solüsyonu ekleyin. bir kobay). Bu tuzlu su miktarı önceden hesaplanabilir.

f) Malzemenin ekinlerinin gözden geçirilmesi 3, 5, 7, 10, 15 gün sonra ve daha sonra haftada bir yapılmalıdır.

g) Besiyerinde (tipik veya atipik, pigmentli veya pigmentsiz, mukuslu veya kuru, vb.) büyüyen herhangi bir mikroorganizma kolonisi, Ziehl-Neelsen'e göre seçici boyama ile mikroskopi olmalıdır.

Malzemeyi yabancı mikroflora ile kontaminasyondan arındırmak için kullanılan asitten (veya alkaliden) yıkama derecesine dikkat edilmelidir. Artık asit, tohum materyalinden gelen süspansiyonda her zaman mevcut olacaktır, ancak minimumda tutulmalıdır. Bunun bir göstergesi, materyali ektikten sonraki 2-4. günde besiyerinin orijinal renginin restorasyonudur. Ortamın rengi geri yüklenmezse, bu artan miktar artık asit. Ortamın rengi, değişen yoğunlukta mavimsi bir renk alır. Bu durumda (varsayılan) mikobakterilerin büyümesi yavaşlar veya özellikle tüberkülozun nedensel ajanı, yetiştirme rejimini daha fazla talep ettiği için hiç var olmayacaktır. Kalan asit miktarı mikobakteriler üzerinde bir dereceye kadar bakteriyostatik olarak etki eder.

Malzemenin aşılanmasından sonra test tüplerini kapatmak için, pamuk ve pamuklu gazlı bez tıpalar kullanılabilir, ardından parafin, kauçuk içermeyen ve kesilmiş eğik oluklu kauçuk olanlar, kortikal ve metal tıpalar (panjurlar) ile doldurulur.

İzole edilmiş bir mikobakteri kültürünün tür ilişkisini belirlerken, birçok (yaklaşık 300) farklı test bilinmektedir: kültürel-morfolojik, biyolojik, biyokimyasal, serolojik, ilaç direncinin belirlenmesi, vb. Bununla birlikte, veterinerlik uygulamalarında minimumları kullanılır (kılavuza bakın). Laboratuvarlar için izole edilen mikobakteri kültürünün belirlenmesi yeterlidir. aşağıdaki türler: bir biyo-tahlil ile belirlenen sığır, insan ve kuş ve atipik mikobakteriler - Runyon'a (1959) göre gruplara ayrılmıştır: I - fotokromojenik (ışık etkisi altında pigment oluşturan), II - skotokromojenik (maruziyetten bağımsız olarak pigment oluşturan) ışığa - ve karanlıkta ve ışıkta), III - kromojenik olmayan (pigment oluşturmayan) veya pigmentsiz olarak da adlandırılırlar (bu aynı zamanda kuş tüberkülozuna neden olan ajanı da içerir), IV - hızlı büyüyen mikobakteriler ve aside dirençli saprofitler.

Bunu yapmak için, izole kültürün özelliklerini, kolonilerin birincil büyümesinin ortaya çıkma zamanlamasına, pigment oluşumuna, kültürel- Ziehl-Neelsen ile boyandığında morfolojik ve tentürel özellikler. Bir biyo-tahlil sonuçlarıyla birlikte birincil ve hatta alt kültürde kordon oluşumu testi özellikle önemlidir. Büyümüş kolonilerden smear hazırlamak için, bunların hem kolonilerden hem de askıda kalan madde ve yoğuşma kalıntılarından aynı anda yapılması tavsiye edilir, yani. tüpün altındaki sıvı kısımdan.

Ayrıca laboratuvar personeli, tüberküline reaksiyon gösteren hayvanların kontrol kesimini yapma ve araştırma için malzeme numunesi alma, aynı zamanda hayvanların yaşamı boyunca bakteriyolojik araştırma için numune alma (bronşiyal veya nazal mukus, süt) fırsatına sahiptir. , dışkı, idrar, eksüda, kan vb.) yanı sıra mikobakterilerin izolasyonu için yem, su, çevresel nesne örnekleri ve böylece sığırların tüberküline tepkisinin nedenini dolaylı olarak kanıtlar. Ek malzeme ve çevresel nesnelerden numuneler ekerken, mikobakterileri yoğunlaştırmak için iyi bilinen yöntemler kullanılır: sedimantasyon, flotasyon, flotasyon-sedimantasyon ve diğerleri.

Bir biyoanaliz kullanılarak mikobakteri farklılaşmasının kısaltılmış şeması

20. Bakteriyolojik araştırma yönteminin özellikleri

Kültürel (bakteriyolojik) araştırma yöntemi - besin ortamında kültürleyerek saf mikroorganizma kültürlerini (bakterileri) izole etmeyi ve tanımlamayı amaçlayan bir dizi yöntem.

Saf kültür, aynı türden mikroorganizmaların bir koleksiyonudur. Çoğu zaman, izole bir koloni (tek bir mikrobiyal hücrenin yavruları) seçilerek ve yetiştirilerek saf bir kültür elde edilir.

Yöntem adımları:

1. Araştırma için materyal toplanması.

2. Saf kültürün izolasyonu ve tanımlanması.

3. Sonuç.

Araştırma için malzeme toplama.İncelenen materyalin türü, çalışmanın amacına bağlıdır (teşhis - hastadan; epidemiyolojik analiz - çevreden, gıdadan, hastadan ve (veya) bakteri taşıyıcısından).

