Reacția de fixare a complementului. Descriere, aplicație. Microbiologie cu tehnici de cercetare microbiologică - reacție de fixare a complementului.Cu RSC pozitiv, observat experimental

(RSK) - serol. reacție folosită pentru cuantificare Abs și Ags fixatoare de complement. Principiul RSC este că un complex imun specific absoarbe complet sau parțial C adăugat în sistem. C este luat ca un indicator cantitativ de legare. sistemul hemolitic, modelul de hemoliză indică absența complexului imun în sistemul de diagnostic (RSC negativ), hemoliză întârziată – datorită prezenței unui complex imun (RSC pozitiv).În RSK folosesc: 1) încălzit la 57 ° C timp de 30 de minute. s-ku, trebuie să fie proaspăt, fără particule în suspensie, citotoxine, C. Experimentul ia de obicei câțiva multipli a 2 diluții de s-ki, în funcție de titrul diagnostic al CSC pentru boala suspectată; 2) diagnosticum de vânzare sau special pregătit pentru RSK; 3) C în doza de lucru, marginile la titrarea cu Ag este egală cu titrul C, iar la titrarea fără Ag - mai mare decât titrul C cu 20 - 25%; 4) eritrocitele de oaie se spală de mai multe ori cu ser fiziologic și se prepară o suspensie 3%; 5) acidul hemolitic este diluat de 3 ori mai puțin decât titrul indicat pe etichetă. Toate cele 5 componente sunt luate în același volum (0,5 ml sau 0,25 ml). Cercetarea este introdusă în sistemul experimental (diagnostic). s-ku, diagnosticum, S. Pregătiți controale: s-ki - s-ku, S și soluție salină (în loc de Ag); diagnosticum - diagnosticum, S și ser fiziologic (în loc de s-ki); C-C și volum dublu de soluție salină; evident pozitiv - sistem imunitar standard, Ag, C; evident negativ - normal s-ka, Ag, C. Eprubetele se scutură și se pun într-un termostat la 37 ° C timp de 45 de minute. În același timp, pregătiți un sistem hemolitic amestecând volume egale dintr-o suspensie 3% de eritrocite de oaie și sistem hemolitic și incubați-l într-un termostat pentru același timp. După sensibilizare, se adaugă un volum dublu de sistem hemolitic (1 ml sau 0,5 ml) în toate tuburile de testare și control. Toate tuburile sunt ținute într-un termostat la 37°C până când apare hemoliza completă în tuburile de control (aproximativ 30 - 40 de minute). Cu metoda cantitativă de stadializare a reacției, ei găsesc o diluție în care există o întârziere a hemolizei de cel puțin 2+ (La titru examinat) și o compară cu titrul diagnostic al bolii recunoscute. O metodă semi-cantitativă cu o diluție a medicamentului (de obicei 1:5) face posibilă determinarea gradului de întârziere a hemolizei cu 4+, 3+, 2+ și, pe baza acesteia, evaluarea intensității reacției. Rezultate mai precise se obțin prin găsirea titrului pe baza nu pe 100%, ci pe 50% hemoliză (vezi. Definiția complementului). A fost propusă o variantă de formulare cantitativă a RSC, în care se iau o diluție a medicamentului, dar mai multe doze de C (1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4). Toate celelalte componente sunt folosite în aceleași cantități. Atunci când evaluează, ei țin cont de faptul că cu cât mai multe doze C leagă studiul. s-ka, cu atât mai mult At are.

(Sursa: Dicționarul de termeni de microbiologie)

Vedeți ce este „reacția de fixare a complementului” în alte dicționare:

reacție de fixare a complementului- RSK Metoda de laborator. [Glosar englez-rus de termeni de bază în vaccinologie și imunizare. Organizația mondialăîngrijire a sănătății, 2009] Subiecte vaccinologie, imunizare Sinonime RSK EN test de fixare a complementuluiCFTCF test ... Ghidul tehnic al traducătorului

REACȚIA DE FIXARE COMPLEMENTĂ- reacția de fixare a complementului, RSK, reacția Bordet-Zhangu [numită după belgianul. bacteriologi J. Bordet și O. Gengou, 1901], o reacție serologică foarte specifică și foarte sensibilă bazată pe proprietatea complexului... ... Veterinar Dicţionar enciclopedic

I Reacția de fixare a complementului este o reacție serologică utilizată pentru determinarea unui antigen sau anticorp, pe baza evaluării consumului (fixării) de complement de către complexele antigen-anticorp, vezi Metode de cercetare imunologică. II...... Enciclopedie medicală

reacție de fixare a complementului

reacție de fixare a complementului- (RSK), o reacție serologică foarte sensibilă și specifică utilizată pentru diagnosticarea multor boli infecțioase și invazive ale animalelor. Constă din două faze succesive. În prima fază, antigenul este amestecat cu serul de testat și... ... Agricultură. Dicționar enciclopedic mare

