واکنش اتصال مکمل توضیحات، کاربرد. میکروبیولوژی با تکنیک تحقیقات میکروبیولوژیکی - واکنش تثبیت مکمل

(RSK) - سرول. واکنش مورد استفاده برای کمی سازیتثبیت مکمل Ab و Ag. اصل CSC این است که یک کمپلکس ایمنی خاص C اضافه شده به سیستم را به طور کامل یا جزئی جذب می کند. C به عنوان یک شاخص کمی برای اتصال C در نظر گرفته می شود. سیستم همولیتیک, همولیز یک ازدحام نشان دهنده عدم وجود کمپلکس ایمنی در سیستم تشخیصی است (RSK منفی)،تاخیر همولیز - برای حضور کمپلکس ایمنی (RSK مثبت).در RSC موارد زیر استفاده می شود: 1) در دمای 57 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه گرم می شود. s-ku، باید تازه، بدون ذرات معلق، سیتوتوکسین، C باشد. در آزمایش، بسته به تیتر تشخیصی RSK در بیماری مشکوک، معمولاً چندین مضرب از 2 رقت s-ki مصرف می کنند. 2) یک تشخیص برای فروش یا به طور ویژه برای RSK تهیه شده است. 3) C در دوز کاری که وقتی با Ag تیتر می شود برابر با تیتر C است و وقتی بدون Ag تیتر می شود 20-25٪ بیشتر از تیتر C است. 4) گلبول های قرمز گوسفند چندین بار با سالین شسته می شوند و یک سوسپانسیون 3٪ تهیه می شود. 5) اسید همولیتیک 3 برابر کمتر از تیتر نشان داده شده در برچسب رقیق می شود. همه 5 جزء در یک حجم (0.5 میلی لیتر یا 0.25 میلی لیتر) گرفته می شوند. تحقیقات به سیستم آزمایشی (تشخیصی) وارد می شود. s-ku، diagnosticum، S. کنترل ها آماده می شوند: s-ki - s-ku، C و محلول نمک (به جای Ag). diagnosticum - diagnosticum، C و محلول نمکی (به جای s-ki)؛ C-C و دو برابر حجم سالین. بدیهی است مثبت - ایمنی استاندارد s-ka، Ag، C؛ بدیهی است منفی - نرمال s-ka، Ar، C. لوله ها را تکان دهید و به مدت 45 دقیقه در یک ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار دهید. در همان زمان، یک سیستم همولیتیک با مخلوط کردن حجم های مساوی از یک سوسپانسیون 3٪ از گلبول های قرمز گوسفند و همولیتیک s-ki تهیه می شود و برای همان زمان در یک ترموستات انکوبه می شود. پس از ایجاد حساسیت، حجم دو برابری از سیستم همولیتیک (1 میلی لیتر یا 0.5 میلی لیتر) به تمام لوله های آزمایش و کنترل اضافه می شود. تمام لوله ها در یک ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد نگهداری می شوند تا زمانی که همولیز کامل در لوله های کنترل رخ دهد (حدود 30 تا 40 دقیقه). با روش کمی تنظیم واکنش، یک رقت یافت می شود، در کروم تاخیر همولیز حداقل 2+ (در تیتر تحقیق. S-ki) وجود دارد و آن را با تیتر تشخیصی بیماری در حال تشخیص مقایسه کنید. یک روش نیمه کمی با یک رقت s-ki (معمولاً 1:5) امکان تعیین میزان تاخیر در همولیز را با 4+، 3+، 2+ و بر این اساس، ارزیابی شدت واکنش را ممکن می سازد. . نتایج دقیق تر، یافتن تیتر s-ki نه با 100٪، بلکه با 50٪ همولیز است (نگاه کنید به. تعریف مکمل).گونه ای از تنظیم کمی RSK پیشنهاد شده است که در آن یک رقت s-ki گرفته می شود، اما چندین دوز C (1؛ 1.5؛ 2؛ 2.5؛ 3؛ 4). تمام اجزای دیگر در مقادیر مشابه استفاده می شوند. هنگام ارزیابی این واقعیت را در نظر داشته باشید که دوزهای C بیشتر به مطالعه متصل می شود. s-ka، بیشتر در آن است.

(منبع: واژه نامه اصطلاحات میکروبیولوژی)

ببینید "واکنش تثبیت مکمل" در سایر لغت نامه ها چیست:

واکنش تثبیت مکمل- RSK روش آزمایشگاهی. واژه نامه انگلیسی-روسی اصطلاحات اساسی در مورد واکسینولوژی و ایمن سازی. سازمان جهانیمراقبت های بهداشتی، 2009] موضوعات واکسینولوژی، ایمن سازی مترادف RSK EN تست تثبیت مکمل تستCFTCF ... کتابچه راهنمای مترجم فنی

واکنش پیوند مکمل- واکنش تثبیت مکمل، RSK، واکنش Bordet-Gangu [به نام بلگ. باکتری شناسان J. Bordet و O. Zhang (O. Gengou)، 1901]، یک واکنش سرولوژیکی بسیار خاص و بسیار حساس بر اساس ویژگی پیچیده ... ... دامپزشکی فرهنگ لغت دایره المعارفی

I تست تثبیت مکمل یک آزمایش سرولوژیکی است که برای تعیین یک آنتی ژن یا آنتی بادی، بر اساس ارزیابی مصرف (اتصال) مکمل توسط کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی استفاده می شود، به روش های تحقیق ایمونولوژیک مراجعه کنید. دوم…… دایره المعارف پزشکی

واکنش تثبیت مکمل

واکنش تثبیت مکمل- (RSK)، یک آزمایش سرولوژیکی بسیار حساس و اختصاصی که برای تشخیص بسیاری از بیماری های عفونی و انگلی حیوانات استفاده می شود. از دو فاز متوالی تشکیل شده است. در مرحله اول آنتی ژن با سرم آزمایش مخلوط شده و ... ... کشاورزی. فرهنگ لغت دایره المعارفی بزرگ