Saf kültürün izolasyonu. 3 veya 4 aşama içerir:

1. İzole koloniler elde etmek için materyali (ön mikroskopiden sonra) yoğun bir besin ortamına (tercihen ayırıcı tanı veya seçici) sahip bir kaba ekim. En sık mekanik ayırma yöntemiyle üretilir. Bazı durumlarda (örneğin kan), malzeme bir sıvı zenginleştirme ortamında önceden tohumlanır, ardından agar ortamı içeren bir plaka üzerinde alt kültür yapılır. Bazen aşılamadan önce materyalin seçici bir muamelesi gerçekleştirilir (izole edilen mikroorganizmanın özellikleri dikkate alınarak; örneğin dirençli bakterileri izole etmek için bir asit veya alkali ile muamele). 18-24 saat boyunca 37°C sıcaklıkta yetiştirilir. için yetiştirme zamanı farklı şekiller bakteri değişebilir.

2(3): a) bir agar plakası üzerindeki kolonilerin incelenmesi (kültürel özellikler), en tipik olanların seçimi; b) boyama ile bu kolonilerden smear hazırlanması (Gram veya diğer yöntemlere göre); a) incelenen koloninin geri kalanının biriktirme ortamında taranması ve optimum sıcaklıkta bir termostatta büyütülmesi.

3(4). Biriktirme ortamında elde edilen kültürün saflığının incelenmesi. Bununla

amaç smear hazırlamaktır, leke (genellikle Gram'a göre), mikroskobik çalışma

morfolojik ve tentür homojenliği (farklı görüş alanlarında).

4(5). Saf kültür kimliği.

Çözüm. Referans (tipik) suşların özelliklerine kıyasla özelliklerin toplamına göre, materyalden izole edilen mikroorganizma türü belirtilir.

Yöntem değerlendirmesi:

avantajlar: nispeten yüksek hassasiyet ve doğruluk, test materyalindeki mikrop sayısını ve ayrıca antibiyotiklere duyarlılığı belirleme yeteneği; sınırlamalar: göreceli süre, yöntem pahalıdır.

21. Aeroblar ve anaeroblar için besin ortamı. Besin ortamı için gereklilikler, sınıflandırma.

Gereksinimler:

medya besleyici olmalı

belirli bir ph'a sahip olmalı

izotonik olmalıdır, yani ortamdaki ozmotik basınç, hücredeki ile aynı olmalıdır.

nemli olmalı ve çok cıvık olmamalı

belirli bir redoks potansiyeline sahip olmalıdır

steril olmalı

birleşik olmalıdır, yani sabit miktarda bireysel içerik içerir.

Besin ortamı bölünebilir:

A) Menşei

1) doğal - doğal gıda (et, süt, patates);

2) yapay - mikrop yetiştirmek için özel olarak hazırlanmış: - doğal ürünlerden elde edilen ortamlar (et suyu, et-pepton suyu (MPB), et-pepton agar (MPA), - sabit bir bileşime sahip olmayan; - sentetik besin ortamı - kesinlikle çözeltileri damıtılmış suda tanımlanmış miktarlarda tuzlar, amino asitler, azotlu bazlar, vitaminler - sabit bir bileşime sahiptir, aşıların, bağışıklık serumlarının ve antibiyotiklerin üretiminde mikroorganizmaların ve hücre kültürlerinin büyütülmesi için kullanılır;

B) Randevu ile:

1) genel amaç (MPB, MPA) - çoğu mikrop üzerlerinde büyür;

2) seçmeli - bir karışımdan bir tür mikropun büyümesini seçici olarak teşvik edin (örneğin, stafilokoklar için yumurta sarısı-tuz agar);

3) ayırıcı tanı - bir tür mikropun, ortamın görünümüyle diğerlerinden ayırt edilmesini sağlar (örneğin, bağırsak mikrop grubu için Endo, Levin ortamı).

Ayrıca, bağlı olarak kullanım amaçları Saf kültürleri izole etme şemasında, aşağıdaki ortamlar amaca göre ayırt edilebilir:

1) zenginleştirme - patojenle ilişkili mikropların büyümesini engeller;

2) izole koloniler elde etmek;

3) saf kültür birikimi;

B) Tutarlılık:

1) sıvı;

2) yarı sıvı (%0.5-0.7 konsantrasyonda agar-agar ilavesiyle);

3) yoğun - %1'in üzerinde.

4.2. BİYOLOJİK VE MİKROBİYOLOJİK FAKTÖRLER

Tifo ateşi ve paratifo ateşi A, B ve C'nin bakteriyolojik teşhisi

Giriş tarihi: onay anından itibaren

1. GELİŞTİRİLDİ: FGUN St. Petersburg NIIEM onları. Rospotrebnadzor Pastörü (L.A. Kaftyreva, Z.N. Matveeva, G.F. Trifonova); GOUVPO "St. Petersburg Eyaleti tıp akademisi onlara. Federal Sağlık ve Sosyal Kalkınma Ajansı'nın I.I. Mechnikov'u (A.G. Boytsov).

3. Federal Tüketici Haklarının Korunması ve İnsan Refahının Denetlenmesi Servisi Başkanı, Devlet Sağlık Başhekimi tarafından ONAYLANMIŞTIR Rusya Federasyonu G.G.Onishchenko 29 Aralık 2007 0100/13745-07-34

4. Onay anından itibaren TANITILIR.

5. İLK KEZ TANITILDI.

1 kullanım alanı

1 kullanım alanı

1.1. Kılavuzlar, tifo ateşi ve paratifo ateşi A, B ve C'nin bakteriyolojik tanısının temel ilkelerini ve özelliklerini ortaya koymaktadır; patojenlerin biyolojik özellikleri, antibakteriyel ilaçlara direnç, izolasyonları için besin ortamları ve tifo ve paratifoid patojenlerin Salmonella'nın diğer serolojik varyantlarından farklılaşma özellikleri hakkında modern bilgiler içerir.