- (RSK; sinonim: reacție Bordet Zhangu, reacție de respingere a complementului depășită, reacție de fixare alexinei depășită) o metodă de cercetare serologică bazată pe capacitatea complexului antigen-anticorp rezultat de a lega complementul, care este detectat... ... Mare dictionar medical

REACȚIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI (FFR)- foarte sensibil și specific. serologic reacție folosită pentru a diagnostica plural. infectioase și bolile invazive ale femeilor. Constă din două consecutive. faze În prima fază, antigenul este amestecat cu serul de testat și complementul (un complex de proteine... ... Dicţionar Enciclopedic Agricol

- (învechit) vezi Reacția de fixare a complementului... Dicționar medical mare

reacție de respingere a complementului- reacția rus (g) de fixare a complementului, reacția (g) Bordet Zhangou; reacție (g) respingere a complementului; alexin fixation reaction (g) eng complement fixation test fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… … Securitatea și sănătatea în muncă. Traducere în engleză, franceză, germană, spaniolă

Vezi Reacția de fixare a complementului. (

Testul de fixare a complementului este unul dintre testele serologice tradiționale folosite pentru a diagnostica multe boli viraleși, de asemenea, formează baza altor metode de detectare a anticorpilor antivirali. Deși reacția de neutralizare, inhibarea hemaglutinării, hemaglutinarea indirectă și imunotestul enzimatic sunt superioare reacției de fixare a complementului în sensibilitate, simplitatea tehnicii, detectarea precoce a anticorpilor, precum și identificarea antigenelor virale care nu au proprietăți hemaglutinante explică. aceasta aplicare largăîn cercetarea virologică.

Pentru a-l configura nu aveți nevoie de așa ceva grad înalt concentrația și puritatea medicamentelor antigenice, care sunt necesare pentru o serie de alte reacții imunologice. În plus, specificitatea de grup a antigenelor de fixare a complementului a multor virusuri face posibilă utilizarea reacției de fixare a complementului în diagnosticarea în masă: această reacție nu dezvăluie diferențe de tulpină și are o valoare deosebită atunci când se studiază relațiile antigenice dintre viruși.

Numele în sine reflectă în mare măsură esența metodei, care constă din două reacții separate. În prima etapă, reacția implică antigene și anticorpi (una dintre aceste componente este cunoscută în prealabil), precum și complement într-o cantitate titrată. Dacă antigenul și anticorpii se potrivesc, complexul lor se leagă de complement, care este detectat în a doua etapă folosind un sistem indicator (un amestec de globule roșii de oaie și antiser la acestea). Dacă complementul este legat de interacțiunea dintre antigen și anticorpi, atunci liza globulelor roșii de oaie nu are loc (reacție de fixare pozitivă a complementului). În cazul unei reacții de fixare a complementului negativ, complementul nefixat promovează hemoliza, care este folosită pentru a judeca rezultatele reacției.

Componentele principale ale reacției de fixare a complementului sunt antigenele (cunoscute sau detectabile), anticorpii (antiserurile cunoscute sau serurile de testare), complementul, serul hemolitic și hematiile de oaie; O soluție izotonă este utilizată ca diluant clorura de sodiu(pH 7,2-7,4) sau diverse soluții tampon. Antigenele și serurile pot fi anti-complementare, de exemplu. capacitatea de a adsorbi complementul, care întârzie hemoliza și distorsionează rezultatul reacției.

Antigenele pentru CSC sunt preparate din organele animalelor infectate, din lichidul alantoic sau amniotic al embrionilor de pui infectați, precum și din fluidul de cultură după cultivarea virușilor în culturi de celule tisulare. Preparatele antigenice conțin întotdeauna o mulțime de substanțe de balast din celule animale sau culturi de țesuturi, care pot denatura și rezultatele reacției.

Antigenele virale rezultate sunt inactivate, se determină doza de lucru, precum și proprietățile anti-complementare și hemolitice. Antigenul este apoi titrat în prezența complementului.

A doua componentă principală în stadializarea reacției este complementul. Acest termen se referă la un sistem complex de proteine ​​și factori prezenți în sângele animalelor și al oamenilor. De obicei, serul sanguin de cobai este utilizat în reacția de fixare a complementului. Activitatea (titrul) complementului este cea mai mică cantitate a acesteia, în prezența căreia hemolizina determină hemoliza completă a sistemului hemolitic utilizat.

Pentru a identifica anticorpii care fixează complementul la viruși, serul trebuie să fie inactivat pentru a elimina complementul la 560C timp de 30 de minute. Serurile de la animale imunizate sunt utilizate de obicei ca ser de referință. Mai mult, pentru imunizare se folosesc antigeni virali care sunt complet purificați din impuritățile tisulare, deoarece în caz contrar are loc o reacție nespecifică pronunțată.