- (RSK؛ مترادف: واکنش Borde Zhangu، واکنش رد کمپلمان منسوخ، واکنش تثبیت الکسین منسوخ شده است.) یک روش تست سرولوژیکی بر اساس توانایی کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل برای اتصال به کمپلمان، که تشخیص داده می شود ... ... بزرگ فرهنگ لغت پزشکی

واکنش پیوند مکمل (CFR)- بسیار حساس و خاص سرولوژیکی واکنش مورد استفاده برای تشخیص عفونی و بیماری های تهاجمی از دو متوالی تشکیل شده است فاز. در مرحله اول، آنتی ژن با سرم آزمایش و مکمل (مجموعه ای از پروتئین ها ... ...) مخلوط می شود. فرهنگ دایره المعارف کشاورزی

- (منسوخ شده) به واکنش تثبیت مکمل مراجعه کنید ... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

واکنش رد مکمل- واکنش rus (g) تثبیت مکمل، واکنش (g) Borde Zhang. واکنش (g) انحراف مکمل. واکنش تثبیت الکسین (g) آزمون تثبیت مکمل fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa…… ایمنی و بهداشت شغلی. ترجمه به انگلیسی، فرانسوی، آلمانی، اسپانیایی

به واکنش تثبیت مکمل مراجعه کنید. (

تست تثبیت کمپلمان یکی از تست های سرولوژیکی سنتی است که برای تشخیص بسیاری از موارد استفاده می شود بیماری های ویروسیو همچنین اساس برخی از روش های دیگر برای تشخیص آنتی بادی های ضد ویروسی را تشکیل می دهد. اگرچه واکنش خنثی سازی، مهار هماگلوتیناسیون، هماگلوتیناسیون غیرمستقیم، آنزیم ایمونواسی نسبت به واکنش تثبیت کمپلمان از نظر حساسیت برتر است، اما، سادگی تکنیک، تشخیص زودهنگام آنتی بادی ها و تشخیص آنتی ژن های ویروسی که خاصیت هماگلوتینه کنندگی ندارند. آن را توضیح دهید کاربرد گستردهدر تحقیقات ویروس شناسی

به چنین چیزی نیاز ندارد درجه بالاغلظت و خلوص فراورده های آنتی ژنی که برای تعدادی دیگر از واکنش های ایمونولوژیکی ضروری هستند. علاوه بر این، ویژگی گروهی آنتی ژن های تثبیت کننده مکمل بسیاری از ویروس ها، استفاده از واکنش تثبیت مکمل را در تشخیص انبوه ممکن می سازد: این واکنش تفاوت سویه ها را نشان نمی دهد و در مطالعه روابط آنتی ژنی بین ویروس ها از ارزش خاصی برخوردار است.

نام خود تا حد زیادی منعکس کننده ماهیت روش است که از دو واکنش جداگانه تشکیل شده است. در مرحله اول، آنتی ژن ها و آنتی بادی ها در واکنش شرکت می کنند (یکی از این اجزا از قبل شناخته شده است)، و همچنین یک مکمل در مقدار تیتر شده. اگر آنتی ژن و آنتی بادی ها مطابقت داشته باشند، کمپلکس آنها به مکمل متصل می شود، که در مرحله دوم با استفاده از یک سیستم نشانگر (مخلوطی از گلبول های قرمز گوسفند و آنتی سرم برای آنها) شناسایی می شود. اگر مکمل در طول برهمکنش آنتی ژن و آنتی بادی ها متصل شود، لیز گلبول های قرمز گوسفند رخ نمی دهد (واکنش تثبیت مکمل مثبت). در یک واکنش تثبیت کمپلمان منفی، مکمل غیر متصل به همولیز کمک می کند، که برای قضاوت در مورد نتایج واکنش استفاده می شود.

اجزای اصلی واکنش تثبیت کمپلمان آنتی ژن ها (معروف یا قابل تشخیص)، آنتی بادی ها (آنتی سرم های شناخته شده یا سرم های آزمایشی)، مکمل، سرم همولیتیک و گلبول های قرمز قوچ هستند. سالین ایزوتونیک به عنوان رقیق کننده استفاده می شود سدیم کلرید(pH 7.2-7.4) یا محلول های بافر مختلف. آنتی ژن ها و سرم ها ممکن است ضد مکمل باشند، به عنوان مثال. توانایی جذب مکمل، که همولیز را به تاخیر می اندازد و نتیجه واکنش را مخدوش می کند.

آنتی ژن برای CSC ها از اندام های حیوانات آلوده، مایع آلانتوئیک یا آمنیوتیک جنین مرغ آلوده و همچنین مایع کشت پس از کشت ویروس ها در کشت های سلولی بافتی تهیه می شود. آماده سازی آنتی ژنی همیشه حاوی مقدار زیادی مواد بالاست از سلول های حیوانی یا کشت بافت است که می تواند نتایج واکنش را نیز مخدوش کند.

آنتی ژن های ویروسی حاصل غیرفعال می شوند، دوز کاری تعیین می شود و همچنین خواص ضد مکمل و همولیتیک. سپس آنتی ژن در حضور مکمل تیتر می شود.

دومین جزء اصلی در فرمولاسیون واکنش مکمل است. این اصطلاح به سیستم پیچیده ای از پروتئین ها و عوامل موجود در خون حیوانات و انسان ها اشاره دارد. به طور معمول، سرم خوکچه هندی در واکنش تثبیت کمپلمان استفاده می شود. فعالیت (تیتر) کمپلمان کمترین مقدار آن است که در حضور آن همولیزین باعث همولیز کامل سیستم همولیتیک مورد استفاده می شود.