2. Kısaltmalar listesi

ABP - antibakteriyel ilaç

BCA - bizmut sülfit ağarı

MPU - tıbbi ve önleyici kurum

MIC - minimum inhibitör konsantrasyon

P - orta

U - kararlı

H - duyarlı

RIF - immünofloresan reaksiyonu

CNS - merkezi sinir sistemi

Tablolarda:

"+" - ilk gün olumlu tepki;

"-" - 4-20 gün boyunca negatif reaksiyon;

"(+)" - 2-20 gün boyunca gecikmiş pozitif reaksiyon;

d - çeşitli enzimatik reaksiyonlar.

Enzimatik varyantlara farklılaşma mümkündür.

3. Genel hükümler

3.1. Tifo ateşi ve paratifoid A, B ve C, Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi B ve Salmonella Paratyphi C'nin neden olduğu antroponotik bağırsak enfeksiyonlarıdır. Nadiren - paratyphoid C.

3.2. Hastalıklar ülseratif lezyonlarla karakterizedir. lenf sistemi ince bağırsak, bakteriyemi, ateş, döngüsel klinik kursuşiddetli zehirlenme, gövde derisinde pembe döküntü, hepato ve splenomegali ile. Kabızlık ishalden daha yaygındır. Peyer'in ileum yamalarının ülserasyonu, vakaların yaklaşık %1'inde şunlara yol açar: bağırsak kanaması ve hasta için en olumsuz sonuçları olan bağırsak delinmesi.

3.3. Tifo ateşi ve paratifoid ateş A, B ve C'nin teşhisi, epidemiyolojik öykü ve klasik bakteriyolojik ve serolojik yöntemleri içeren kapsamlı bir laboratuvar incelemesinden elde edilen veriler dikkate alınarak hastalığın klinik belirtileri temelinde yapılır. Bakteriyolojik teşhis öncelikli öneme sahiptir, çünkü Bu durumda, en fazlasını elde etmek mümkündür. full bilgi antibakteriyel ilaçlara duyarlılığı da dahil olmak üzere patojenin biyolojik özellikleri üzerinde.

3.4. Tifo ateşi ve paratifoid ateşin etiyotropik tedavisi için antimikrobiyal ilaçların kullanılması, bir yandan mortaliteyi %10-20'den %1'in altına düşürmeyi mümkün kıldı, diğer yandan laboratuvar tanısını karmaşıklaştırdı, çünkü genellikle laboratuvar araştırması için materyal örneklemesi, antibiyotik tedavisinin başlamasından sonra gerçekleştirilir. Bu gerçek, araştırma için malzeme seçimi, malzemeyi incelemeye alma ve araştırma teknikleri konusuna daha dikkatli yaklaşmayı gerekli kılmaktadır.

3.5. Tifo epidemiyolojisinin modern bir özelliği, bu hastalığa endemik bölgelerden, yakın ve uzak ülkelerden enfeksiyon ithal etme (taşıma) sıklığında ve ayrıca bu ülkelere giderken Rus sakinlerinin enfeksiyonunda keskin bir artıştır. ülke içinde göç sürecinde. Diğer bir özellik, sabit bir ikamet yeri olmayan ve aralarında yüksek tifo insidansının kaydedildiği kişiler şeklinde yüksek epidemiyolojik risk içeren büyük bir birliğin varlığıdır.

3.6. Bu kılavuzlar, tifo ateşi ve paratifoid ateş A, B ve C'nin bakteriyolojik tanı yöntemlerini ve ayrıca bir laboratuvar çalışmasının sonuçlarının doğru yorumlanmasını dikkate alarak birleştirmek için hazırlanmıştır. modern özellikler klinikler, tedavi ve belirli alanlarda epidemiyolojik durum.

4. Bakteriyolojik teşhis için endikasyonlar

Tifo ateşi ve paratifoid ateşi A, B ve C patojenlerinin varlığı için biyolojik materyalin bakteriyolojik incelemesi için bir gösterge, inceleme ihtiyacıdır:

4.1) şüphelenilen tifo ateşi olan ve etiyolojisi bilinmeyen ateşi olan, 5 veya daha fazla gün süren hastalar;

4.2) Tifo ateşi ve paratifo ateşi A, B, C olan hastalarla teması olan kişiler;

4.3) belirli mesleklerin, endüstrilerin ve kuruluşların çalışanları, işe kabul edildikten sonra ve epidemiyolojik belirtilere göre;

4.4) klinik ve epidemiyolojik endikasyonlara göre hastanelere ve özel sanatoryumlara kabul edilmeden önce kişiler;

4.5) kayıt sırasında kişiler hastane tedavisi psiko-nörolojik (psikosomatik) profildeki hastanelere (bölümlere), bakım evlerine, kronik akıl hastalığı ve CNS lezyonları olan kişiler için yatılı okullara, 24 saat kalışlı diğer kapalı kurum türlerine;

4.6) hastaneden taburcu olmadan önce hastalığın klinik semptomlarının kaybolmasından sonra tifo ve paratifo olan hastalar;

4.7) dispanser gözlemi sırasında tifo ve paratifo hastalığına yakalanan kişiler;

4.8) belirli meslek, sanayi ve kuruluşların çalışanları arasında, bu işletme ve tesislerde yeniden işe alındıklarında tespit edilen kronik bakteri taşıyıcıları;

4.9) Şüpheli tifo ve paratifo ateşi durumunda kesit materyali.

5. Yöntemin lojistiği

5.1. Mikrobiyoloji laboratuvarları için standart test ve yardımcı ekipmanlar, ölçü aletleri.

5.2. Yetiştirme, izolasyon, tanımlama ve tifo ve paratifoid A, B ve C'ye neden olan ajanların antibakteriyel ilaçlara duyarlılığının belirlenmesi için besin ortamı, tanısal serum ve kimyasal reaktifler.

5.3. Tifo ve paratifoid hastalıklarının laboratuvar teşhisi ve bakteri taşıyıcılarının tespiti için, belirlenen prosedüre uygun olarak Rusya Federasyonu topraklarında kullanımı onaylanmış besin ortamları ve reaktifler kullanılmalıdır.