O componentă obligatorie a reacției de fixare a complementului este sistemul hemolitic, care include eritrocitele de oaie și serul hemolitic obținut prin hiperimunizarea iepurilor cu eritrocite de oaie.

Pentru efectuarea reacției de fixare a complementului se folosesc următoarele modificări: micrometoda reacției de fixare a complementului într-un microtitrator cu sistem Takachi, reacția de fixare a complementului pe termen lung, reacția de fixare indirectă a complementului, reacția de fixare a complementului într-un gel, micropicătura reacție de fixare a complementului, reacția de fixare a complementului pe bază solidă.

Deși sensibilitatea reacției de fixare a complementului este scăzută, aceasta are o specificitate ridicată. În acest sens, este utilizat pe scară largă pentru diagnosticul pneumoenteritei virale la bovinele tinere.

Testul de fixare a complementului (FFR) este un test serologic care este comparabil ca sensibilitate la metodele de precipitare, aglutinare și neutralizare. RSK este o metodă care utilizează două sisteme antigen-anticorp:

primul este specific;

al doilea este indicator (hemolitic).

Pentru efectuarea RSC sunt necesare 5 componente: antigenul diagnosticat, anticorpi de diagnostic, antigenul indicator (eritrocite de oaie), anticorpii indicatori (hemolizinele de iepure), complementul.

Interacțiunea specifică dintre antigen și anticorp este însoțită de legarea complementului. Complexul rezultat nu apare vizual. Sistemul hemolitic este folosit ca indicator. Serul hemolitic sensibilizează globulele roșii la acțiunea complementului, în prezența căruia are loc liza globulelor roșii (hemoloză). Dacă nu există hemoliză, atunci complementul este legat de primul sistem și, prin urmare, antigenul din acesta corespunde anticorpului - un răspuns pozitiv. Dacă anticorpul nu se potrivește cu antigenul, complexul nu se formează și complementul, rămânând liber, se combină cu cel de-al doilea sistem, provocând hemoliză - o reacție negativă.

Pentru a efectua RSC, toate ingredientele de reacție sunt pregătite și titrate înainte de experimentul principal.

Serul (pacient sau diagnostic) în ajunul reacției este încălzit într-o baie de apă la o temperatură de 56ºC timp de 30 de minute pentru a-și inactiva propriul complement. Unele seruri, în special de la animale imunizate, au proprietăți anti-complementare, adică. capacitatea de a fixa complementul în absența unui antigen omolog. Anticomplementaritatea se elimină prin tratarea lor cu dioxid de carbon, încălzirea la o temperatură de 57-58ºC, odată congelată la o temperatură de -20ºC sau -70ºC și îndepărtarea sedimentului prin centrifugare, adăugând complement la ser în volum de 1: 10 ser și încălzirea acestuia după incubare la rece timp de 18-20 ore.Pentru a preveni anticomplementaritatea serurilor, acestea se păstrează liofilizate sau congelate la temperaturi scăzute.

Antigenul pentru CSC poate fi culturi de diferite microorganisme ucise, lizatele acestora, componente ale bacteriilor, organe alterate patologic și normale, lipide tisulare, viruși și materiale care conțin virusuri. Mulți antigeni de la microorganisme sunt obținuți industrial. Anticomplementaritatea antigenelor este eliminată prin metode precum termoliza (congelare și decongelare multiplă), tratarea cu solvenți grăsimi (eter, cloroform, acetonă), alcooli (metanol, etanol) etc.

Serul de cobai luat imediat înainte de experiment este utilizat ca complement; Se poate folosi și complement uscat. Pentru a obține soluția principală pentru titrarea ulterioară, complementul este diluat 1:10 cu soluție izotonică de clorură de sodiu.

Globulele roșii de oaie sunt utilizate ca suspensie într-o soluție izotonică de clorură de sodiu. Sângele (100-150 ml) se ia din vena jugulară, așezat într-un borcan steril cu perle de sticlă, defibrinat prin agitare timp de 10-15 minute și filtrat prin 3-4 straturi de tifon steril pentru a elimina fibrina. Globulele roșii sunt spălate de 3 ori cu soluție izotonică de clorură de sodiu, adăugându-le la sedimentul de celule roșii din sânge la volumul sanguin inițial. Globulele roșii pot fi păstrate timp de 5-6 zile la o temperatură de 4-6ºC. Perioada de valabilitate a globulelor roșii crește atunci când sunt conservate cu formaldehidă.