برای شناسایی آنتی‌بادی‌های متصل‌کننده به ویروس‌ها، غیرفعال‌سازی اجباری سرم برای از بین بردن مکمل در دمای 560 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انجام می‌شود. سرم های حیوانات ایمن شده معمولاً به عنوان سرم های مرجع استفاده می شود. علاوه بر این، برای ایمن سازی، از آنتی ژن های ویروسی استفاده می شود که به طور کامل از ناخالصی های بافتی تمیز می شوند، زیرا در غیر این صورت یک واکنش غیر اختصاصی مشخص رخ می دهد.

یک جزء اجباری واکنش تثبیت کمپلمان، سیستم همولیتیک است که شامل گلبول های قرمز قوچ و سرم همولیتیک به دست آمده از ایمن سازی خرگوش ها با گلبول های قرمز قوچ است.

برای راه اندازی واکنش تثبیت کمپلمان، از اصلاحات زیر استفاده می شود: ریزروش واکنش تثبیت کمپلمان در میکروتیتر سیستم تاکاچی، واکنش تثبیت مکمل طولانی مدت، واکنش تثبیت غیرمستقیم کمپلمان، واکنش تثبیت کمپلمان در ژل. واکنش تثبیت کمپلمان به روش میکروقطره، واکنش تثبیت کمپلمان به صورت جامد.

اگرچه حساسیت واکنش تثبیت کمپلمان کم است، اما ویژگی بالایی دارد. در این راستا، به طور گسترده ای برای تشخیص پنوموآنتریت ویروسی در گاوهای جوان استفاده می شود.

تست تثبیت کمپلمان (CFT) یک تست سرولوژیکی است که از نظر حساسیت به روش های بارش، آگلوتیناسیون و خنثی سازی قابل مقایسه است. RSK روشی است که در آن از دو سیستم آنتی ژن-آنتی بادی استفاده می شود:

اولی خاص است.

دوم شاخص (همولیتیک) است.

5 جزء برای CSC مورد نیاز است: آنتی ژن قابل تشخیص، آنتی بادی های تشخیصی، آنتی ژن شاخص (گلبول های قرمز گوسفند)، آنتی بادی های شاخص (همولیزین های خرگوش)، مکمل.

برهمکنش خاص آنتی ژن و آنتی بادی با تثبیت کمپلمان همراه است. مجموعه حاصل از نظر بصری آشکار نمی شود. سیستم همولیتیک به عنوان یک شاخص استفاده می شود. سرم همولیتیک گلبول های قرمز را نسبت به عمل کمپلمان حساس می کند که در حضور آن لیز گلبول های قرمز (همولوز) رخ می دهد. اگر همولیز وجود نداشته باشد، مکمل توسط اولین سیستم محدود می شود، و بنابراین، آنتی ژن موجود در آن با آنتی بادی مطابقت دارد - یک پاسخ مثبت. اگر آنتی بادی با آنتی ژن مطابقت نداشته باشد، کمپلکس تشکیل نمی شود و مکمل، آزاد باقی می ماند، با سیستم دوم ترکیب می شود و باعث همولیز می شود - واکنش منفی است.

برای راه اندازی RSC، تمام اجزای واکنش آماده شده و قبل از آزمایش اصلی تیتر می شوند.

سرم (بیمار یا تشخیصی) در آستانه واکنش در یک حمام آب در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه گرم می شود تا مکمل خود را غیرفعال کند. برخی از سرم ها، به ویژه از حیوانات واکسینه شده، دارای خواص ضد مکمل هستند. توانایی اتصال مکمل در غیاب آنتی ژن همولوگ. ضد مکمل بودن با عمل آوری آنها با دی اکسید کربن، حرارت دادن در دمای 57-58 درجه سانتیگراد، انجماد یکباره در دمای -20 درجه سانتیگراد یا -70 درجه سانتیگراد و حذف رسوب توسط سانتریفیوژ، افزودن سرم مکمل در حجم سرم 1:10 و گرم کردن آن از بین می رود. پس از انکوباسیون در سرما به مدت 18 تا 20 ساعت برای جلوگیری از ضد مکمل بودن سرم ها به صورت لیوفیلیزه نگهداری می شوند و یا در دمای پایین منجمد می شوند.

کشت میکروارگانیسم های مختلف کشته شده، لیزات آنها، اجزای باکتری، اندام های آسیب شناختی و طبیعی، لیپیدهای بافتی، ویروس ها و مواد حاوی ویروس می توانند به عنوان آنتی ژن برای CSC عمل کنند. بسیاری از آنتی ژن های میکروبی به صورت صنعتی تولید می شوند. ضد مکمل بودن آنتی ژن ها با استفاده از روش هایی مانند ترمولیز (انجماد و ذوب چندگانه)، درمان با حلال های چربی (اتر، کلروفرم، استون)، الکل ها (متانول، اتانول) و غیره برطرف می شود.

به عنوان مکمل، سرم خوکچه هندی بلافاصله قبل از آزمایش استفاده می شود. مکمل خشک نیز ممکن است استفاده شود. برای به دست آوردن محلول پایه برای تیتراسیون بعدی، مکمل به نسبت 1:10 با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم رقیق می شود.

گلبول های قرمز گوسفند به شکل 3 سوسپانسیون در محلول ایزوتونیک کلرید سدیم استفاده می شوند. خون (100-150 میلی لیتر) گرفته می شود ورید گردنی، در یک شیشه استریل با دانه های شیشه ای قرار داده شده، با تکان دادن به مدت 10-15 دقیقه از فیبرینه خارج شده و از طریق 3-4 لایه گاز استریل برای حذف فیبرین فیلتر می شود. گلبول های قرمز 3 بار با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم شسته می شوند و آن را به رسوب گلبول قرمز به حجم اولیه خون اضافه می کنند. گلبول های قرمز را می توان به مدت 5-6 روز در دمای 4-6 درجه سانتی گراد نگهداری کرد. زمان ماندگاری گلبول های قرمز زمانی که با فرمالین حفظ می شوند افزایش می یابد.