6. Tifo ve paratifo laboratuvar teşhisi

6.1. Bakteriyolojik yöntemin prensibi, hastalığın evresine bağlı olarak çeşitli biyolojik substratlarda (kan, idrar, dışkı, safra, kemik iliği, roseola) canlı mikroorganizmaların saptanmasına dayanır. Bunu yapmak için, belirli bir miktarda biyolojik materyal özel besin ortamlarına ekilir, ardından bir termostatta inkübasyon ve S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B ve S. Paratyphi'nin karakteristik özelliği olan gelişmiş mikroorganizma kolonilerinin tanımlanması C, kültürel ve enzimatik özelliklere ve antijenik özelliklere göre.

6.2. Vücudun patojenden salınmasının doğru bir etiyolojik teşhisi ve kontrolünü yalnızca bakteriyolojik bir çalışma sağlayabilir. Bir ilişkide ayırıcı tanı tifo ateşi ve paratifoid ateşi, tek yöntem biyolojik materyalin patojenin izolasyonu ve serolojik bir varyant düzeyinde tanımlanması ile laboratuvar çalışmasıdır, tk. bulaşıcı sürecin klinik seyri, bu nozolojik formları ayırt etmeyi her zaman mümkün kılmaz.

7. Bakteriyolojik inceleme

7.1. Tifo ateşi ve paratifoid A, B ve C'nin nedensel ajanlarının izolasyonu, biyomalzemelerin aynı bakteriyolojik inceleme şemasına göre gerçekleştirilir.

7.2. Malzeme toplama prosedürü laboratuvar araştırması SP 3.1.1.2137-06, tifo ve paratifo hastalıkları için belirlendi.

7.3. Biyomateryallerin toplanması ve mikrobiyoloji laboratuvarlarına taşınması tekniği MU 4.2.2039-05'te açıklanmıştır.

7.4. Tifo ateşi ve paratifo ateşi teşhisi amacıyla bakteriyolojik muayene için malzemeler şunlardır:

kan;

dışkı;

idrar;


Patojenler ayrıca şunlardan izole edilebilir:

roseol;

kemik iliği;

anne sütü.

SP 3.1.1.2137-06'ya göre bakteri taşıyıcılarını tanımlamak için bakteriyolojik araştırma malzemeleri şunlardır:

dışkı;

idrar;

safra (duodenal içerik).

7.5. Teşhisi netleştirmek için kesit materyal çalışması yapılır.

7.6. Laboratuvar araştırması için biyolojik materyalin toplanması, etiyotropik tedaviye başlamadan önce gerçekleştirilir: sağlık çalışanı tifo-paratifoid enfeksiyonundan şüphelenen; grup ve salgın hastalık durumunda - Rospotrebnadzor kurumlarının uzmanları ve tıbbi kurumların personeli tarafından. Hastanede yatan hastalardan bakteriyolojik inceleme için malzeme hastanenin acil servisinde alınır.

7.7. Hastalar veya taşıyıcılar (temaslı kişiler) ile iletişim kuran kişilerden malzeme toplama işlemi, hastaların tespit edildiği yerde sağlık tesislerinin ve diğer kurum ve kuruluşların sağlık çalışanları tarafından gerçekleştirilir.

7.8. Laboratuvar araştırması için biyomateryallere özel bir yön eşlik eder. Materyallerin öznelerin kendileri tarafından teslimine izin verilmez. Malzemenin zamanında teslimi mümkün değilse, koruyucular ve taşıma ortamları kullanılır (Tablo 1).

8. Bakteriyolojik kan testi

Kan testi için bir endikasyon, tifo-paratifoid hastalık şüphesi veya kaynağı bilinmeyen ateşli bir durumdur (ateş). bilinmeyen kökenli) 5 veya daha fazla gün boyunca gözlemlendi (SP 3.1.1.2137-06).

Kan - besin ortamı oranı 1:10-1:60 olmalıdır. Bağımsız olarak alınan kan örneklerinin sayısı ve alınma zamanı, ilgili doktor tarafından MU 4.2.2039-05'e göre, nedeni bilinmeyen ateş için veya SSCB Sağlık Bakanlığı'nın MU 04-723/3'üne göre belirlenir ( 1984) şüpheli tifo-paratifoid hastalıklar için. alan hastalarda antibakteriyel ilaçlar, numuneler, ilacın bir sonraki dozunun uygulanmasından (alımından) hemen önce toplanmalıdır.

Ateş varlığında, vücut sıcaklığındaki bir artışın arka planına karşı kan almak en uygunudur (ancak sıcaklığın zirvesinde değil!). Besleyici ortam üzerine ekim, doğrudan hastanın başucunda gerçekleştirilir.

Tifo-paratifoid hastalıklarından şüpheleniliyorsa, kan kültürü için Rapoport besiyeri, %20 safra suyu, %1 glukoz ilaveli et-pepton suyu (100 ml'lik flakonlarda) kullanılabilir. Daha önce steril distile (musluk) su içinde kullanılmış kan kültürleri. Ancak özel kan kültürü besiyeri kullanılması tercih edilir.

Ateşin yüksekliğinde ekilen kan miktarı, daha sonraki bir tarihte - 20 ml'ye kadar (çocuklarda - 5 ml'ye kadar) 10 ml olabilir.