Serul hemolitic pentru RSC se obține astfel: Se imunizează iepurii prin injectarea lor într-o venă a urechii cu o suspensie 50% de globule roșii de oaie spălate (1 ml de 4-6 ori la două zile). La 7 zile de la ultima injecție se obține un ser de testare. Dacă titrul seric nu este mai mic de 1:1200, atunci se efectuează sângerare. Serul este încălzit timp de 30 de minute la o temperatură de 56ºC. Pentru a preveni creșterea bacteriilor, în serul hemolitic se adaugă un conservant (mertiolat 1:10000 sau 1 acid boric).

Sistemul hemolitic este format din amestecat în volume egale de ser hemolitic (luat în titru triplu) și 3 suspensii de eritrocite de oaie. Pentru a sensibiliza eritrocitele cu hemolizine, amestecul se ține într-un termostat la o temperatură de 37ºC timp de 30 de minute.

Titrarea serului hemolitic. Serul este titrat prin combinarea a 0,5 ml din acesta (în diluții de 1:600, 1:1200, 1:1600, 1:3200 etc.) cu 0,5 ml din 3 suspensii de globule roșii și 0,5 ml de complement proaspăt în diluție 1:10. Volumul amestecului de reacție din tuburile de control este ajustat la 1,5 ml prin adăugarea unei soluții izotonice de clorură de sodiu. Rezultatele reacției sunt luate în considerare după 1 oră de incubare la o temperatură de 37ºC. Titrul serului hemolitic este considerat a fi cea mai mare diluție a acestuia, care provoacă hemoliză completă. Serul se păstrează în formă liofilizată.

Schema de titrare a serului hemolitic

Titrarea complementului.Înainte de experiment, soluția principală de complement (1:10) este turnată într-un rând de eprubete de la 0,05 până la 0,5 ml și la fiecare se adaugă o soluție izotonică de clorură de sodiu, aducând volumul de lichid la 1,5 ml. Tuburile sunt plasate într-un termostat la o temperatură de 37ºC timp de 45 de minute, apoi se adaugă sistemul hemolitic și se păstrează în termostat timp de 30 de minute, după care se determină titrul de complement.

Pentru experiment, luați o doză de lucru de complement (conținută într-un volum de 0,5 ml), care este cu 20-30% mai mare decât titrul.

Schema de titrare a complementului

Termostat la 37ºC timp de 45 de minute

Termostat la 37ºC timp de 30 de minute

Titrarea antigenului. Antigenii utilizați pentru RSC pot adsorbi o anumită cantitate de complement, de ex. au proprietăți anti-complementare. Prin urmare, înainte de efectuarea experimentului, antigenele sunt titrate în prezența unei doze de lucru de complement. Într-o măsură mai mică, proprietățile anti-complementare sunt exprimate în antigeni specifici produși industrial. Titrul lor este determinat nu înainte de fiecare experiment, ci o dată pe lună, ținând cont de posibilitatea reducerii acestuia în timpul depozitării.

Pentru determinarea titrului de antigen, acesta se toarnă într-o serie de eprubete în cantități descrescătoare de la 0,5 la 0,05 ml, aducând volumul la 1 ml prin adăugare de soluție de clorură de sodiu. Apoi se adaugă 0,5 ml dintr-o doză de lucru de complement în fiecare eprubetă și se plasează într-un termostat timp de 1 oră la o temperatură de 37ºC. După aceasta, în toate eprubetele se adaugă 1 ml de sistem hemolitic, se ține din nou într-un termostat timp de 1 oră, iar rezultatele reacției sunt luate în considerare.

Titrul de antigen este considerat a fi cea mai mică cantitate la care are loc hemoliza completă. Pentru RSC, se utilizează o doză de lucru de antigen, care este de aproximativ 1/2-1/3 titr. Antigenele în prezența cărora titrul complementului scade cu mai mult de 30% sunt nepotriviți pentru reacție.

Schema de titrare a antigenului

Termostat la 37ºC timp de 1 oră

Termostat la 37ºC timp de 1 oră

Efectuarea experimentului principal al DSC. Volumul total al ingredientelor de reacție este de 2,5 ml, volumul dozei de lucru a fiecăruia dintre ele este de 0,5 ml. Ser în diluția corespunzătoare, antigenul și complementul se adaugă în primul tub, serul la diluția corespunzătoare, complementul și soluția izotonică de clorură de sodiu (controlul serului) se adaugă în al doilea tub, antigenul, complementul și soluția izotonă de clorură de sodiu (controlul antigenului). ) se adaugă la al treilea tub. În același timp, se prepară un sistem hemolitic amestecând 2 ml de ser hemolitic în titru triplu (față de cel specificat în instrucțiuni) și suspensie de 3% de eritrocite de oaie (față de volumul sanguin inițial). Tuburile se țin într-un termostat la o temperatură de 37ºC timp de 1 oră, apoi se adaugă 1 ml de sistem hemolitic în primele 3 tuburi (primul sistem) (al doilea sistem). După amestecarea temeinică a ingredientelor, eprubetele sunt plasate din nou într-un termostat timp de 1 oră la o temperatură de 37ºC.