سرم همولیتیک برای CSC به شرح زیر بدست می‌آید: خرگوش‌ها با تزریق 50% سوسپانسیون گلبول قرمز شسته شده در رگ گوش (1 میلی‌لیتر 4 تا 6 بار در روز) به داخل سیاهرگ گوش واکسینه می‌شوند. نمونه سرم 7 روز پس از آخرین تزریق گرفته می شود. اگر تیتر سرم کمتر از 1:1200 نباشد، خون ریزی انجام می شود. سرم به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتیگراد گرم می شود. برای جلوگیری از رشد باکتری، یک ماده نگهدارنده به سرم همولیتیک اضافه می شود (مرتیولات 1:10000 یا 1 اسید بوریک).

سیستم همولیتیک از سرم همولیتیک مخلوط شده در حجم های مساوی (در تیتر سه گانه) و 3 سوسپانسیون گلبول قرمز قوچ تشکیل شده است. برای حساس کردن گلبول های قرمز با همولیزین ها، این مخلوط به مدت 30 دقیقه در ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد نگهداری می شود.

تیتراسیون سرم همولیتیکسرم با ترکیب 0.5 میلی لیتر از آن (در رقت های 1:600، 1:1200، 1:1600، 1:3200 و غیره) با 0.5 میلی لیتر از 3 سوسپانسیون گلبول قرمز و 0.5 میلی لیتر مکمل تازه در رقت 1:10 تیتر می شود. . حجم مخلوط برای واکنش در لوله های آزمایش کنترل با افزودن محلول ایزوتونیک کلرید سدیم به 1.5 میلی لیتر تنظیم شد. نتایج واکنش پس از 1 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد در نظر گرفته می شود. تیتر سرم همولیتیک بالاترین رقت آن است که باعث همولیز کامل می شود. سرم به شکل لیوفیلیزه ذخیره می شود.

طرح تیتراسیون برای سرم همولیتیک

تیتراسیون مکملقبل از آزمایش، محلول پایه مکمل (1:10) در تعدادی لوله آزمایش از 0.05 تا 0.5 میلی لیتر ریخته می شود و به هر محلول ایزوتونیک کلرید سدیم اضافه می شود و حجم مایع را به 1.5 میلی لیتر می رساند. لوله ها به مدت 45 دقیقه در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرند، سپس یک سیستم همولیتیک به آنها اضافه می شود و به مدت 30 دقیقه در ترموستات نگهداری می شود و پس از آن تیتر مکمل تعیین می شود.

برای آزمایش، دوز کاری مکمل (حاوی 0.5 میلی لیتر) گرفته می شود که 20-30٪ بیشتر از تیتر است.

طرح تیتراسیون مکمل

ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 45 دقیقه

ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه

تیتراسیون آنتی ژنآنتی ژن های مورد استفاده برای CSC ممکن است مقداری مکمل را جذب کنند، به عنوان مثال. خاصیت ضد مکمل دارند. بنابراین، قبل از آزمایش، آنتی ژن ها در حضور دوز کاری مکمل تیتر می شوند. به میزان کمتر، خواص ضد مکمل در آنتی ژن های خاص تولید شده توسط تولید بیان می شود. تیتر آنها نه قبل از هر آزمایش، بلکه یک بار در ماه با در نظر گرفتن احتمال کاهش آن در طول ذخیره سازی تعیین می شود.

برای تعیین تیتر آنتی ژن، آن را به مقدار کاهشی از 0.5 تا 0.05 میلی لیتر در تعدادی لوله آزمایش ریخته و با افزودن محلول کلرید سدیم، حجم موجود در آنها را به 1 میلی لیتر می رساند. سپس 0.5 میلی لیتر از دوز کاری مکمل به هر لوله آزمایش اضافه می شود و به مدت 1 ساعت در ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرد. پس از آن، 1 میلی لیتر از سیستم همولیتیک به تمام لوله های آزمایش اضافه می شود، آنها دوباره به مدت 1 ساعت در ترموستات انکوبه می شوند و نتایج واکنش در نظر گرفته می شود.

تیتر آنتی ژن کمترین مقداری است که در آن همولیز کامل رخ می دهد. برای CSC از دوز کاری آنتی ژن استفاده می شود که تقریباً 1/2-1/3 تیتر است. آنتی ژن هایی که در حضور آنها تیتر کمپلمان بیش از 30 درصد کاهش می یابد برای واکنش نامناسب هستند.

طرح تیتراسیون آنتی ژن

ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت

ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت

انجام تجربه اصلی RSC.حجم کل اجزای واکنش 2.5 میلی لیتر، حجم دوز کاری هر یک از آنها 0.5 میلی لیتر است. سرم در رقت مناسب، آنتی ژن و مکمل به لوله اول، سرم در رقت مناسب، مکمل و محلول کلرید سدیم ایزوتونیک (کنترل سرم) به لوله دوم، آنتی ژن، مکمل و محلول ایزوتونیک کلرید سدیم (کنترل آنتی ژن) وارد می شود. لوله سوم در همان زمان، یک سیستم همولیتیک با مخلوط کردن 2 میلی لیتر سرم همولیتیک در یک تیتر سه گانه (نسبت به آنچه در دستورالعمل مشخص شده است) و سوسپانسیون 3٪ از گلبول های قرمز گوسفند (در رابطه با حجم اولیه خون) تهیه می شود. لوله ها به مدت 1 ساعت در ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد نگهداری می شوند، سپس 1 میلی لیتر از سیستم همولیتیک (سیستم دوم) به 3 لوله اول (سیستم اول) اضافه می شود. پس از مخلوط کردن کامل مواد، لوله های آزمایش دوباره به مدت 1 ساعت در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرند.