5 günden uzun süren, nedeni bilinmeyen ateş için, kural olarak, birkaç kan örneği incelenmelidir. Bir damardan kan örneklemesi MU 4.2.2039-05'e göre yapılır. Bu, gerçek bakteriyemiyi damar delinmesi sırasında kazara kan kontaminasyonundan ayırt etmek için gereklidir (yağ veya ter bezinin kazara delinmesine bağlı numune kontaminasyonu olasılığı %3'tür). Bu durumda kan kültürü için iki ortam kullanılır: 1) aeroblar ve fakültatif anaeroblar için bir ortam ve 2) zorunlu anaeroblar için bir ortam (örneğin, Sağlık Bakanlığı'nın talimatına göre "çift" bir ortam + tioglikol ortamı) 12.04.85 N 535 tarihli SSCB'nin veya aeroblar ve anaeroblar için evrensel bir ortam.

Rusya'da kullanım için onaylanmış endüstriyel olarak üretilmiş ortamların kullanılması tercih edilir.

Mahsuller, günlük izleme ile 10 gün boyunca 37 °C'de inkübe edilir. Bu durumda, "çift" ortama sahip şişeler, ortamın yoğun kısmını yıkayarak eğilir.

10. günde büyüme belirtilerinin olmaması durumunda olumsuz cevap verilir.

Büyüme belirtileri varsa (bulanıklık, Rapoport besiyerinin kızarıklığı, "çift" besiyerinin yoğun kısmında görünür kolonilerin görünümü), tohumlama bir polikarbonhidrat besiyerinde ve Petri kaplarında yoğun bir besiyerinde paralel olarak gerçekleştirilir ( nedeni bilinmeyen ateş durumunda kanlı agar ve şüpheli tifo paratifoid hastalıkları durumunda Endo besiyeri).

Polikarbonhidrat ortamına doğrudan tohumlama, kan kültürü yapıldığında patojen monokültürünün büyümesinin yüksek bir olasılıkla gözlemleneceği varsayımına dayalı olarak, çalışma süresini azaltmak için gerçekleştirilir. Bu varsayımı kontrol etmek ve tek tek kolonileri bölerek saf bir kültürü izole etmek için Endo besiyeri veya kanlı agar üzerinde paralel kaplama gereklidir.

Bu besiyerlerinde monokültür büyümesi gözlemlenirse, polikarbonhidrat ortamının biyokimyasal özellikleri dikkate alınabilir. Kültürün saflığını kontrol etmek için, Gram ile boyanmış bir polikarbonhidrat ortamından bir yaymanın mikroskopisi yapılması gerekir. Bu aşamada, karşılık gelen aglütinasyon yapan O- ve H-salmonella serumları ile cam üzerinde bir aglütinasyon reaksiyonu kurmak ve bir ön cevap vermek de mümkündür.

Tifo ateşi ve paratifo ateşi şüphesi olan hastaların kanının bakteriyolojik inceleme şeması Şekil 1'de gösterilmektedir.

Şekil 1. Tifo ve paratifo olduğundan şüphelenilen hastaların kanının bakteriyolojik inceleme şeması

Şekil 1. Tifo ve paratifo olduğundan şüphelenilen hastaların kanının bakteriyolojik inceleme şeması

Menşei bilinmeyen ateşi olan hastaların kanının bakteriyolojik inceleme şeması Şekil 2'de gösterilmektedir.

İncir. 2. Menşei bilinmeyen ateşi olan hastaların kanının bakteriyolojik inceleme şeması

İncir. 2. Menşei bilinmeyen ateşi olan hastaların kanının bakteriyolojik inceleme şeması

Kültürün kültürel-morfolojik, enzimatik özellikler ve serolojik özelliklerle daha fazla tanımlanması süreci, ilgili bölümlerde daha ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

9. Dışkıların bakteriyolojik muayenesi

Dışkı örnekleri, defekasyondan hemen sonra, altına bir yaprak kalın temiz kağıt yerleştirilmiş, dezenfekte edilmiş ve iyice yıkanmış bir kaptan alınır. Materyal, steril bir kabın kapağına monte edilmiş bir kaşık-spatula kullanılarak toplanır. Spatulalı bir kap olmadığında malzemeyi almak için herhangi bir steril alet (steril tahta spatula, tel halka, kaşık vb.) kullanılır. Patolojik safsızlıkların varlığında, mukus, irin, pul içeren ancak kan içermeyen alanları seçmek gerekir. Sıvı dışkı örnekleri, kapalı bir hazneli steril plastik Pasteur pipeti kullanılarak alınır.

Alınan malzemenin hacmi en az 2 g olmalıdır En uygun malzeme, dekore edilmiş bir sandalye durumunda malzemeyi almaktır - ceviz miktarında; ne zaman sıvı dışkı kaptaki tabakası en az 1.5-2.0 cm olmalıdır.Steril bir kaba yerleştirilen materyal 2 saat içinde laboratuvara teslim edilir.

Materyal 2 saat içerisinde laboratuvara teslim edilemiyorsa koruyucu (medyumlu taşıma sistemi) içinde toplanır. Malzemenin hacmi ortamın hacmini geçmemelidir.

Dışkı besiyerinde dikkatlice homojenize edilmelidir. Numuneler çalışmaya başlamadan önce gün boyunca buzdolabında (4-6 °C) saklanabilir.

Tifo ateşi ve paratifoid A, B ve C'ye neden olan ajanları ve ayrıca akut bağırsak enfeksiyonlarının diğer patojenlerini izole etmek için kullanılan taşıma ortamları ve koruyucular Tablo 1'de sunulmaktadır.

tablo 1

Dışkı taşınması için en yaygın olarak kullanılan taşıma ortamları ve koruyucular

Bir rektal sürüntü kullanılarak doğrudan rektumdan toplanan dışkı örnekleri, öncelikle teşhisi nesnelleştirmek için kullanılır (MU 4.2.2039-05). Malzeme sağlık personeli tarafından alınır. Kural olarak, smear almak için özel bir sonda, taşıma sisteminin bir parçasıdır. Taşıma ortamının rektal mukozaya girmesinin kabul edilemez olduğuna dikkat etmek önemlidir! Bu nedenle rektal sürüntü ancak materyali aldıktan sonra taşıma ortamına daldırılmalıdır. Hastadan kalçalar mideye çekilerek ve kalçalar avuç içi ile ayrı olacak şekilde yan yatması istenir. Swab probu 4-5 cm derinliğe kadar anüse sokulur ve eksen etrafında hafifçe döndürülerek anüs kriptlerinden materyal toplanır. Swab probunu dikkatlice çıkarın ve taşıma ortamına daldırın. Tamponun ortam olmadan taşınmasına izin verilmez.