Schema de desfășurare a experimentului principal al RSK

Termostat la 37ºC timp de 1 oră

Termostat la 37ºC timp de 1 oră

Rezultatele reacției se iau în considerare în prealabil - după scoaterea eprubetelor din termostat și în final - după păstrarea lor timp de 15-18 ore la frigider sau la temperatura camerei.

În evidența finală, intensitatea reacției este exprimată prin plusuri: (++++) - o reacție puternic pozitivă, caracterizată printr-o întârziere completă a hemolizei (lichidul din eprubetă este incolor, toate globulele roșii se stabilesc la fundul); (+++, ++) – o reacție pozitivă, manifestată prin creșterea culorii lichidului din cauza hemolizei și scăderea numărului de globule roșii din sediment; (+) – reacție slab pozitivă (lichidul este intens colorat, există o cantitate mică de globule roșii în fundul tubului). La reacție negativă(–) se observă hemoliză completă, lichidul din eprubetă are o culoare roz intens (sânge lăcuit).

Au fost propuse o serie de modificări ale RSC, caracterizate printr-o sensibilitate crescută și un volum mai mic de ingrediente utilizate. De exemplu, în studiile virologice, volumul de ingrediente pentru RSC la rece este de 1 ml. Pentru picurare RSC, luați 1 picătură de ser + 1 picătură de antigen + 1 picătură de complement + 2 picături de sistem hemolitic.

Reacția de legare a complimentului este cea mai utilizată în diagnosticul microbiologic și serologic.

Folosind RSC, anticorpii de fixare a complementului sunt detectați în serul sanguin al pacienților cu sifilis, mucă, gonoree cronică, rickettsioză, boli virale etc.

CSC este de interes deosebit pentru imunologia clinică. Reacția este utilizată pentru a izola diferite subpopulații de limfocite, pentru a detecta antigene HLA pe trombocite, limfoblaste transplantabile, fibroblaste, celule tumorale și antigene specifice trombocitelor, precum și anticorpi corespunzători.

reacție de fixare a complementului , RSK, reacția lui BordetZhang [numit după belgian. bacteriologi J. Bordet și O. Gengou, 1901], o reacție serologică foarte specifică și foarte sensibilă bazată pe proprietatea complexului antigen-anticorp de a fixa complementul liber (), utilizată în diagnosticul multor bacterii și virale și a unor protozoare și boli helmintice, precum și pentru studiul proceselor însoțite de modificări ale cantității de antigen sau anticorpi. RSC se desfășoară în 2 faze: 1) interacțiunea anticorpilor, antigenului și complementului, ca urmare a căreia complementul liber este legat de complexul antigen-anticorp rezultat (fază specifică); 2) indicarea reacţiei sensibilizate de eritrocite (fază nespecifică). RSC utilizează 2 sisteme: un sistem bacteriologic specific, constând dintr-un anticorp (ser de testare), antigen și complement, precum și un sistem „indicator” nespecific care conține hemolizină (ser hemolitic) și o suspensie de eritrocite de oaie. Antigenul se combină cu anticorpul numai în prezența complementului. Dacă serul de testat conține anticorpi omologi cu antigenul luat, atunci complementul prezent în amestecul de reacție este adsorbit de complexul antigen × anticorp rezultat și își pierde capacitatea de a liza globulele roșii sensibilizate, adică fără complement, hemolizina (anticorp hemolitic). ) nu distruge globulele roșii (reacția este pozitivă). În cazurile în care nu există o relație specifică între antigen și anticorpii serului testat, complexul nu se formează și complementul rămâne în stare liberă. La adăugarea unui sistem hemolitic în acest caz, complementul nelegat provoacă hemoliza hematiilor sensibilizate (reacție negativă). Există diverse opțiuni de stadializare a RSC: metoda clasică de stadializare sub formă de macro și microvariante, reacția de fixare a complementului pe termen lung (LDST) la rece, metoda RSC cantitativă bazată pe hemoliză de 50% a eritrocitelor sensibilizate, etc. În practica de diagnostic veterinar, metoda clasică RSC este mai des folosită ca macroopțiune, în care se iau câte 0,5 sau 0,25 ml din fiecare componentă într-un anumit titru de lucru. Complementul este titrat într-un sistem bacteriologic folosind seruri de la aceeași specie de animale al căror sânge urmează să fie examinat. Serurile de testare sunt de obicei testate la diluții de 1:5 și 1:10 cu antigen și 1:5 fără antigen (martor). Timpul de fixare a complementului în faza specifică este de 20 de minute, timpul de reacție la hemoliză în faza nespecifică este de 20 de minute la t 3738ºC. Pentru a diagnostica o serie de boli, se folosește o metodă mai sensibilă, DSCT. În acest caz, prima fază a reacției este efectuată la t 46ºC timp de 1618 ore, ceea ce duce la o adsorbție crescută a complementului de către cantități mici de antigen și anticorpi. Apoi se adaugă sistemul hemolitic și reacția continuă la t 3738ºC timp de 20 min. Rezultatele RSK și RDSC sunt luate în considerare în funcție de gradul de întârziere a hemolizei, care este indicat prin încrucișări sau minusuri, corespunzătoare următoarelor procente de hemoliză eritrocitară: ++++ de la 0 la 10%; +++ de la 10 la 40%; ++ de la 40 la 70%; + de la 70 la 90%; de la 90 la 100%. Legislația veterinară oferă instrucțiuni speciale pentru formularea, înregistrarea și evaluarea RSC și RDSK pentru fiecare boală separat.