طرح انجام آزمایش اصلی RSC

ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت

ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت

نتایج واکنش به طور اولیه - پس از خارج کردن لوله های آزمایش از ترموستات و در نهایت - پس از نگهداری 15-18 ساعت در یخچال یا در دمای اتاق در نظر گرفته می شود.

در شمارش نهایی، شدت واکنش به صورت مثبت بیان می شود: (++++) - یک واکنش به شدت مثبت، که با تاخیر کامل در همولیز مشخص می شود (مایع موجود در لوله آزمایش بی رنگ است، همه گلبول های قرمز در پایین قرار می گیرند. ) (+++، ++) - یک واکنش مثبت، که با افزایش رنگ مایع به دلیل همولیز و کاهش تعداد گلبول های قرمز در رسوب ظاهر می شود. (+) - واکنش ضعیف ضعیف (مایع به شدت رنگی است، مقدار کمی گلبول قرمز در انتهای لوله وجود دارد). در واکنش متقابل(-) همولیز کامل مشاهده می شود، مایع موجود در لوله آزمایش دارای رنگ صورتی شدید (خون لاکی) است.

تعدادی از اصلاحات RSC پیشنهاد شده است که با افزایش حساسیت و مقدار کمتری از مواد استفاده شده مشخص می شود. بنابراین، به عنوان مثال، در مطالعات ویروس شناسی، حجم مواد تشکیل دهنده برای CSC در سرما 1 میلی لیتر است. برای RSC قطره ای، 1 قطره سرم + 1 قطره آنتی ژن + 1 قطره مکمل + 2 قطره از سیستم همولیتیک مصرف کنید.

واکنش اتصال تعارف گسترده ترین توزیع را در تشخیص میکروبیولوژیکی و سرولوژیکی پیدا کرده است.

با کمک RSK، آنتی بادی های تثبیت کننده مکمل در سرم خون بیماران مبتلا به سیفلیس، غدد، سوزاک مزمن، ریکتزیوز، بیماری های ویروسی و غیره شناسایی می شود.

RSC مورد توجه ویژه ای برای ایمونولوژی بالینی است. این واکنش برای جداسازی زیرجمعیت‌های مختلف لنفوسیت‌ها، شناسایی آنتی‌ژن‌های HLA روی پلاکت‌ها، لنفوبلاست‌های پیوندی، فیبروبلاست‌ها، سلول‌های تومور و آنتی‌ژن‌های اختصاصی پلاکت و همچنین آنتی‌بادی‌های مربوطه استفاده می‌شود.

واکنش تثبیت مکمل ، RSK، واکنش Bordet-Gangu [به نام بلگ. باکتری شناسان J. Bordet و O. Zhangu (O. Gengou)، 1901]، یک واکنش سرولوژیکی بسیار خاص و بسیار حساس بر اساس خاصیت کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی برای تثبیت مکمل آزاد ()، مورد استفاده در تشخیص بسیاری از باکتری ها و ویروسی و برخی از بیماری های تک یاخته ای و کرمی، و همچنین برای مطالعه فرآیندهای همراه با تغییر در مقدار آنتی ژن یا آنتی بادی. CSC در 2 مرحله انجام می شود: 1) برهمکنش آنتی بادی ها، آنتی ژن و مکمل، در نتیجه مکمل آزاد توسط کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی تشکیل شده (فاز خاص) متصل می شود. 2) نشانه واکنش حساس شده توسط گلبول های قرمز (فاز غیر اختصاصی). در RSC، 2 سیستم استفاده می شود: یک سیستم باکتریولوژیکی خاص، متشکل از یک آنتی بادی (سرم آزمایش شده)، آنتی ژن و مکمل، و همچنین یک سیستم "شاخص" غیر اختصاصی حاوی همولیزین (سرم همولیتیک) و یک سوسپانسیون گلبول های قرمز قوچ. یک آنتی ژن فقط در حضور مکمل به آنتی بادی متصل می شود. اگر سرم آزمایش حاوی آنتی بادی های همولوگ با آنتی ژن گرفته شده باشد، مکمل موجود در مخلوط واکنش دهنده توسط کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل جذب می شود و توانایی لیز گلبول های قرمز حساس را از دست می دهد، یعنی بدون مکمل، همولیزین (آنتی بادی همولیتیک) این کار را انجام می دهد. گلبول های قرمز را از بین نبرد (واکنش مثبت). در مواردی که رابطه خاصی بین آنتی ژن و آنتی بادی های سرم آزمایش وجود نداشته باشد، کمپلکس تشکیل نشده و مکمل در حالت آزاد باقی می ماند. هنگام افزودن یک سیستم همولیتیک در این مورد، مکمل غیر متصل باعث همولیز گلبول های قرمز حساس شده (واکنش منفی) می شود. گزینه های مختلفی برای مرحله بندی RSK وجود دارد: روش کلاسیک مرحله بندی به شکل ماکرو و ریز متغیرها، واکنش تثبیت مکمل طولانی مدت (RDSK) در سرما، روش RSK کمی با توجه به همولیز 50 درصد گلبول های قرمز حساس، و غیره در عمل تشخیص دامپزشکی، روش کلاسیک RSK اغلب به شکل یک ماکرو واریانت استفاده می شود، که در آن هر جزء در 0.5 یا 0.25 میلی لیتر در یک تیتر کاری خاص گرفته می شود. کمپلمان در یک سیستم باکتریولوژیکی روی سرم‌های همان گونه‌های جانوری که خون آنها باید بررسی شود، تیتر می‌شود. سرم های آزمایش معمولاً در رقت های 1:5 و 1:10 با آنتی ژن و 1:5 بدون آنتی ژن (شاهد) بررسی می شوند. زمان اتصال مکمل در فاز خاص 20 دقیقه، زمان واکنش همولیز در فاز غیر اختصاصی 20 دقیقه در تی 37-38 درجه سانتیگراد. برای تشخیص تعدادی از بیماری ها از روش حساس تری استفاده می شود - RDSC. در این حالت، مرحله اول واکنش در ساعت انجام می شود تی 4-6 درجه سانتیگراد به مدت 18-16 ساعت که منجر به افزایش جذب کمپلمان توسط مقادیر کمی آنتی ژن و آنتی بادی می شود. سپس سیستم همولیتیک اضافه می شود و واکنش ادامه می یابد تی 37-38 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه. نتایج RSK و RDSK با درجه تأخیر همولیز در نظر گرفته می شود که با ضربدر یا منفی نشان داده می شود که مربوط به درصدهای زیر همولیز گلبول قرمز است: ++++ از 0 تا 10٪. +++ از 10 تا 40 درصد؛ ++ از 40 تا 70 درصد؛ + 70 تا 90 درصد؛ - از 90 تا 100٪. قانون دامپزشکی دستورالعمل های ویژه ای را برای فرمولاسیون، ثبت و ارزیابی RSK و RDSK برای هر بیماری به طور جداگانه ارائه می کند.