Laboratuvarda dışkı örneklerinin aşılanması doğrudan yoğun ayırıcı tanı besin besiyerinde ve buna paralel olarak zenginleştirme besiyerinde gerçekleştirilir.

Dışkıların bakteriyolojik inceleme şeması, Şekil 3'te gösterilmektedir.

Şekil 3. Dışkı bakteriyolojik inceleme şeması

Şekil 3. Dışkı bakteriyolojik inceleme şeması

Doğal dışkılardan 1:5-1:10 oranında %0.9'luk bir sodyum klorür çözeltisi içinde bir süspansiyon hazırlanır, büyük parçacıkların çökmesi için 30 dakika bırakılır. Bundan sonra, süpernatantın bir damlası yoğun besleyici ortam içeren tabaklara aşılanır ve süspansiyonun 1 ml'si zenginleştirme ortamına aşılanır (malzeme-ortam oranı 1:5 olmalıdır).

Laboratuvara koruyucu (taşıma besiyeri) içinde teslim edilen dışkılar, aşılamadan önce besiyerinde iyice homojenize edilmelidir, ardından malzeme, doğal dışkı ile aynı oranlarda katı ortam ve zenginleştirme ortamına doğrudan aşılanır.

Rektal sürüntü ile toplanan dışkı örnekleri, koruyucu içinde verilen dışkıya benzer şekilde incelenir. Rektal sürüntünün doğal dışkıya göre daha az mikroorganizma içerdiği unutulmamalıdır, bu nedenle inokulum dozu artırılmalıdır.

Dışkıda S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B ve S. Paratyphi C'nin maksimum tespiti zenginleştirme ortamı kullanılarak elde edilir, ancak akut dönem hastalıklar, nedensel ajan genellikle doğrudan ekim ile izole edilir. Doğrudan aşılamaya paralel olarak zenginleştirme ortamına aşılama zorunludur!

Tüm aşılar 37 °C'de ayırıcı tanı besiyerinde 18-24 saat, bizmut-sülfit agarda 24-48 saat inkübe edilir.24 saat sonra zenginleştirme besiyerinden tohumlama katı besiyerinde (bizmut-sülfit agar veya Endo) gerçekleştirilir. orta). Yoğun ortam üzerinde büyütülen bu patojenlerin özelliği olan koloniler, bir polikarbonhidrat ortamı üzerinde taranır.

Malzemeyi yoğun ortamlı bir plakanın yüzeyine yayma tekniğinin, mikroorganizmanın kültürel özelliklerini görsel olarak değerlendirmek için kullanılabilecek tipik tipte izole kolonilerin büyümesini sağlaması gerektiğine dikkat edilmelidir.

Bizmut sülfit agar (BCA), S. Typhi'yi izole etmek için tercih edilen yöntemdir. Tipik S. Typhi kolonileri siyahtır ve metalik bir parlaklığa sahip siyah veya kahverengi bir kenarla çevrilidir. Bununla birlikte, S. Typhi, bol büyüme meydana geldiğinde ICA'nın karakteristik kararmasını sıklıkla üretmez, bu nedenle plakalar, tek koloni büyümesine izin vermek için aşılanmalıdır.

Dışkı örnekleri, Rusya Federasyonu'nda kullanım için onaylanmış enterobakteriler için standart seçici besiyerine aşılanabilir. Bununla birlikte, bizmut sülfit agar, S. tymhi'yi izole etmek için tercih edilen yöntemdir. Kültürlerin enzimatik özellikler ve serolojik özelliklerle daha fazla tanımlanması süreci, ilgili bölümlerde daha ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

10. İdrarın bakteriyolojik muayenesi

Hastalığın ilk günlerinden hastanın taburculuğuna kadar tanı için ve bakteriyotaşıyıcıyı belirlemek için idrar kültürü yapılır. Patojenin idrarda tifo ve paratifo atılımı periyodik olarak ve kısa süreli olduğu için 5-7 gün aralıklarla idrar tahlillerinin tekrarlanması gerekir.

Kesinlikle uyulmalıdır Genel kurallar MU 4.2.2039-05'te belirtilen idrar toplama. İdrar alma yöntemi ne olursa olsun 2 saat içinde laboratuvara teslim edilmelidir.Aşırı durumlarda idrar buzdolabında bir gece saklanabilir.

bağlı olduğu unutulmamalıdır. kimyasal bileşim idrar, içindeki bakteriler depolama sırasında hem ölebilir hem de çoğalabilir.

Malzemenin raf ömründeki bir artış, sonucun yorumlanmasını son derece zorlaştırabilir.

İdrarın (veya santrifüjden sonra tortunun) doğrudan aşılanması, tifo ve paratifoid patojenler dahil olmak üzere salmonella için önerilen yoğun ayırıcı tanı ortamlarında SSCB Sağlık Bakanlığı N 535'in sırasına göre önceden zenginleştirmeden gerçekleştirilir. Aynı zamanda, doğal idrar 1:1 oranında çift konsantrasyonlu zenginleştirme ortamına aşılanır veya idrar tortusu normal konsantrasyonlu ortama aşılanır. İnokülasyonlar, 18-24 saat boyunca 37 °C'de bir termostata yerleştirilir ve ardından zenginleştirme ortamı, yoğun ayırıcı tanı ortamına aşılanır. Katı besiyerinde yetiştirilen koloniler, kültürel-enzimatik ve serolojik özelliklerle tanımlanır.