Literatură:
Cercetări de laborator în medicina veterinară, M., 1971;
Ghid de imunologie, ed. O. E. Vyazova și Sh. Kh. Khodzhaeva, M., 1973.

Dicționar enciclopedic veterinar. - M.: „Enciclopedia Sovietică”. Redactor-șef V.P. Şişkov. 1981 .

Vedeți ce este „” în alte dicționare:

Reacția de fixare a complementului- (RSK) serol. reacție utilizată pentru determinarea cantitativă a Abs și Ags fixatoare de complement. Principiul RSC este că un complex imun specific absoarbe complet sau parțial C adăugat în sistem. Dicţionar de microbiologie

reacție de fixare a complementului- Metoda de laborator RSK. [Glosar englez-rus de termeni de bază în vaccinologie și imunizare. Organizația Mondială a Sănătății, 2009] Subiecte vaccinologie, imunizare Sinonime ale testului de fixare a complementului RSC EN Testul CFTCF... Ghidul tehnic al traducătorului

Reacția de fixare a complementului- I Reacția de fixare a complementului este o reacție serologică utilizată pentru determinarea unui antigen sau anticorp, pe baza aprecierii consumului (fixării) de complement de către complexele antigen-anticorp, vezi Metode de cercetare imunologică. II...... Enciclopedie medicală

reacție de fixare a complementului- reacția rus (g) de fixare a complementului, reacția (g) Bordet Zhangou; reacție (g) respingere a complementului; alexin fixation reaction (g) eng complement fixation test fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… …

reacție de fixare a complementului- (RSK), o reacție serologică foarte sensibilă și specifică utilizată pentru diagnosticarea multor boli infecțioase și invazive ale animalelor. Constă din două faze succesive. În prima fază, antigenul este amestecat cu serul de testat și... ... Agricultură. Dicționar enciclopedic mare

reacție de fixare a complementului- (RSK; sinonim: reacție Bordet Zhangu, reacție de respingere a complementului depășită, reacție de fixare alexinei depășită) o metodă de cercetare serologică bazată pe capacitatea complexului antigen-anticorp rezultat de a lega complementul, care este detectat... ... Dicționar medical mare- reacția rus (g) de fixare a complementului, reacția (g) Bordet Zhangou; reacție (g) respingere a complementului; alexin fixation reaction (g) eng complement fixation test fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa… … Securitatea și sănătatea în muncă. Traducere în engleză, franceză, germană, spaniolă

Reacția de fixare a complementului- vezi Reacția de fixare a complementului. (

Reacția de fixare a complementului (CFR) și reacția de fixare a complementului pe termen lung (LCR)

COMPlement Fixation Reaction (Reacție de fixare a complementului)

REACȚIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI, RSK, reacția Bordet-Zhangu [numită după bacteriologii J. Bordet și O. Gengou, 1901], foarte specifică și foarte sensibilă serologică. o reacție bazată pe proprietatea complexului antigen-anticorp de a fixa complementul liber.

Complement (sistem de complement) (din latinescul complementum - adiție), un grup de proteine ​​globulare din serul de sânge al animalelor și al oamenilor, care fac parte sistem imunitar corp. Atunci când infectează bacterii sau viruși, unele toxine sau apariția propriilor celule transformate intră în organism, are loc activarea complementului, în urma căreia celulele țintă sunt lizate (distruse), iar toxinele și virusurile sunt neutralizate. Prin urmare, sistemul de complement este considerat, alături de macrofage, ca linia frontală a apărării imune a organismului.

Această reacție este utilizată pe scară largă în identificarea antigenelor și în serodiagnosticarea infecțiilor, în special a bolilor cauzate de spirochete (reacția Wassermann), rickettsie și virusuri.

RSC este o reacție serologică complexă. Acesta implică complement și două sisteme antigen-anticorp. În esență, acestea sunt două reacții serologice.

