A.1.2 Prepararea soluției tampon fosfat. Prepararea soluției tampon fosfat Prepararea soluției tampon fosfat

Tamponul de spălare fosfat-salin cu Tween-20 pentru imunohistochimie este un concentrat (20x), care, după diluare, este utilizat pentru spălarea lamelor de reactivi și depozitarea pe termen scurt a probelor imunohistochimice între proceduri. După diluare, soluția gata de utilizare 0,01 M are un pH de 7,4 ± 0,1. Utilizarea acestei soluții saline tamponate cu fosfat permite nu numai asigurarea unei spălări de înaltă calitate, ci și păstrarea caracteristicilor morfologice ale anticorpilor utilizați și ale epitopilor acestora, ceea ce facilitează legarea specifică necesară reacției imunohistochimice. Adăugarea Tween-20 la soluția salină tamponată cu fosfat promovează o spălare mai eficientă și previne colorarea nespecifică.

Avantajele noastre:

În prezent, cooperăm cu producători străini de top de reactivi de laborator. Clienții noștri sunt atât instituții neguvernamentale, cât și instituții guvernamentale, inclusiv organizații medicale din Moscova și alte orașe ale Rusiei. Pentru clienții obișnuiți este oferit un sistem de reduceri.

Aplicație

Tamponul fosfat de sodiu este utilizat pe scară largă deoarece este izotonic și netoxic pentru celule. PBS este folosit pentru a dizolva substanțe pentru a clăti recipientele care conțin celule.

Pregătirea

Există multe moduri de a prepara tampon fosfat de sodiu. Unele formule nu conțin potasiu, altele conțin calciu sau magneziu.

Pentru a prepara 1 litru de tampon fosfat de sodiu unic, utilizați:

• 8,00 g NaCl
• 0,20 g KCl
• 1,44 g Na2HP04
• 0,24 g KH2PO4
• dizolvată în 800 ml apă distilată
• se ajustează pH-ul la 7,4 cu acid clorhidric sau hidroxid de sodiu
• adăugați apă distilată la 1 litru.

Zece litri de soluție stoc de PBS de zece ori pot fi preparați prin dizolvarea a 800 g NaCl, 20 g KCl, 144 g Na2HP04 și 24 g KH2PO4 în opt litri de apă distilată, aducând volumul la zece litri. pH-ul soluției rezultate va fi de aproximativ 6,8, dar după diluare la 1X PBS va fi 7,4. După prepararea soluției, verificați valoarea pH-ului folosind un pH-metru. Dacă este necesar, puteți ajusta pH-ul folosind acid clorhidric sau hidroxid de sodiu.

Cel mai simplu mod de a prepara tamponul fosfat de sodiu este utilizarea preparatelor de tablete disponibile comercial. Astfel de tablete sunt diluate cu apă distilată la un volum dat și se obține o soluție de o concentrație dată.

Pentru culturile celulare, soluția trebuie alicotată și sterilizată prin autoclavare (20 minute la 121°C, mod lichid). Sterilizarea nu este necesară, în funcție de aplicație. Este posibil să păstrați tamponul fosfat de sodiu la temperatura camerei, dar pentru a preveni creșterea bacteriilor, se recomandă păstrarea pe termen lung a tamponului nesteril în frigider. Sărurile din soluțiile stoc concentrate pot precipita atunci când sunt răcite, așa că înainte de utilizare se recomandă încălzirea soluției concentrate la temperatura camerei și așteptarea până când precipitatul este complet dizolvat.

Note

Vezi si

Fundația Wikimedia. 2010.

Soluție salină tamponată cu fosfat: 1 L de 10X

Descriere

PBS: 1 L de 10X (soluție salină tamponată cu fosfat) este o soluție tampon concentrată gata pentru diluare într-o soluție de lucru PBS 1X utilizată în mod obișnuit în cercetarea biologică. Tamponul PBS este ideal pentru menținerea unui pH constant și, deoarece este izotonic și netoxic pentru celule, poate fi utilizat într-o mare varietate de aplicații biologice. PBS este frecvent utilizat ca tampon de spălare și diluare și este, de asemenea, utilizat pentru a lua un spectru de referință atunci când se măsoară adsorbția proteinelor.