11. Safranın bakteriyolojik muayenesi (duodenal içerik)

Safra, MU 4.2.2039-05'e göre A, B, C kısımlarında ayrı ayrı üç steril test tüpünde veya steril tek kullanımlık kaplarda toplanır ve laboratuvara teslim edilir.

Her porsiyonu (A, B, C) ayrı ayrı inceleyin veya üç porsiyonluk bir karışım hazırlayın. Örnekler aşılanır:

0,5 ml miktarında yoğun ayırıcı tanı ortamlarında (ICA, Endo, EMS, vb.);

1:10 oranında besin suyu içeren bir test tüpünde (şişede). Safrayı zenginleştirme ortamına aşılamaya gerek yoktur, çünkü safranın kendisi tifo ve paratifo patojenleri için iyi bir üreme alanıdır.

Aşılanmış ortam, 37°C'de safra kalıntıları ile inkübe edilir.

18-24 saat sonra yoğun besleyici besiyerinde inokülasyonlar incelenir (24 ve 48 saat sonra ICA üzerindeki büyüme sonuçları dikkate alınır) ve şüpheli kolonilerin bir polikarbonhidrat besiyerinde yeniden tohumlanması yapılır.

Besin suyundan, yoğun ayırıcı tanı ortamlarında tohumlamalar yapılır.

Kalan safradan durumda olumsuz sonuç doğrudan tohumlama yoğun ayırıcı tanı ortamında 18-24 saat sonra ve 3, 5, 7 ve 10. günlerde tekrarlanır.

Yetiştirilen mikroorganizmalar kültürel-morfolojik, enzimatik ve serolojik özelliklerle tanımlanır.

12. Roseola materyalinin bakteriyolojik muayenesi

Bakteriyolojik inceleme (roseola ile "kazıma"), iyi tanımlanmış roseola varlığında gerçekleştirilir. Malzeme aseptik olarak toplanır. Bunu yapmak için, roseola'nın üzerindeki cilt bölgesi% 70 ile tedavi edilir. etil alkol ardından %0.9'luk steril sodyum klorür solüsyonuyla nemlendirilmiş pamuklu bir bezle silin ve steril bir bezle kurulayın.

Araştırma için malzeme (doku sıvısı), bir neşter ile roseola üzerindeki deriyi kazıyarak elde edilir. 1-2 damla safra suyu veya izotonik sodyum klorür solüsyonu hasarlı cilde uygulanır, çıkıntı yapan doku sıvısı ile karıştırılır ve Pasteur pipeti veya benzeri tek kullanımlık steril bir cihaz ile sıvı zenginleştirme besiyerlerinden (safra) biri ile bir test tüpünde toplanır. et suyu, Rapoport besiyeri, vb.). Laboratuvarda aşılama 37 °C'de 18-24 saat tutulur, ardından yoğun ayırıcı tanı ortamlarında (Endo, EMS, ICA) aşılama yapılır.

13. Kemik iliğinin bakteriyolojik muayenesi

Tifo ateşi tanısının laboratuvar tarafından doğrulanması durumunda en etkilisinin kemik iliğinin bakteriyolojik incelemesi olduğu iyi bilinmektedir (patojenin aşılanması %90-95'tir). Hafif ve silinmiş tifo formları olan hastalarda bile, klinik olarak tanınması zor ve ayrıca antimikrobiyal ilaçların arka planına karşı, miyelokültürlerin aşılanması kan kültürlerinden önemli ölçüde daha yüksektir.

Ancak pratikte, kemik iliğinin bakteriyolojik incelemesi çok nadiren, sadece özel durumlarda yapılır. klinik belirtiler, tifo ateşi veya paratifo ateşi tanısını doğrulayan diğer laboratuvar verilerinin yokluğunda, tk. Bugün nasılsın istila girişimi oldukça travmatik. Araştırma için materyal örneklemesi, yalnızca uygun bir uzmanın bulunduğu bir hastanede gerçekleştirilir.

0,50-0,75 ml miktarındaki bakteriyolojik inceleme materyali (aspirat), sternum (sap veya gövde) delinerek aseptik olarak elde edilir ve zenginleştirme ortamlarından biri (safra suyu, Rapoport besiyeri, vb.) ile bir test tüpüne aşılanır.

Aspirat, delme işleminden hemen sonra zenginleştirme ortamına aşılanamazsa, steril bir tüpte toplanır ve hemen zenginleştirme ortamına aşılamanın yapıldığı laboratuvara gönderilir. Laboratuvarda, aşılar 37 °C'de 18-24 saat süreyle inkübe edilir, ardından yoğun ayırıcı tanı ortamlarında aşılama yapılır.

Diğer biyolojik materyallerin bakteriyolojik incelemesinde olduğu gibi daha fazla araştırma yapılır.

14. Besin ortamı ve reaktifler

Patojenlerin izolasyonu ve tanımlanması için kültür ortamı listesi bağırsak enfeksiyonları, özellikle Enterobacteriaceae, kapsamlıdır ve istikrarlı bir şekilde genişlemektedir. Belirli ortamların seçimi büyük ölçüde yerel ekonomik koşullar ve gelenekler tarafından belirlenir. Ancak, birkaç temel ilke tarafından yönlendirilmelidir.

14.1. Kültür ortamının tanımı, sadece Salmonella tespiti için değil, aynı zamanda Salmonella Typhi ve S. Paratyphi A, B ve C için de kullanılabileceğini belirtmelidir.

14.2. Doğrudan laboratuvarda hazırlanan besiyerleri yerine, saygın üreticilerin susuz kültür besiyerleri tercih edilmelidir.