Primul sistem - cel principal constă dintr-un antigen și un anticorp (unul este cunoscut, celălalt nu). I se adaugă o anumită cantitate de complement. Dacă antigenul și anticorpul acestui sistem se potrivesc, ele se vor conecta și vor lega complementul. Complexul rezultat este fin dispersat și nu este vizibil.

serodiagnoza reacţiei de fixare a complementului

Formarea acestui complex este detectată folosind un al doilea sistem hemolitic sau indicator. Include eritrocite de oaie (antigen) și serul hemolitic corespunzător (anticorp), adică. complex imun gata preparat. În acest sistem, liza globulelor roșii poate avea loc numai în prezența complementului. Dacă complementul este legat de primul sistem (dacă antigenul și anticorpul corespund în el), atunci în al doilea sistem nu va exista hemoliză - deoarece nu există complement liber. Absența hemolizei (conținutul tubului este tulbure sau există un sediment de globule roșii în partea de jos) se înregistrează ca rezultat pozitiv RSK.

Dacă în primul sistem antigenul nu se potrivește cu anticorpul, atunci complexul imun nu se va forma și complementul va rămâne liber. Rămânând liber, complementul participă la al doilea sistem, provocând hemoliză - rezultatul RSC este negativ (conținutul tuburilor este transparent - „sânge lăcuit”).

Componentele reacției de fixare a complementului:

1. Antigen - de obicei lizat, extract, haptenă; mai rar o suspensie de microorganisme

2. Anticorp - ser pacient

3. Complement – ​​ser de cobai

4. Antigen – hematii de oaie Sistem hemolitic

5. Anticorp - hemolizină la globulele roșii de oaie

6. Soluție izotonică

Prepararea ingredientelor

1. Serul este diluat de 3 ori mai puțin decât titrul său. Se prepară o diluție generală a serului pentru întregul experiment, al cărei volum este determinat prin înmulțirea volumului de ser dintr-o eprubetă (de exemplu, 0,5 ml) cu numărul de eprubete, depășind ușor numărul din experiment. Excesul de lichid este necesar la pregătirea tuturor componentelor reacției: o parte din el rămâne pe pereții eprubetelor, baloanelor și pipetelor. Volumele de hemolizină diluată și o suspensie de eritrocite, adăugând ser la eritrocite, sunt bine amestecate și incubate timp de 30 de minute la 37°C (sensibilizate).

2. Globule roșii de oaie. Se prepară o suspensie de 3% de eritrocite de oaie spălate pentru întregul număr de eprubete din experiment. Pentru a pregăti sistemul hemolitic, cu 30 de minute înainte de a-l introduce în experiment, se amestecă volume egale de eritrocite de oaie cu anticorpul la acestea.

3. Complementul este de obicei diluat 1: 10. Trebuie titrat înainte de fiecare experiment. Titrul de complement este cea mai mică cantitate, atunci când este adăugat la sistemul hemolitic, hemoliza completă are loc în decurs de 1 oră la 37°C.

4. Antigenul este obținut de obicei gata făcut cu titrul indicat, adică. cantitatea care, după diluarea antigenului, trebuie să fie conținută în 1 ml. De exemplu, cu un titru de 0,4, se diluează în 0,96 ml de soluție izotonă. O cantitate de antigen egală cu jumătate din titrul (0,5 ml) este luată în experiment. Aceasta este doza lui de lucru. Se prepară o diluție generală a antigenului pentru întregul experiment, înmulțind 0,5 ml cu numărul de eprubete din experiment.

5. Anticorp - ser al pacientului. Serul proaspăt este inactivat înainte de experiment pentru a distruge complementul prezent în el. Pentru a face acest lucru, se încălzește timp de 30 de minute la 56°C într-o baie de apă sau într-un dezactivator cu termostat. Această din urmă metodă este de preferat: elimină posibilitatea supraîncălzirii

Stabilirea reacției de fixare a complementului (CFR).

Reacția se realizează într-un volum de 1 metru cub. cm (0,2 cc din fiecare componentă).

Serurile de testat sunt examinate la o diluție de 1: 5 și 1: 10 (doza de ser de 0,04 cc și 0,02 cc cu un antigen specific, la o diluție de 1: 5 cu un antigen de control (pentru specificitate) și fără antigen (pentru anticomplementaritate) .

Serurile de testare și de control sunt inactivate în ziua reacției în formă diluată la 56-65°C (în funcție de tipul de animal) timp de 30 de minute. (tot în RDSC).

Ambele etape ale reacției se desfășoară într-o baie de apă la 37-38°C, sistemul bacteriolitic se menține timp de 60 de minute, a doua etapă a reacției (cu sistemul hemolitic) se menține timp de 20 de minute.