Utilizare

Înainte de utilizare, se diluează într-o soluție 1X și se filtrează printr-un filtru de 0,22 µm într-un balon steril. Produce 10 L de tampon PBS 1X cu o concentrație de tampon fosfat de 0,01 M, 0,027 M clorură de potasiu, 0,137 M clorură de sodiu și 1,76 mM fosfat de potasiu. pH-ul soluției de PBS va fi de aproximativ 7,4.
. Dacă tamponul este utilizat în aplicațiile de cultură celulară, poate fi necesară sterilizarea soluției. Tamponul pre-diluat poate fi distribuit în alicote și sterilizat prin autoclavare (20 min, 121°C, ciclu lichid).
. PBS poate fi păstrat la temperatura camerei, dar soluțiile nesterile pot justifica refrigerare pentru a preveni creșterea bacteriilor în timp. Soluțiile stoc concentrate pot precipita când sunt răcite și trebuie păstrate la temperatura camerei până când precipitatul s-a dizolvat complet înainte de utilizare.

Informații tehnice

Informatii despre comanda

Domeniu de utilizare:	Productie:	Santa Cruz
	Metodă:
	Volum:	1 l
	Pisică. număr:	sc-24946
Pret (cu TVA 20%):	la cerere	Adaugă in coş
Nume: tampon PBS (soluție salină tamponată cu fosfat), 10X, 1 L / Soluție salină tamponată cu fosfat: 1 L de 10X. Notă: Specificitatea speciei: . Descriere: . Aplicație: . Livrare pe gheață albastră, păstrare la temperatura camerei,

Reactivii de calitate chimică sunt utilizați pentru prepararea soluțiilor tampon. si grad analitic, special pregatit. Prepararea reactivilor se realizează după cum urmează.

Fosfat de potasiu monosubstituit, KH2PO4 , greutate moleculară 136,09. 100 g de medicament se dizolvă atunci când este încălzit până la fierbere în 150 ml de apă. Soluția se filtrează în timp ce este fierbinte. Cu agitare constantă, filtratul este răcit la 10 ºС. Apoi adăugați 150 ml de alcool etilic. Cristalele eliberate în timpul agitării constante a filtratului sunt filtrate folosind o pâlnie de aspiraţie şi recristalizate în aceleaşi condiţii; cristalele sunt uscate la greutate constantă la 105…110 ºС. Dacă există un medicament cu un conținut de substanță principală în intervalul 99,9...100,0%, nu se efectuează nicio pregătire preliminară a substanței.

Fosfat de sodiu disubstituit, Na2HP04.12H20, greutate moleculară 358,12. Există două moduri de a prepara medicamentul.

a) 150 g de medicament se dizolvă în 150 ml apă când este încălzit la 100 0 C. Soluția este filtrată fierbinte și după răcire, cristalele precipitate sunt filtrate. Recristalizarea se repetă prin încălzire la 100 ºС. Medicamentul recristalizat este încălzit într-o ceașcă de porțelan într-o baie de apă cu agitare continuă până când medicamentul este complet uscat. Sarea rezultată este uscată într-un desicator peste clorură de calciu topită timp de 24 de ore. Se verifică conţinutul de substanţă principală din preparatul recristalizat (Na 2 HPO 4 · 2H 2 O). Pentru a face acest lucru, aproximativ 0,5000 g de medicament sunt dizolvate în 50 ml de apă, se adaugă 2...3 ml de soluție saturată de clorură de sodiu și se titrează cu soluție de acid clorhidric 0,1 N în prezența unui indicator roșu de metil. Dacă este necesar, faceți ajustări la dimensiunea eșantionului. 1 ml de soluție de acid clorhidric exact 0,1 N corespunde la 0,0178 g de Na2HP042H2O.

b) 75 g de medicament se dizolvă în 250 ml de apă încălzită la 60 ºС. Soluția este filtrată în timp ce este fierbinte, filtratul este răcit cu agitare constantă la 10 ºС. Cristalele precipitate sunt filtrate folosind o pâlnie de aspiraţie şi recristalizate în aceleaşi condiţii. Sarea rezultată este mai întâi uscată la o temperatură care nu depășește 30 ºС timp de 24 de ore, apoi se continuă să se usuce într-un cuptor la 50 ºС timp de 3...4 ore și, în final, la 120±5 ºС până la o greutate constantă, prevenind sarea. de la topire. După uscare, sarea are compoziția Na2HP04.

După prepararea reactivilor, se prepară soluții inițiale de fosfat de potasiu monosubstituit și fosfat de sodiu dibazic.

O probă de fosfat de potasiu anhidru monosubstituit KH2PO4 cu o greutate de 9,078 g este dizolvată în apă și volumul soluției este ajustat la 1 litru. Pentru a stabiliza soluția, adăugați 3...4 picături de toluen.