ادبیات:
تحقیقات آزمایشگاهی در دامپزشکی، م.، 1971;
راهنمای ایمونولوژی، ویرایش. O. E. Vyazova و Sh. K. Khodzhaeva. مسکو، 1973.

فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی. - م.: "دایره المعارف شوروی". سردبیر ارشد V.P. شیشکوف. 1981 .

ببینید "" در سایر لغت نامه ها چیست:

واکنش تثبیت مکمل- (RSK) سرول. واکنشی که برای تعیین کمیت Ab و Ag تثبیت کننده مکمل استفاده می شود. اصل RSK این است که یک کمپلکس ایمنی خاص C اضافه شده به سیستم را به طور کامل یا جزئی جذب می کند. فرهنگ لغت میکروبیولوژی

واکنش تثبیت مکمل- روش آزمایشگاهی RSK. واژه نامه انگلیسی-روسی اصطلاحات اساسی در مورد واکسینولوژی و ایمن سازی. سازمان بهداشت جهانی، 2009] موضوعات واکسینولوژی، ایمن سازی مترادف RSK EN تست تثبیت مکمل تستCFTCF ... کتابچه راهنمای مترجم فنی

واکنش تثبیت مکمل- I تست تثبیت مکمل یک آزمایش سرولوژیکی که برای تعیین آنتی ژن یا آنتی بادی استفاده می شود، بر اساس ارزیابی مصرف (اتصال) کمپلمان توسط کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی، به روش های تحقیق ایمونولوژیک مراجعه کنید. دوم…… دایره المعارف پزشکی

واکنش تثبیت مکمل- واکنش rus (g) تثبیت مکمل، واکنش (g) Borde Zhang. واکنش (g) انحراف مکمل. واکنش تثبیت الکسین (g) آزمون تثبیت مکمل fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa……

واکنش تثبیت مکمل- (RSK)، یک آزمایش سرولوژیکی بسیار حساس و اختصاصی که برای تشخیص بسیاری از بیماری های عفونی و انگلی حیوانات استفاده می شود. از دو فاز متوالی تشکیل شده است. در مرحله اول آنتی ژن با سرم آزمایش مخلوط شده و ... ... کشاورزی. فرهنگ لغت دایره المعارفی بزرگ

واکنش تثبیت مکمل- (RSK؛ مترادف: واکنش Borde Zhangu، واکنش رد کمپلمان منسوخ، واکنش تثبیت الکسین منسوخ شده است.) یک روش تست سرولوژیکی بر اساس توانایی کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل برای اتصال به کمپلمان، که تشخیص داده می شود ... ... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی- واکنش rus (g) تثبیت مکمل، واکنش (g) Borde Zhang. واکنش (g) انحراف مکمل. واکنش تثبیت الکسین (g) آزمون تثبیت مکمل fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa…… ایمنی و بهداشت شغلی. ترجمه به انگلیسی، فرانسوی، آلمانی، اسپانیایی

واکنش اتصال مکمل- واکنش تثبیت مکمل را ببینید. (

تست تثبیت کمپلمان (CFR) و واکنش تثبیت طولانی مدت کمپلمان (RDSC)

واکنش پیوند مکمل (RSK) و واکنش باندینگ مکمل بلند مدت (RDSK)

واکنش پیوند مکمل، RSK، واکنش Bordet-Jangu [از طرف باکتری شناسان J. Bordet و O. Gengou، 1901]، سرولوژیکی بسیار اختصاصی و بسیار حساس. واکنشی مبتنی بر ویژگی کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی برای تثبیت مکمل آزاد.

مکمل (سیستم مکمل) (از lat.complementum - افزودن)، گروهی از پروتئین های کروی در سرم خون حیوانات و انسان ها که بخشی از سیستم ایمنیارگانیسم هنگامی که باکتری ها یا ویروس های آلوده کننده به بدن وارد می شوند، برخی از سموم یا ظاهر سلول های تبدیل شده خود، مکمل فعال می شود که در نتیجه سلول های هدف لیز (از بین می روند) و سموم و ویروس ها خنثی می شوند. بنابراین سیستم کمپلمان به همراه ماکروفاژها به عنوان مرز دفاعی بدن در نظر گرفته می شود.

این واکنش به طور گسترده ای در شناسایی آنتی ژن ها و در تشخیص سروصدایی عفونت ها، به ویژه بیماری های ناشی از اسپیروکت ها (واسرمان واکنش)، ریکتزیا و ویروس ها استفاده می شود.