Controale ale experienței principale a RSK:

ser pozitiv diluat 1:5 fără antigen și cu antigen martor; în diluții de la 1:5 la titrul său cu un antigen specific;

ser negativ în diluții de 1:5 și 1:10 cu un antigen specific, în diluție de 1:5 cu antigen de control și fără antigen - antigene specifici și de control în doză dublă - pentru anti-complementaritate (complement +) și pt. hemotoxicitate (complement);

sistem hemolitic pentru hemotoxicitate (complement).

Contabilitatea rezultatelor. În controale nu ar trebui să existe nici măcar urme de hemoliză, deoarece unul dintre ele nu conține complement, celălalt - hemolizină. Martorii indică faptul că componentele reacției nu au hemotoxicitate (capacitatea de a liza spontan celulele roșii din sânge).

Într-un experiment, activitatea complementului poate scădea datorită adsorbției sale nespecifice de către alte componente ale reacției, prin urmare, pentru experiment, cantitatea de complement este crescută: se ia doza care urmează titrului. Aceasta este doza de lucru.

Există diverse opțiuni pentru montarea RSK: clasic. metodă de formulare sub formă de macro și microvariante, reacție de fixare a complementului pe termen lung (LDSC) la rece, metoda cantităților. RSC bazat pe hemoliza de 50% a eritrocitelor sensibilizate etc. Pentru a diagnostica o serie de boli se folosește o metodă mai sensibilă - RDS.

Stabilirea reacției de fixare a complementului pe termen lung (LDSC).

Prima fază a reacției se efectuează la frigider la 2-6°C timp de 16-18 ore, a doua fază într-o baie de apă timp de 20 de minute la 37-38°C.

Complementul este utilizat într-o diluție de lucru de 1:25 sau 1:30 (la determinarea diluției sale de lucru).

În prima zi, serul și antigenul sunt îmbuteliate pentru experimentul principal. Reacția se realizează într-un volum de 1 metru cub. cm (0,2 cc din fiecare componentă). Controalele pentru RDSC sunt aceleași ca atunci când configurați RSK.

Apoi se toarnă 0,2 cc de complement în toate eprubetele experimentului principal și controalele corespunzătoare. cm in functie de dilutia sa de lucru, tuburile se scutura si se introduc la frigider pentru 16-18 ore. la 2-6°C.

A doua zi, rafturile cu prima fază se scot din frigider și după ce au stat 20-30 de minute. la temperatura camerei, sistemul hemolitic este turnat în toate eprubetele într-o doză (în exemplul dat - 0,6 cm cubi). Rafturile se scutură și se pun într-o baie de apă timp de 20 de minute. la 37-38°C.

Schema experimentului principal al RDSC este prezentată în Tabelul 3.

Rezultatele RSC și RDSK sunt luate în considerare de două ori: prima dată - imediat după baia de apă, a doua oară - după ce globulele roșii se depun pe fundul eprubetei (3-4 ore după baia de apă) sau a doua zi când se păstrează la frigider de la 2° la 6°C.

Pentru a determina obiectiv rezultatele reacției, se recomandă evaluarea procentului de hemoliză. Pentru a face acest lucru, din reacție sunt selectate 5 eprubete cu hemoliză completă (100%) și lichidul din ele este turnat într-o eprubetă. Din aceasta se prepară diluții cu un procent mai mic de hemoliză, așa-numita scară „Standard”.

Gradul de hemoliză în eprubete cu ser de testare se determină prin comparație cu gradul de hemoliză din eprubete „standard” iar procentul de hemoliză este exprimat în încrucișări.

Gradul de întârziere este invers proporțional cu procentul de hemoliză a globulelor roșii:

++++ (4 încrucișări) - absența hemolizei, lichidul supernatant este transparent, incolor;

+++ (3 încrucișări) - hemoliza a 25% din celulele roșii din sânge;

++ (2 încrucișări) - hemoliza a 50% din eritrocite;

+ (1 cruce) - hemoliza a 75% din celulele roșii din sânge;

(minus) - hemoliza completa a eritrocitelor, fara sediment, lichidul este intens colorat cu hemoglobina.

Evaluarea rezultatelor RSK, RDSC.

Serurile de testat sunt evaluate în diluții de 1:5 și 1:10 (0,04 cc, 0,02 cc) cu hemoliza completă a eritrocitelor în serul de control fără antigen și cu antigen de control.

O reacție pozitivă este evaluată atunci când hemoliza globulelor roșii este întârziată cu 3-4 încrucișări la o diluție de 1:10.

Îndoielnic - atunci când hemoliza eritrocitelor este întârziată cu 1 încrucișare într-o diluție a serului de 1: 10 și de la 2 la 4 încrucișări într-o diluție de 1: 5.

Negativ - cu hemoliza completă a eritrocitelor în diluții de ser de 1: 5 și 1: 10.