O probă de Na2HP04.12H2O disubstituit cu fosfat de sodiu, cântărind 11,876 g, este dizolvată în apă şi volumul soluţiei este ajustat la 1 litru. Pentru a stabiliza soluția, adăugați 3...4 picături de toluen.

Soluțiile tampon fosfat cu pH de la 4,94 la 9,18 sunt preparate din soluțiile inițiale în conformitate cu Tabelul A.2.

Tabelul A.2 - Soluție tampon fosfat cu pH 4,94...9,18

Data adaugarii: 2015-08-06 | Vizualizari: 4058 |

PBS (soluție salină tamponată cu fosfat) este un tampon utilizat în mod obișnuit pentru colorarea imunohistochimică și este utilizat în mod obișnuit în cercetarea biologică. Concentrația de osmolaritate și ionii soluțiilor corespunde concentrației corpului uman (izotonică).

PBS este o soluție pe bază de apă care conține fosfat acid de sodiu, clorură de sodiu și, în unele cazuri, clorură de potasiu și fosfat dihidrogen de potasiu.

Colorarea prin imunofluorescență pentru IHC

Colorarea prin imunofluorescență a fost prima metodă de colorare imunohistochimică (IHC). Pe baza reacției de legare antigen-anticorp, antigenele devin vizibile folosind coloranți fluorescenți atunci când sunt conjugați cu anticorpi. Procesul are loc atunci când este activat de lumina de excitație cu o anumită lungime de undă sub un microscop cu fluorescență. Imunohistochimia se referă la procesul de detectare a antigenelor (cum ar fi proteinele) în celulele unei secțiuni de țesut folosind principiul anticorpilor care se leagă în mod specific la antigenele din țesuturile biologice.

Folosind soluție salină tamponată cu fosfat (PBS)

Soluția salină tamponată cu fosfat are multe utilizări, deoarece este izotonică și netoxică pentru majoritatea celulelor. Poate fi folosit pentru a dilua substanțe și este folosit pentru a clăti recipientele care conțin celule. PBS poate fi utilizat ca diluant în metodele de uscare a biomoleculelor, deoarece moleculele de apă din el vor fi structurate în jurul substanței (cum ar fi o proteină) pentru a o „usca” și a o imobiliza pe o suprafață solidă.

O peliculă subțire de apă care se leagă de substanță previne denaturarea sau alte modificări conformaționale. Tampoanele carbonatice pot fi folosite în același scop, dar cu o eficiență mai mică. PBS poate fi, de asemenea, utilizat pentru a furniza un spectru de referință atunci când se măsoară adsorbția proteinelor în elipsometrie.

Pregătirea PBS

Există multe moduri diferite de a pregăti PBS.

Unele formule nu conțin potasiu, în timp ce altele conțin calciu sau magneziu. Rețeta tampon de mai jos, care este relativ simplă, este pentru o soluție stoc de 10X de PBS (0,1 M). De asemenea, este posibil să adăugați Tween. Întregul proces durează aproximativ 10 minute.

Cum se prepară soluție salină tamponată cu fosfat (PBS)

1. Se cântăresc următoarele: 10, 9 g fosfat de sodiu dibazic anhidru (Na2HPO4), 3,2 g fosfat de sodiu monobazic anhidru (NaH2PO4) și 90 g clorură de sodiu (NaCl).
2. Se dizolvă toate cele de mai sus în doar 1 litru de apă distilată.
3. Ajustați valoarea pH-ului la 7. 4.
4. Se aduce soluția la un volum final de 1 litru.
5. (nu este necesar). Pentru o soluție care conține 0,5% Tween 20, adăugați 5 ml de Tween 20 la soluția de 1 L.
6. Diluați 10X înainte de utilizare și ajustați pH-ul dacă este necesar.

• Depozitați la temperatura camerei.
• Reactanții non-femurali pot fi înlocuiți, dar va trebui să recalculați masa adecvată a fiecăruia pentru a găzdui moleculele de apă adăugate.

De ce aveți nevoie pentru a crea un tampon PBS?

• Fosfat de sodiu monofazat (anhidru)
• Fosfat de sodiu dibazic (anhidru)
• Clorura de sodiu
• Barci cu cântare și greutăți
• Agitator magnetic și agitator > sondă de pH, soluții calibrate și adecvate pentru ajustarea pH-ului
• balon cotat de 1 L
• Tween 20 (opțional)