RSK یک واکنش سرولوژیکی پیچیده است. این شامل مکمل و دو سیستم آنتی ژن-آنتی بادی است. در اصل، این دو واکنش سرولوژیکی هستند.

سیستم اول - اصلی - شامل یک آنتی ژن و یک آنتی بادی است (یکی شناخته شده است، دیگری شناخته شده نیست). مقدار مشخصی مکمل به آن اضافه می شود. زمانی که آنتی ژن و آنتی بادی این سیستم با هم مطابقت داشته باشند، مکمل را به هم متصل کرده و متصل می کنند. کمپلکس حاصل به خوبی پراکنده شده و قابل مشاهده نیست.

تشخیص سرمی واکنش تثبیت مکمل

تشکیل این کمپلکس با کمک یک سیستم همولیتیک یا اندیکاتور دوم شناخته می شود. این شامل گلبول های قرمز گوسفند (آنتی ژن) و سرم همولیتیک مربوط به آنها (آنتی بادی)، یعنی. کمپلکس ایمنی آماده در این سیستم، لیز گلبول های قرمز تنها در حضور مکمل می تواند رخ دهد. اگر مکمل به سیستم اول متصل شود (اگر آنتی ژن و آنتی بادی در آن مطابقت دارند)، در سیستم دوم همولیز وجود نخواهد داشت - زیرا مکمل آزاد وجود ندارد. عدم وجود همولیز (محتویات لوله کدر است یا رسوب گلبول های قرمز در انتهای لوله وجود دارد) به صورت ثبت می شود. نتیجه مثبت RSK.

اگر در سیستم اول آنتی ژن با آنتی بادی مطابقت نداشته باشد، کمپلکس ایمنی تشکیل نمی شود و مکمل آزاد می ماند. در صورت آزاد ماندن، مکمل در سیستم دوم درگیر می شود و باعث همولیز می شود - نتیجه RSC منفی است (محتویات لوله ها شفاف هستند - "خون لاک").

اجزای واکنش تثبیت کمپلمان:

1. آنتی ژن - معمولا یک لیز، عصاره، هاپتن. کمتر تعلیق میکروارگانیسم ها

2. آنتی بادی – سرم بیمار

3. مکمل - سرم خوکچه هندی

4. آنتی ژن - گلبول های قرمز گوسفند سیستم همولیتیک

5. آنتی بادی - همولیزین به گلبول های قرمز گوسفند

6. محلول ایزوتونیک

آماده سازی مواد تشکیل دهنده

1. سرم 3 برابر کمتر از تیتر آن رقیق می شود. یک رقت کل سرم برای کل آزمایش تهیه کنید که حجم آن با ضرب حجم سرم در یک لوله (مثلاً 0.5 میلی لیتر) در تعداد لوله ها کمی بیشتر از تعداد آنها در آزمایش تعیین می شود. مایع اضافی در تهیه تمام اجزای واکنش ضروری است: بخشی از آن روی دیواره های لوله های آزمایش، فلاسک ها، پیپت ها باقی می ماند. حجم های همولیزین رقیق شده و سوسپانسیون گلبول های قرمز، افزودن سرم به گلبول های قرمز، کاملاً مخلوط شده و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد (حساس می شود).

2. گلبول های قرمز گوسفند. یک سوسپانسیون 3% از گلبول های قرمز شسته شده گوسفند برای کل تعداد لوله های آزمایش در آزمایش تهیه می شود. برای تهیه یک سیستم همولیتیک، 30 دقیقه قبل از وارد شدن به آزمایش، حجم مساوی از گلبول های قرمز قوچ با آنتی بادی برای آنها مخلوط می شود.

3. مکمل معمولاً 1:10 رقیق می شود قبل از هر آزمایش باید تیتر شود. تیتر کمپلمان کمترین مقدار آن است، وقتی به سیستم همولیتیک اضافه شود، همولیز کامل در عرض 1 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد رخ می دهد.

4. آنتی ژن معمولا به صورت آماده با نشان دادن تیتر آن دریافت می شود. مقداری که پس از رقیق شدن آنتی ژن باید در 1 میلی لیتر باشد. به عنوان مثال، در تیتر 0.4، آن را در 0.96 میلی لیتر محلول ایزوتونیک رقیق می کنند. در تجربه مقدار آنتی ژن را معادل نصف تیتر (0.5 میلی لیتر) مصرف کنید. این دوز کاری اوست. با ضرب 0.5 میلی لیتر در تعداد لوله های آزمایش، یک رقت کامل آنتی ژن برای کل آزمایش آماده کنید.

5. آنتی بادی – سرم بیمار. سرم تازه قبل از آزمایش غیرفعال می شود تا مکمل موجود در آن از بین برود. برای انجام این کار، آن را به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتیگراد در یک حمام آب یا در یک غیرفعال کننده با ترموستات گرم می کنند. روش دوم ترجیح داده می شود: احتمال گرم شدن بیش از حد را از بین می برد

بیانیه واکنش تثبیت کمپلمان (RSC).

واکنش را در حجم 1 مکعب قرار می دهند. سانتی متر (0.2 سانتی متر مکعب از هر جزء).

سرم های آزمایش در رقت 1: 5 و 1: 10 (دوز سرم 0.04 سی سی و 0.02 سی سی با آنتی ژن خاص، در رقت 1: 5 با آنتی ژن کنترل (برای ویژگی) و بدون آنتی ژن (برای ضد مکملی).

سرم های آزمایش و شاهد در روز واکنش به صورت رقیق شده در دمای 65-56 درجه سانتی گراد (بسته به نوع حیوان) به مدت 30 دقیقه غیرفعال می شوند. (همچنین در RDSC).