14.3. Laboratuardaki her kültür ortamı partisi, test suşları tarafından kontrol edilmelidir (dahili kalite kontrol).

14.4. Tifo ve paratifoid hastalıklarının laboratuvar teşhisi ve bakteri taşıyıcılarının tespiti için, belirlenen prosedüre uygun olarak Rusya Federasyonu topraklarında kullanımı onaylanmış besin ortamları ve reaktifler kullanılmalıdır.

15. Enzimatik özellikleri incelemek için yöntemler

Şu anda, tifo ve paratifoid patojenler de dahil olmak üzere Enterobacteriaceae familyasına ait mikroorganizmaların enzimatik aktivitesini incelemek için çeşitli yerli ve yabancı tanı test sistemleri geliştirilmiş, üretilmiş ve tescil edilmiştir (test tüpleri ve plakalarındaki en basit klasik Hiss besiyerinden otomatik analizörlere kadar) . Test sistemleri bir mikroorganizmayı bir cins düzeyinde tanımlamayı ve suşların enzimatik aktivitesinin özelliklerini tanımlamayı mümkün kılarsa, bunlar tifo ve paratifo ateşi patojenlerini tanımlamak için kullanılabilir. Test sistemleriyle çalışma prosedürü, kullanım talimatlarında ayrıntılı olarak açıklanmıştır ve kesinlikle takip edilmelidir.

16. Patojenlerin biyolojik özellikleri

Tifo ateşi ve paratifoid A, B ve C'nin etken maddeleri Enterobacteriaceae familyası, Salmonella cinsi, enterica türleri, alttür I (enterica)'ya aittir ve bu alt tür, tür, cins ve familyaya ait morfolojik, kültürel ve enzimatik özelliklere sahiptir.

Salmonella türü enterica cinsinin temsilcileri, tarihsel olarak, serovarların diğer bakterilerde olduğu gibi antijenik bir formülle değil, hastalık adlarıyla (insan veya hayvan), izole edildikleri ülke, şehir veya sokak adlarıyla tanımlandığı bir durum geliştirmiştir. vb. Bu tür adlarını düşünmek yanlıştır, çünkü taksonomik statüleri yoktur. Bununla birlikte, en yaygın Salmonella serovarlarının isimleri o kadar tanıdıktır ki, onları antijenik formüllerle değiştirmek neredeyse imkansızdır. Bu nedenle, modern Kaufman-White şemasında, tür tanımı yerine sadece enterika alt türü I'den Salmonella belirtilirken, serovarın adı kullanılır, ancak büyük harfle yazılır.

Böylece, tifo ateşi ve paratifo ateşinin etken maddelerinin tam isimleri aşağıdaki gibidir:

Salmonella enterica subsp. enterika serovar Typhi;

Salmonella enterica subsp. enterika serovar Paratyphi A;

Salmonella enterica subsp. enterika serovar Paratyphi B;

Salmonella enterica subsp. enterika serovar Paratyphi C

Genel uygulamada, isimlerin kısaltılmış versiyonlarını kullanmak mümkündür:

Salmonella ser. Typhi veya Salmonella Typhi veya S. Typhi;

Salmonella ser. Paratyphi A veya Salmonella Paratyphi A veya S. Paratyphi A;

Salmonella ser. Paratyphi B veya Salmonella Paratyphi B veya S. Paratyphi B;

Salmonella ser. Paratyphi C veya Salmonella Paratyphi C veya S. Paratyphi C

16.1. Kültürel ve morfolojik özellikler

Mobil gram negatif çubuklar sporlar ve kapsüller oluşturmaz, fakültatif anaeroblar sıradan besin ortamlarında iyi büyür.

Basit bir besleyici agarda - 1 mm'den fazla parlaklığa sahip nemli, pürüzsüz bir kenar ve pürüzsüz bir yüzeye sahip hafif dışbükey koloniler.

Ayırıcı tanı ortamlarında (farklılaştırıcı bir madde olarak laktoz içeren) - şeffaf, renksiz veya mavimsi ve bazen pembemsi veya koloni ortamının rengi (Endo, Ploskirev, EMS ve diğer benzer ortamlar).

SS-arape'de, ortası siyah olan orta renkli koloniler.

Bizmut-sülfit besiyerinde, izole edilmiş S. Typhi, S. Paratyphi B kolonileri, karakteristik metalik parlaklığa sahip siyahtır, koloninin altındaki besiyeri siyaha boyanmıştır. S. Paratyphi A kolonileri yeşilimsi, besiyerinin renginde açık, hassastır.

Et-pepton agar üzerindeki S. Paratyphi B (paratifoid B'nin etken maddesi) suşları, kolonilerin çevresi boyunca yükseltilmiş bir mukoid duvar oluşturabilir. Mahsuller oda sıcaklığında saklandığında 2-5 gün boyunca mukus şaftı gelişir. Bu belirti kalıcı ve tanısal değildir.

16.2. enzimatik özellikler

Enzimatik özelliklerin incelenmesi, Salmonella ve diğer enterobakterilerin tanımlanması ve incelenmesinde kullanılan bir dizi karbonhidrat, polihidrik alkol, amino asit ve diğer organik bileşiklerle ilgili olarak yürütülür. Kural olarak, pratik laboratuvarlarda, bağırsak bakteri ailesinin bir parçası olan ana cinsleri tanımlamak için az sayıda test kullanılır. Tifo ateşi ve paratifo A, B ve C'nin etken maddeleri de dahil olmak üzere Salmonella'nın enzimatik özelliklerinin özellikleri Tablo 2'de sunulmuştur.

Tablo 2

Tifo ateşi ve paratifoid A, B, C patojenlerinin enzimatik özellikleri

bir hata oluştu

Teknik bir hata nedeniyle ödeme tamamlanmadı, peşin hesabınızdan
yazılmamışlardı. Birkaç dakika beklemeyi deneyin ve ödemeyi tekrar yapın.