هر دو مرحله واکنش در یک حمام آب در دمای 37-38 درجه سانتیگراد انجام می شود، سیستم باکتریولیتیک به مدت 60 دقیقه نگه داشته می شود، مرحله دوم واکنش (با سیستم همولیتیک) 20 دقیقه است.

کنترل های تجربه اصلی RSK:

سرم مثبت رقیق شده 1:5 بدون آنتی ژن و با آنتی ژن کنترل. در رقت های 1: 5 تا تیتر آن با یک آنتی ژن خاص.

سرم منفی در رقت های 1: 5 و 1: 10 با آنتی ژن اختصاصی، در رقت 1: 5 با آنتی ژن کنترل و بدون آنتی ژن - آنتی ژن های اختصاصی و کنترل در دوز دو برابر - برای ضد مکمل (کمپلمان +) و برای سمیت خونی (مکمل) )

سیستم همولیتیک برای سمیت خون (مکمل).

حسابداری برای نتایج حتی نباید اثری از همولیز در کنترل ها وجود داشته باشد، زیرا یکی از آنها مکمل ندارد، در حالی که دیگری حاوی همولیزین نیست. کنترل ها نشان دهنده عدم وجود واکنش های هموتوکسیسیته (توانایی لیز خود به خودی گلبول های قرمز) در اجزاء هستند.

در آزمایش، فعالیت مکمل ممکن است به دلیل جذب غیر اختصاصی آن توسط سایر اجزای واکنش کاهش یابد، بنابراین، برای آزمایش، مقدار مکمل افزایش می یابد: دوز زیر تیتر گرفته می شود. این دوز کار است.

گزینه های مختلفی برای اجرای RSC وجود دارد: کلاسیک. روش تنظیم در قالب ماکرو و میکرو، واکنش تثبیت طولانی مدت مکمل (RDSC) در سرما، روش مقادیر. RSC توسط 50% همولیز گلبول های قرمز حساس و غیره. برای تشخیص تعدادی از بیماری ها از روش حساس تری استفاده می شود - RDSC.

بیانیه واکنش تثبیت طولانی مدت کمپلمان (RDSC).

مرحله اول واکنش در یخچال با دمای 2-6 درجه سانتیگراد به مدت 16-18 ساعت، مرحله دوم در حمام آب به مدت 20 دقیقه در دمای 37-38 درجه سانتیگراد انجام می شود.

مکمل در رقت کاری 1:25 یا 1:30 (هنگام تعیین رقت کاری آن) استفاده می شود.

در روز اول، سرم و آنتی ژن برای آزمایش اصلی بطری می شوند. واکنش را در حجم 1 مکعب قرار می دهند. سانتی متر (0.2 سانتی متر مکعب از هر جزء). کنترل های RDSC مانند تنظیمات RSC هستند.

سپس، مکمل 0.2 مس. سانتی متر، بسته به رقت کاری آن، لوله های آزمایش را تکان داده و به مدت 16-18 ساعت در یخچال قرار می دهند. در 2-6 درجه سانتیگراد

روز بعد قفسه ها با فاز اول از یخچال خارج می شوند و بعد از 20-30 دقیقه نگهداری می شوند. در دمای اتاق، سیستم همولیتیک در دوز (در مثال داده شده، 0.6 سانتی متر مکعب) در تمام لوله های آزمایش ریخته می شود. قفسه ها تکان داده می شوند و به مدت 20 دقیقه در یک حمام آب قرار می گیرند. در 37-38 درجه سانتیگراد.

طرح آزمایش اصلی RDSC در جدول 3 ارائه شده است.

با محاسبه نتایج RSC، RDSC دو بار انجام می شود: بار اول - بلافاصله پس از حمام آب، دوم - پس از نشستن گلبول های قرمز در انتهای لوله آزمایش (3-4 ساعت پس از حمام آب) یا دفعه بعدی. روزی که در یخچال از 2 تا 6 درجه سانتی گراد نگهداری شود.

برای تعیین عینی نتایج واکنش، ارزیابی درصد همولیز توصیه می شود. برای این کار 5 لوله با همولیز کامل (100%) از واکنش انتخاب شده و مایع حاصل از آنها در یک لوله ریخته می شود. رقت هایی با درصد همولیز کمتر از آن تهیه می شود که اصطلاحاً به آن مقیاس «استاندارد» می گویند.

درجه همولیز در لوله های آزمایش با سرم های آزمایش با مقایسه با درجه همولیز در لوله های "استاندارد" تعیین می شود و درصد همولیز به صورت ضربدری بیان می شود.

میزان تأخیر با درصد همولیز گلبول قرمز نسبت معکوس دارد:

++++ (4 تلاقی) - بدون همولیز، مایع رویی شفاف، بی رنگ.

+++ (3 تلاقی) - همولیز 25٪ از گلبول های قرمز.

++ (2 تلاقی) - همولیز 50٪ از گلبول های قرمز.

+ (1 متقاطع) - همولیز 75٪ از گلبول های قرمز.

(منهای) - همولیز کامل گلبول های قرمز، بدون رسوب، مایع به شدت با هموگلوبین رنگ آمیزی می شود.

ارزیابی نتایج RSK, RDSK.

سرم های آزمایش در رقت های 1: 5 و 1: 10 (0.04 سی سی، 0.02 سی سی) با همولیز کامل گلبول های قرمز در سرم شاهد بدون آنتی ژن و با آنتی ژن کنترل ارزیابی می شوند.

واکنش مثبت زمانی ارزیابی می شود که همولیز گلبول های قرمز با 3-4 تلاقی در رقت 1: 10 به تاخیر بیفتد.

مشکوک - با تأخیر در همولیز گلبول های قرمز با 1 متقابل در رقت سرم 1: 10 و از 2 تا 4 تلاقی در رقت 1: 5.

منفی - با همولیز کامل گلبول های قرمز در رقت های سرم 1: 5 و 1: 10.